초파리 멜라노가스터에서 내분비 장애를 테스트하는 방법

요약

내분비 파괴 물질 (EDC)은 유기체와 자연 환경에 심각한 문제를 나타냅니다. 드로소필라 멜라노가스터는 생체 내에서 EDC 효과를 연구하는 이상적인 모델을 나타낸다. 여기에서, 우리는 Drosophila에 있는 내분비 중단을 조사하는 방법을 제시합니다, fecundity에 EDC 효력을, 비옥, 발달 타이밍 및 비행의 수명을 해결하.

초록

최근 몇 년 동안 모든 유기체와 환경이 내분비 장애 화학 물질 (EDC)으로 알려진 호르몬과 같은 화학 물질에 노출된다는 증거가 증가하고 있습니다. 이러한 화학 물질 내 분 비 시스템의 정상적인 균형을 변경 하 고 부작용으로 이어질 수 있습니다., 인간 인구에 호르몬 장애의 증가 뿐만 아니라 또는 방해 성장 및 야생 동물 종에서 감소 된 재생산. 일부 EDC의 경우, 문서화 된 건강 효과 및 그들의 사용에 제한이 있다. 그러나, 그들 대부분에 대 한, 여전히 이 의미에서 과학적 증거가 있다. 전체 유기체에서 화학 물질의 잠재적 인 내분비 효과를 확인하기 위해, 우리는 적절한 모델 시스템뿐만 아니라 과일 파리, Drosophila 멜라 노가스터에서테스트해야합니다. 여기에서 우리는 초파리에 있는 내분비 중단을 공부하기 위하여 생체 내비염에서 상세한 보고, fecundity/불임에 EDC 효력을, 발달 타이밍 및 비행의 수명을 해결하. 지난 몇 년 동안, 우리는 17-α-에티닐에스트라디올 (EE2), 비스페놀 A (BPA) 및 비스페놀 AF (BPA F)에 노출의 효력을 조사하기 위하여 이 Drosophila 생활 특선 특성을 이용했습니다. 전부, 이 asays는 모든 Drosophila 생활 단계를 커버하고 가능한 모든 호르몬 중재프로세스에 있는 내분비 중단을 평가하는 가능하게 했습니다. fecundity/fertility 및 발달 타이밍 측정은 각각 비행 생식 성과 및 발달 단계에 EDC 충격을 측정하는 데 유용했습니다. 마지막으로, 수명 분석성인에 만성 EDC 노출을 관련시키고 그들의 생존을 측정했습니다. 그러나, 이러한 생활 특성또한 신중 하 게 제어 했다 몇 가지 실험 요인에 의해 영향을 받을 수 있습니다. 그래서, 이 작품에서는, 우리는 이 검소의 적당한 결과를 위해 우리가 최적화한 일련의 절차를 건의합니다. 이 방법은 과학자가 어떤 EDC든지를 위한 내분비 중단을 설치하거나 Drosophila에 있는 다른 EDC의 혼합물을 위해, 효력에 책임 있는 내분비 기계장치를 확인하기 위하여, 추가 에세이가 필요할 수 있었습니다.

서론

인간의 활동은 유기체와 자연 생태계에 대한 심각한 문제를 나타내는 화학 물질의 엄청난 양의 환경에 방출되고있다¹. 이러한 오염 물질 중 약 1,000 개의 다른 화학 물질이 내분비 시스템의 정상적인 균형을 바꿀 수 있다고 추정됩니다. 이 속성에 따르면, 그들은 내분비 파괴 화학 물질 (EDC)로 분류됩니다. 구체적으로, 내분비 학회에 의한 최근의 정의에 기초하여, EDC는 "호르몬 작용의 어떤 양상든지 방해할수 있는 외인성 화학물질, 또는 화학물질의 혼합물"2 . 지난 3 년 동안, EDC가 동물과 식물의 번식과 발달에영향을 미칠 수 있다는 과학적 증거가 증가하고있다 3,^{4,5,6,7, 8}. 또한, EDC 노출은 암, 비만, 당뇨병, 갑상선 질환 및 행동 장애를 포함하는 일부 인간 질병의 증가 보급과 관련이^있다9,....

프로토콜

1. 음식 준비

1. 재고 유지 및 애벌레 성장을 위해 3 % 분말 효모, 10 % 자당, 9 % 미리 조리 된 옥수수 가루, 0.4 % 한천을 포함하는 옥수수 가루 배지를 사용하십시오.
   1. 효모 30g을 수돗물 100 mL에 넣고 끓여서 15 분 동안 끓입니다.
   2. 별도로, 미리 조리된 옥수수가루 90g, 설탕 100g, 한천 4g을 수돗물 900 mL에 잘 섞습니다.
   3. 용액을 끓이고 불을 낮추고 5 분간 계속 저어줍니다.
   4. 5분 후, 뜨거운 효모 용액을 넣고 15분 간 더 끓입니다.
   5. 열원을 끄고 용액을 약 60°C로 식힙니다.
   6. 에탄올에 메틸 4-하이드록시벤조에 5 mL/L을 넣고, 완전히 섞어서 10분 간 기다립니다.
      참고: 고농도의 살균제가 유충에게 치명적일 수 있다는 점을 감안할 때 메틸 4-하이드록시벤조이트(methyl 4-hydroxybenzoate)의 양에 주의하십시오.
   7. 바이알/병에 매 개체를 분배합니다: 각 플라이 바이알(25mm x 95mm)에 8mL, 각 플라이 바이알(22mm x 63mm)에 3mL, 각 플라이 보틀(250mL)에 60mL를 분배합니다.

결과

이 섹션에서는 위의 프로토콜의 주요 단계가 단순화된 체계의 형태로 보고됩니다. 파리가 불쾌한 화합물을 피하는 경향이 있다는 것을 감안할 때, 가장 먼저 해야 할 일은 선택한 EDC의 맛을 분석하는 것입니다. 이는 식품 착색제(예를 들어, 적색 식품 염료 제40호)(35)를 다양한 용량으로 또는 단독으로 선택된 EDC로 보충된 식품과 혼합함으로써 행해질 수 있다. 이러한 매체에 공급된 파리는 입체현미경으로 검사되고 음식 섭취량은 복부착색에 의해 추정됩니다(그림 1). 전형적인 바람직한 상황은 2명의 성인 암컷을 가진 그림 1에 도시됩니다: 선택된 EDC를 포함하는 매체에 공급하고 하나는 EDC를 포함하지 않는 매체에, 둘 다 그들의 복부에 있는 동일 착색을 제시합니다.

그것은 널리 받아 들여졌다 EDC, 자연 호르몬 처럼, 매우 낮은.......

토론

과일 플라이 D. 멜라노가스터는 DBP^28,BPA, 4-NP, 4-tert-OP^29,MP^30,EP^{31 과 같은 환경 EDC의 잠재적 효과를 조사하기 위해 생체 내 모델 시스템으로 광범위하게 사용되고 있습니다. 32}, DEHP³³및 EE2³⁴. 몇 가지 이유가 연구의이 분야에서 모델로 그것의 사용을 주도 했다. 모델 시스템으로 그것의 명백한 이점 외에도, Drosophila는 인간과 유전자 보존의 높은 수준을 공유, 있는 초파리 EDC 검사 예측 또는 인간의 건강에 대 한 잠재적인 효과 제안에 도움이 될 수 있습니다. 또한, Drosophila는 모든 생태계에서 널리 표현되고 EDC의 해로운 영향에.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
17α-Ethinylestradiol	Sigma	E4876-1G
한천 Drosophila 매체	BIOSIGMA	789148
Bisphenol A	Sigma	239658-50G
Bisphenol AF	Sigma	90477-100MG
옥수수 가루	CA' BIANCA
Diethyl 에테르	시그마
초파리 바이알	BIOSIGMA	789008	25 mm x 95 mm
초파리 바이알	BIOSIGMA	789009	29 mm x 95 mm
초파리 바이알	Kaltek	187	22 mm x 63 mm
배아 수집 케이지	플렉		, 끝이 열려 있고 다른 쪽 끝은 슬롯이 삽입을 허용하는 직사각형 베이스로 닫혀 있습니다. 에탄올을 놓기 위한 특수 트레이
	FLUKA	2860
Etherizer	Crafts		면 마개가 있는 원통형 유리 용기
유리 병			250mL 병
유리 바이알	Microtech	ST 10024	플랫 바닥 튜브 100 x 24
핸드 블렌더 Pimmy	Ariete		푸드 프로세서
인스턴트 성공 효모	ESKA		분말 효모
배치 트레이	제작		시 글라스 트레이 (11cm x 2.6cm)
Methyl4-hydroxybenzoate	SIGMA	H5501
Petri Dish	Falcon	351016	60x5
Red dye no. 40	SIGMA	16035
LED 조명이 있는 실체 현미경	Leica		S4E
설탕	HIMEDIA	MB025
토마토 소스	Cirio

시글라스 실린더(12.5 mm x7 cm)를 제작 하며 플렉에 를 놓기 위해 매체를 붓습니다