Outils faits maison simples pour manipuler les mouches des fruits—Drosophila melanogaster
Summary
Décrit ici est l’utilisation de plusieurs outils faits maison pour transférer, refroidir et tuer d’adultes Drosophila, ainsi que pour nettoyer les flacons de culture du verre et de recueillir des œufs. Ces outils sont faciles à fabriquer et sont plutôt efficaces dans la manipulation de La Drosophila.
Abstract
La mouche des fruits, Drosophila melanogaster, est largement utilisé à la fois dans la recherche biologique et l’éducation en biologie. La manipulation des mouches adultes est courante, mais difficile dans la pratique, car les mouches adultes volent. Démontré ici est de savoir comment faire quelques outils simples et rentables pour répondre à des questions difficiles dans le traitement de Drosophila. Des trous dans les bouchons de mousse sont faits et des bouts de pipette ou des entonnoirs sont insérés dans les trous. Les mouches se déplacent alors seulement dans une direction dans l’assemblage de pointe de pipette/funnel, permettant le contrôle efficace du transfert de Drosophila adulte dans ou hors d’une fiole. Les protocoles existants ont été modifiés pour les mouches d’anesthésie fraîche en se refroidissant dans la glace concassée et en les transférant sur une surface froide et dure. Le banquise est recouvert d’un morceau de gaze médicale qui maintient les mouches immobilisées de l’eau condensée lorsqu’elles sont examinées au microscope stéréomicroscope. Les mouches sont finalement euthanasiées pour le comptage et le tri ou jetées par micro-ondes. Une cage en forme de bouteille a également été développée pour la collecte des œufs, ainsi qu’un dispositif d’économie de main-d’œuvre et un protocole d’accompagnement pour le nettoyage des flacons de culture du verre.
Introduction
La mouche des fruits, Drosophila melanogaster, est un organisme modèle largement utilisé dans la recherche biologique et l’éducation en biologie pour étudier un large éventail de sujets1,2. Les problèmes de base de la manipulation de Drosophila sont le transfert des adultes de flacon à flacon et l’immobilisation des mouches afin qu’ils soient plus faciles à manipuler, comme tous les adultes (sauf pour certains mutants3,4) peuvent voler.
Traditionnellement, un chercheur transfère les mouches d’une fiole à l’autre en tenant deux flacons bouche-à-bouche, en tapant sur les mouches vers le bas ou en permettant aux mouches de voler vers le haut dans une autre fiole, puis en séparant et en rebranchant les deux flacons4. Évidemment, cela exige que l’ouverture de deux flacons avec le même diamètre, et il est difficile de contrôler la quantité de mouches transférées. Pendant ce temps, cela nécessite des mains rapides pour faire le travail, et échapper aux mouches errantes peut entraîner des problèmes pour le laboratoire ou la salle de classe. L’ajout de mouches extra vierges ou de mouches mâles à une croix déjà préparée est une autre tâche de routine dans les expériences Drosophila. Traditionnellement, les mouches doivent être immobilisées dans le flacon de croix avant l’ajout de mouches supplémentaires.
Drosophila adulte sont systématiquement anesthésiés par l’éther, CO2, ou de refroidissement5. Par rapport à l’exposition à l’éther et au CO 2, le refroidissement est l’agent le plus économique pour immobiliser la drosophile adulte et le moins nocif pour les mouches et les chercheurs (surtout les jeunes étudiants)6,7. Cependant, l’eau qui se condense continuellement sur la surface froide ou la chambre mouille les mouches. Il est difficile de déterminer les phénotypes des mouches humides, et ils peuvent facilement être endommagés lors de la manipulation8,9. Cela a empêché la méthode de refroidissement de devenir plus largement acceptée.
Les outils pour le transfert de mouche et une méthode pour le refroidissement de mouche ont été précédemment décrits10. Ici, une technique modifiée d’anesthésie de refroidissement est rapportée qui est sûre, fiable, et faisable pour des expériences de Drosophila. Également décrit sa part dans ce document 1) les méthodes pour tuer les adultes pour le comptage, le tri ou le rejet, 2) les dispositifs et les protocoles d’économie de main-d’œuvre pour le nettoyage des flacons de culture du verre, et 3) une cage simple pour la collecte des œufs. Les outils faciles à concevoir et rentables décrits ici peuvent être utilisés pour répondre aux problèmes difficiles de la manipulation des mouches, et ces méthodes ont été testées et se sont avérées robustes, fiables et faciles à manipuler pour les chercheurs expérimentés et débutants.
Protocol
Representative Results
Discussion
Certains outils faits maison pour la manipulation des activités de base impliquées dans l’élevage et l’expérimentation d’origine d’origine d’origine d’origine d’origine sont décrits dans cet article. Ces outils sont simples mais plutôt efficaces. Pratiquement, n’importe quel laboratoire peut fabriquer ces outils facilement, et un laboratoire de recherche ou un laboratoire d’enseignement n’a pas besoin de trouver une alternative prête à l’emploi qui n’est peut-être pas disponible localement.
<p class…Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
aucun
Materials
| a pair of pliers | |||
| cordless drill driver | max speed: 500 rpm | ||
| electric soldering iron | |||
| file | |||
| funnel | diameter of disk<60mm | ||
| ice box | |||
| insect pins | |||
| infrared thermometer | HCIYET HT-830 | ||
| long cuff rubber gloves | |||
| mechanical pencils | |||
| medical gauze | |||
| microcentrifuge tube | 100 ul | ||
| microwave oven | |||
| Parafilm | |||
| peri dish | internal diameter 60 mm | ||
| pipette tips | 1 ml | ||
| plastic film | |||
| plastic peri dish | Φ36 mm used to cover the empty vial | ||
| point tweezers | |||
| protective work gloves | |||
| re-freezable hard icepacks | 26.5×14.5×2.5 cm or larger | ||
| rubber air blower | |||
| snap cutter | |||
| soft drink bottle | 500 ml, internal diameter c.a. 65 mm | ||
| sponge stopper | |||
| stainless steel sponges | |||
| tube brush | |||
| vial | Φ34 mm × 90 mm |
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