여기에 제시된 프로토콜은 직감 미생물군유전체 분석을 위한 케이쿰 함량의 수집에 이어 측면 유체 타악기 장치를 사용하여 확산 외상성 뇌 손상을 유도하는 프로토콜이다.
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방법 논문
쥐에서 외상성 뇌 손상 후 Caecum Microbiota에서 변경 을 조사
* These authors contributed equally
이 논문에서
요약
초록
증가하는 기록은 microbiota 창자 두뇌 축이 뇌 질환의 병인에 있는 중요한 역할을 한다는 것을 보여줍니다. 여러 연구는 또한 외상성 뇌 손상 창 자 microbiota에 변화를 일으킬 보여줍니다. 그러나, 두뇌 창 자 축의 양방향 조절 기본 메커니즘 알 수 없는 남아. 현재, 몇몇 모형은 외상성 두뇌 상해 후에 창자 microbiota에 있는 변경을 공부를 위해 존재합니다. 따라서, 제시된 연구 결과는 직감 microbiome에 있는 변경을 조사하기 위한 상해 다음 의 외액 타악기 장치 및 caecum 견본의 분석을 사용하여 외상성 뇌 손상을 유도하기 위한 프로토콜을 결합합니다. 외상성 뇌 손상 후 창 자 microbiota 조성물의 변경 16S-rDNA 시퀀싱을 사용 하 여 결정 됩니다. 이 프로토콜은 장내 미생물과 외상성 뇌 손상 사이의 관계를 연구하기위한 효과적인 방법을 제공합니다.
서론
외상성 뇌 손상 (TBI)은 글로벌 공중 보건 문제이며 젊은 성인의 사망과 장애의 주요 원인1,2. TBI는 매년 많은 죽음을 일으키고, 생존자는 신체적, 정신적, 정서적, 인지 적 장애의 다양한 경험. 따라서 TBI는 환자의 가족 및 사회 자원에 무거운 부담입니다. TBI는 외상의 시간에 발생하는 기본 뇌 손상과 초기 부상 다음 달에 시간을 개발하는 보조 뇌 손상을 모두 포함한다. 이차 뇌 손상은 여러 생화학 적 캐스케이드에 의해 매개되며, 이는 뇌에 해로울뿐만 아니라 위장 시스템을 포함한 다양한 장기 시스템에 상당한 부정적인 영향을 미칩니다3.
현재 동물 실험에서 TBI를 유도하는 세 가지 모델이 있습니다: 유체 타악기 손상, 대조피질 충격(CCI), 체중 감소 가속. 측면 유체 타악기 손상 (LFPI)은 확산 뇌 손상 (DAI)를 확립하기 위해 가장 일반적으로 사용되는모델4. 이 장치는 손상되지 않은 경도에 짧은 유체 압력 펄스를 적용하여 두개골 절제술을 통해 뇌 손상을 일으킵니다. 이 펄스는 진자의 파업에 의해 생성됩니다. LFPI는 TBI 연구를....
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프로토콜
수행 된 모든 절차는 절강 대학의 실험 동물 윤리위원회에 의해 승인되었다. 수술에 사용되는 모든 기기와 재료는 멸균됩니다. TBI 프로세드에는 약 20분이 소요됩니다.
1. 동물 관리
- 이 실험에서 5-6주 령 남성 C57BL/6J 마우스(체중 20-25 g)를 사용하십시오.
- 12 h/12 h의 빛/어두운 주기에 마우스를 유지 하 고 그들은 음식과 물 광고 리비툼을 받을 수 있는지 확인. 연구 기간 내내 샴과 TBI 그룹 모두에게 동일한 양의 음식과 물을 제공합니다.
- 동물의 고통과 불편함을 최소화하기 위해 모든 노력을 기울인다.
2. 외상성 뇌 손상의 유도
- 마취를 위해 케타민 (80-100 mg/kg)/자일라진(10 mg/kg) IP를 주입하십시오. 눈 반사 또는 통증 반사를 사용하여 마취의 깊이를 테스트합니다. 인공 눈물이나 윤활유 눈 연고를 사용하여 눈이 마르지 않도록 하십시오.
- 마취 후, 마우스를 경향이있는 위치에 놓습니다. 온도 조절 식 가열 패드를 사용하여 수술 중 37 °C에서 온도를 유지하고 TBI 후 30 분 동안 유지하십시오.
- 절개 부위의 모발을 면도합니다.
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결과
TBI의 설립은 그림 1에나와 있습니다. 마취 및 소독 후, 두피를 상각시켰다(도 1A). 개두량(직경 3 mm)을 전동 드릴로 오른쪽 정수리 피질 위에 두개골 내로 트레핀하고, 두라를 그대로 유지하였다(도1B,C). 플라스틱 부상 캐뉼라를 뼈 창 위에 놓고 치과 아크릴을 사용하여 두개골에 시멘트(그림 1D).
측면 유체 타악기의 절차는 도 2에도시되어 있습니다. 장치를 시작하기 전에 꾸준한 신호를 줄 때까지 약 10 펄스를 전달하여 테스트했습니다. 진자의 각도는 약 2.......
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토론
여기에 제시된 것은 마우스에서 TBI 후에 세칼 미생물의 변화를 결정하는 간단하고 효율적인 프로토콜이다. 뇌 손상의 유도 및 caecum 내용 샘플의 수집은 프로토콜의 중요한 부분입니다.
연구원이 TBI를 따르는 창자 microbiota의 변경을 공부한 에도 불구하고, 이 연구 결과에 사용된 두뇌 상해는 CCI-8 및 무게 투하/충격 유도한 모형9이었습니다. 그러나, CCI 모형은 주로 두뇌 타박상을 복제하고, 무게 투하 모형은 약간 부정확성 때문에 손해를 입을 수 있습니다. 기존의 모든 뇌 손상 모델 중에서, LFPI는 가장 일반적으로 사용되는 모델이며, 이는 초점 및 확산 뇌 손상11,12를 포함하고 임상 TBI 환자에서 관찰된 많은 중요한 특징을 복제한다. 프로세스 전반에 걸친 주요 단.......
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공개 사항
저자는 진심으로 그녀의 기술 지도에 대한 바오홍 왕에게 감사드립니다.
감사의 글
저자는 공개 할 것이 없다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| DNA 분리 키트 | QIAGEN | 51604 | 대변 샘플에서 게놈 DNA의 빠른 정제 |
| 를 위해 유전자 분석 서비스 | GENEWIZ | 유전자 분석 서비스 | |
| 가열 패드 | Shanghai SAFE Biotech Co. | TR-200 | 가열 패드 |
| 인젝터 | Zhejiang University | 인젝터 | |
| LFPI 장치 | Virginia Commonwealth University | FP302 | LFPI 장치 |
| 마이크로 두개골 드릴 | RWD 생명 과학 | 78061 | 마이크로 두개골 드릴 |
| 포비돈 요오드 | 과 대학 최초의 제휴 병원, Zhejiang University | 포비돈 요오드 |
참고문헌
- Cheng, P., et al. Trends in traumatic brain injury mortality in China, 2006-2013: A population-based longitudinal study. 14, e1002332(2017).
- Maas, A. I. R., et al. Traumatic brain injury: integrated....
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재인쇄 및 허가
