Kliniskt, östrogenbrist hos menopausala kvinnor kan förvärra förekomsten av lipid störningar och åderförkalkning. Vi etablerade en in vivo östrogenbrist modell av bilaterala ovariektomi via en dubbel dorsal-lateral snitt i apoE-/- möss. Musmodellen är tillämplig för screening exogena östrogen behandlingar av kardiovaskulär dysfunktion efter klimakteriet.
Postmenopausala kvinnor har större risk att drabbas av hjärt-kärlsjukdomar än premenopausala kvinnor. Honmöss ovariectomized (OVX) vid avvänjning Visa ökade aterosklerotiska lesioner i aorta jämfört med honmöss med intakt äggstocksfunktion. Emellertid, laboratorie modeller med östrogen-brist möss med åderförkalkning-benägen status saknas. Detta underskott är avgörande eftersom klinisk östrogenbrist hos menopausala kvinnor kan förvärra förekomsten av redan existerande eller pågående lipid störningar och åderförkalkning. I denna studie, vi etablera en in vivo östrogen-bristfällig musmodell av bilaterala ovariektomi via en dubbel dorsal-lateral snitt i apolipoprotein E (apoE)-/- möss. Vi jämför sedan effekterna av 17β-estradiol och pseudoprotodioscin (PPD) (en fytoöstrogen) peroralt administreras via hasselnöt sprids. Vi finner att även PPD utövar viss effekt på att minska den slutliga kroppsvikten och plasma TG i OVX apoE-/- möss, den har anti-aterosklerotisk och hjärt-skyddande kapacitet jämförbar med dess 17β-estradiol motsvarighet. PPD är en fytoöstrogen som har rapporterats att utöva anti-tumör egenskaper. Sålunda, den föreslagna metoden är tillämplig för screening fytoöstrogener via peroral administrering att ersätta traditionell hormonersättningsbehandling hos postmenopausala kvinnor, som har rapporterats ha potentiellt skadliga tumorigenetiska Kapacitet. Peroral administrering via hasselnöt sprids är noninvasiv, vilket gör den allmänt tillämplig på många patienter. Denna artikel innehåller steg-för-steg-demonstrationer av bilaterala ovariektomi via dubbel dorsala-laterala snittet i apoE-/- möss och peroral 17β-estradiol eller fytoöstrogen hormon Replacement via hasselnöt sprids. Plasma lipid-och kardiovaskulär funktion analyser med ekokardiografi följa.
Epidemiologiska och kliniska studier har visat att postmenopausala kvinnor är betydligt större risk för hjärt-kärlsjukdom än premenopausala kvinnor1,2. Hormonersättningsbehandling (HRT) kan minska den relativa risken för hjärt-kärlsjukdom till 0,37-0,793. Bland andra komplikationer, åderförkalkning orsakad av hjärt-kärlsjukdomar är den vanligaste dödsorsaken i världen4. Emellertid, laboratorie modeller med östrogen-brist möss som uppvisar åderförkalkning liggande status saknas. Detta protokoll ger en in vivo östrogenbrist musmodell för screening exogena östrogen behandlingar av kardiovaskulär dysfunktion efter klimakteriet.
Tidigare studier visar att tillämpningen av OVX i aterosklerotiska gnagare matas en hög kolesterol diet kan efterlikna postmenopausala kvinnor som lider av åderförkalkning5,6,7,8. En reproducerbar och bekväm djurmodell som liknar det aterosklerotiska tillståndet hos kvinnor i klimakteriet är grunden för EXOGEN östrogen forskning. Här, en dubbel dorsala-laterala snitt av bilaterala ovariektomi tillämpades i åderförkalkning-benägna apolipoprotein E knockout (APOE-/-) möss9,10. Jämfört med mellersta buken eller dorsala snitt, dubbel dorsala-laterala snitt är en enklare, mindre tidskrävande metod som kan undvika svår bukhålan vidhäftning och inflammation. Peroral administrering via hasselnöt sprids (se tabell över material) är noninvasiv och bekväm, vilket gör den allmänt tillämplig som en långsiktig administration läge11. Långsam frisättning pellets implantation är också populärt6. Emellertid, implantat mayaggravate förekomsten av infektion särskilt hos möss som utsätts för OVX. Andra noninvasiv administration lägen, såsom muntliga sondrör och vatten administration, har också många nackdelar. Oral sonal vanligtvis stress möss och kan orsaka esofagus skada. Administrera hormonet via dricksvatten är mycket fördelaktigt; emellertid, tillsats av DMSO som ett emulgeringsmedel är oundvikligt som exogena östrogener är olösliga i vatten. Här, vi valde peroral 17β-estradiol eller fytoöstrogen hormon ersättare via hasselnöt sprids för långsiktig administrering.
Nyligen, den gynnsamma effekten av HRT på det kardiovaskulära systemet av postmenopausala kvinnor har ifrågasatts i Women ‘ s Health Initiative (WHI) prövningar12. Å ena sidan utövar exogena östrogen ensamt en gynnsam effekt på det kardiovaskulära systemet; å andra sidan, det kan kombinera med metohydroxiprogesteron acetat att öka risken för kardiovaskulära händelser. Mer allvarligt, HRT kan leda till bröst-och livmoder tumör progression, och denna effekt har markant begränsat dess användning13,14. Mer intresse har inriktats på de kardiovaskulära-skyddande effekterna av exogena östrogener som saknar mitotisk aktivitet i tumörceller15,16,17. Flera studier på människor och djur tyder på att fytoöstrogener med strukturer som liknar östrogener kan spela en gynnsam roll i kardiovaskulär skydd15,18.
Således är syftet med det nuvarande arbetet (i) att bygga en in vivo östrogenbrist musmodell av bilaterala ovariektomi via en dubbel dorsal-lateral snitt i apoE-/- möss och (II) att jämföra de kardiovaskulära skyddande effekterna av peroralt administreras 17β-estradiol och pseudoprotodioscin (PPD), via hasselnöt sprids. 17β-estradiol är en typ av EXOGEN östrogen som tillhör kvinnliga könshormoner6,11,19. PPD, en steroid saponin och fytoöstrogen från Dioscorea växter, har tidigare rapporterats att utöva anti-tumör egenskaper20.
Den metod som beskrivs här är en musmodell som liknar lipid störningar och åderförkalkning ses hos kvinnor i klimakteriet. Det är väl dokumenterat att östrogenbrist hos postmenopausala kvinnor kan förvärra incidensen av redan existerande eller pågående hyperkolesterolemi med successivt komplexa och utbredda aterosklerostiska lesioner1. För att efterlikna den åderförkalkning-benägen status i kliniken, APOE-brist möss, en reproducerbar och bekväm källa till djur som att studera at…
The authors have nothing to disclose.
Detta arbete stöddes av National Natural Science Foundation i Kina (81202526 till J.X.), National Natural Science Foundation i Kina (81302769 till BS), Beijing Municipal Natural Science Foundation (47144226 till BS), den kinesiska postdoktorala Science Foundation (20110490325 till J.X.), och Ph.D. program Stiftelsen för undervisningsministeriet i Kina (20121106120031 till BS).
17β-estradiol, >98% | Sigma-Aldrich | E8875-250MG | Estrogen |
Disposable syringes (with 25G needles) | Hunan Luzhou Huikang Development Co., Ltd | 0.5*19TWLB | Cardiac bleeding |
High-cholesterol mouse diet | Huafukang Bio-Technology | N/A | 1.25% cholesterol, 0% cholate |
High-Resolution In Vivo Micro-Imaging System | VisualSonics | Vevo®770 | Measurements of intima-media thickness and cardiac dysfunction |
2-Methyl-2-butanol | Sigma-Aldrich | 152463-250ML | Preparation of avertin |
Micro Dissecting forceps, Curved 8mm | Kanghua Medical Equipment Co., Ltd | Surgical tools | |
Micro Dissecting forceps, Straight 8mm | Kanghua Medical Equipment Co., Ltd | Surgical tools | |
Micro Dissecting Scissors, Curved/Sharp 8mm | Kanghua Medical Equipment Co., Ltd | Surgical tools | |
Micro Dissecting Scissors, Straight/Sharp 8mm | Kanghua Medical Equipment Co., Ltd | Surgical tools | |
Monofilament suture 4-0 1/2 5*12 19mm | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Supplies Co., Ltd | R413 | Suture and ligation of the tissues |
Nut cream (Nutella) | Ferrero | N/A | Medium for peroral 17β-estradiol or PPD |
OptiVisor optical glass binocular magnifier | Dohegan Optical Company Inc. | N/A | Assistant of identifying the tissues during ovariectomy |
Phosphate-buffered saline at pH 7.4 | SIGMA | P3813 | Preparing 1 L saline |
Pro MultiLabel Microplate Reader | Tecan | Infinite M1000 | Plasma TC and TG determination |
Pseudoprotodioscin | Shanghai Winherb Medical S & T Development | W-0427 | CAS registry no. 102115-79-7 |
Rimadyl, 50 mg/mL | Pfizer Pharma GmbH | 462986 | Postoperative analgesia after ovariectomy |
Sesame oil | Sigma-Aldrich | S3547-1L | Dissolving the 17β-estradiol or PPD |
Solcoseryl Eye-Gel | Menarini, Solco Basle Ltd. | Eye protection during anesthesia | |
Stereo microscope | MCALON | MCL-6STV | Image of the intimal region of aorta |
Table model high speed centrifuge | SIGMA | 1-14K | Preparation of plasma |
Scissors, slight Curve (14cm) | Kanghua Medical Equipment Co., Ltd | Surgical tools | |
Scissors, straight Flat (14cm) | Kanghua Medical Equipment Co., Ltd | Surgical tools | |
Tissue forceps, serrated, slight Curve (14cm) | Kanghua Medical Equipment Co., Ltd | Surgical tools | |
Tissue forceps, serrated, straight Flat (14cm) | Kanghua Medical Equipment Co., Ltd | Surgical tools | |
Tribromoethanol | Sigma-Aldrich | T48402-5G | Preparation of avertin |
Triglycerides (TG) assay kit | Institute of Nanjing Jiancheng Biology Engineering | A110-1 | Plasma TG determination |
Total cholesterols (TC) assay kit | Institute of Nanjing Jiancheng Biology Engineering | A111-1 | Plasma TC determination |