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방법 논문

발암 물질 유발 Murine 방광 종양의 자기 공명 영상 평가

10K 조회수

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DOI:

10.3791/59101

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2019년 3월 29일

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이 논문에서

요약

Murine 방광 종양 N-butyl-N-(4-hydroxybutyl) nitrosamine 발암 물질 (BBN)으로 유발 됩니다. 방광 종양 생성은 이기종; 따라서, 종양 짐의 정확한 평가 랜덤 실험적인 치료를 하기 전에 필요 하다. 여기 우리는 빠르고, 신뢰할 수 있는 MRI 프로토콜 종양 크기 및 단계 평가를 제시.

초록

Murine 방광 종양 모델은 새로운 치료 옵션의 평가 위해 중요 합니다. 그들은 밀접 하 게 인간의 종양의 게놈 프로필을 복제 하 고, 셀 모델과 xenografts 달리 제공 하기 때문에 N-butyl-N-(4-hydroxybutyl) nitrosamine (BBN) 발암 물질을 유발 하는 방광 종양은 셀 라인 기반 모델을 통해 유리는 immunotherapies의 연구에 대 한 좋은 기회. 그러나, 방광 종양 생성은 이기종; 따라서, 종양 짐의 정확한 평가 랜덤 실험적인 치료를 하기 전에 필요 하다. 여기에 설명 된 BBN 마우스 모델 및 방광 암 종양 부담에서 vivo에서 신속 하 고 신뢰할 수 있는 자기 공명 (MR) 시퀀스 (진실한 FISP)를 사용 하 여 평가 하는 프로토콜입니다. 이 메서드는 간단 하 고 신뢰할 수 있는 초음파, 달리 미스터 연산자 독립적 이며 간단 후 수집 이미지 처리 및 검토에 대 한 수 있습니다. 방광의 축 이미지를 사용 하 여, 종양 및 방광 벽을 따라 관심 영역 분석 방광 벽 및 종양 영역의 계산 하실 수 있습니다. 이 측정 방광 무게 비보 전 상관 (rs= 0.37, p = 0.009) 및 종양 단계 (p = 0.0003). 결론적으로, BBN immunotherapies의 평가 대 한 이상적인 이기종 종양 생성 하 고 MRI 수 신속 하 고 안정적으로 실험적인 치료 무기를 랜덤 전에 종양 부담 평가.

서론

방광 암은 다섯 번째 가장 일반적인 암 전반적으로, 약 80000 새로운 사례 및 미국 20171에서에서 16000 죽음에 대 한 책임. 약 30 년 후 방광 암2의 조직의 치료에 상당한 진보가 없이, 최근 안티-PD-1과 반대로 PD L1 검사점 억제제 시험 고급 환자에서 흥미진진 하 고 때때로 튼튼한 응답 증명 urothelial 암3,,45. 그러나, 환자의 단지 대략 20%는 이러한 치료에 대 한 객관적인 응답을 표시 하 고 추가 연구 immunotherapy 방광 암 환자에서의 효과적인 사용을 확장 하는 데 필요한.

Murine 방광 암 모델 소설 치료6,7의 전 임상 평가 있는 중요 한 도구입니다. 때 다른 치료에 쥐 randomizing 종양 크기를 제어 하기 위해 종양 부담 평가 및 치료 그룹 간의 제어 수 해야 합니다. 이전 연구는 사용 초음파 또는 생물 발광 orthoto....

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프로토콜

여기에 설명 된 모든 메서드는 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC) 노스웨스턴 대학에 의해 승인 되었습니다.

1입니다. BBN와 종양의 유도

  1. 각 최소 6 주 오래 된 남성 C57/BL6 마우스를 얻을.
    참고: 남성 쥐 보다 신속 하 고 일관 되 게 여성 쥐14,15보다 방광 암 개발.
  2. 식 수에 0.05%의 복용량 N-nitrosobutyl(4-hydroxybutyl) 아민 (BBN)을 추가 합니다. 불투명 용기에 저장 하 고 광고 libitum 마우스16을 식 수로 제공.
    참고: 발암 물질17떨어집니다 BBN 솔루션 분명 컨테이너에 저장.
  3. 두 번 주당 0.05 %BBN 물을 변경 합니다.
  4. 혈 뇨, 회사 방광 및 대 중을 포함 하 여 방광 종양과 관련 된 고민의 흔적을 검사 하 여 동물을 모니터링 합니다. 마우스 두 번 주당 또는 현지 IACUC 지침에 따라 검사 합니다.
  5. 종양 노출1816 ....

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결과

(그림 1) 설명 된 프로토콜을 사용 하 여, 방광 종양 C57/B6 남성 생쥐에서 유도 했다. MRI 16 주에 수행 하 고 쥐 20 주에 안락사 되었다. Ex vivo 방광 (BW)에 대 한 가중치 각 마우스 기록 되었다. 슬라이드는 hematoxylin와 오신, 스테인드 했다 그리고 모든 조직학 슬라이드 종양 단계를 검토 했다.

미스터를 사용 하 여 종양 부담 분석, 방광 벽 내부 루멘 (즐에서에) 방광 벽 외부 루멘 (즐밖으로) (구벽) 방광 벽의 두께 계산 하에서 공제 되었다 (그림 2). 대표 진실한 FISP 미스터 이미지, 방광 벽 3 차원 복원 및 컨트롤 마우스 (즉, .......

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토론

종양 모델의 정확한 이미지는 적절 한 사전 안락사 준비 및 실험적인 치료의 개시 전에 동물 랜덤 필요 합니다. 여기에 제시 된 절차를 사용 하 여, 우리 방법론 (1) 방광 종양 BBN 발암 물질을 사용 하 여 생성 하 고 (2) 충 방광 종양 부담 크게와 씨는 씨에서 파생 된 영역 측정 (구벽) 상호 사용을 보여 줍니다. 방광 무게 비보 전 pathologic 종양 단계와 관련 된다.

높은 공간 해상도 (진실한 FISP)와 높은 진단 품질에서 짧은 수집 시간 빠른 이미징 접근을 채택 하 여 우리 랜덤 치료 전에 종양 개발의 중간 단계에서 쥐의 높은 처리량 분석을 수행할 수 있습니다. 우리의 보고서는 이전 보고서와 일치 미스터의 셀 라인 기반 종양의 이미징9,12 임 플 란 트 및 큰 주제 번호 약물 연구를 최적화 하는 도구로 서의 잠재력을.......

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공개 사항

저자는 공개 없다.

감사의 글

J. J. M. 노 병 건강 행정 공로 의해 자금 부여 BX0033692-01. J. J. M. 로버트 H. Lurie 종합 암 센터의 노스웨스턴 대학에 암 연구에 대 한 존 P. 핸 슨 재단에 의해 지원 됩니다. 우리는 MRI 수집 제공 및 처리에 대 한 변환 이미징에 대 한 중심을 감사 합니다. 자금 소스 원고 또는 게시를 위해 제출 하는 결정의 쓰기에 아무 역할을 했다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
C57BL/6 마우스The Jackson Laboratory664마우스
N-부틸-N-(4-하이드록시부틸)니트로사민 발암물질(BBN)TCI AmericanB0938발암물질
0.9% 생리식염수Hospira, IncNDC 0409-488-02
이소플루란Piramal HealthCare60307-120-25마취제
7Tesla ClinScan MRIBrukerNA전용 소동물 이미징 MRI
SyngoSiemensNAMR 통합 이미징 소프트웨어
모델 1030 모니터링 및 게이팅 시스템Small Animal Instruments, Inc. (SAII)NA소동물 생리학적 모니터링
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R v3.4.2The R Project for Statistical ComputingNA통계 소프트웨어
R 패키지 pROC v1.10.0.통계 컴퓨팅을 위한 R 프로젝트NAROC 분석

참고문헌

  1. Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer Statistics, 2017. CA: A Cancer Journal for Clinicians. 67 (1), 7-30 (2017).
  2. Abdollah, F., et al. Incidence, survival and mortality rates of stage-specific bladder cancer in United States: a tre....

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