Beskrevet her er brugen af flere hjemmelavede værktøjer til at overføre, chill, og dræbe voksne Drosophila, samt at rense glas kultur hætteglas og indsamle æg. Disse værktøjer er nemme at lave og er ret effektive i håndteringen af Drosophila.
Frugten flyver, Drosophila melanogaster, er meget udbredt både i biologisk forskning og biologi uddannelse. Håndtering af voksne fluer er almindeligt, men vanskeligt i praksis, som voksne fluer flyver. Demonstreret her er, hvordan man laver nogle enkle og omkostningseffektive værktøjer til at løse vanskelige problemer i håndteringen af Drosophila. Huller i skum propper er lavet, og pipettespidser eller tragte indsættes i hullerne. Fluer bevæger sig derefter kun i én retning ind i pipettespidsen/tragten, hvilket giver effektiv kontrol over overførslen af voksen Drosophila til eller fra et hætteglas. Eksisterende protokoller er blevet ændret for cool-bedøvelsesmidler fluer ved afkøling i knust is og overføre dem til en kold, hård is overflade. Is er dækket med et stykke medicinsk gaze, der holder immobiliserede fluer fra det kondenserede vand, når de undersøges under et stereomicroskop. Fluerne er endelig aflives til optælling og sortering eller kasseres ved microwaving. En flaske formet bur er også blevet udviklet til opsamling af æg, samt en arbejdsbesparende anordning og ledsagende protokol til rengøring glas kultur hætteglas.
Frugten flue, Drosophila melanogaster, er en model organisme udbredt i biologisk forskning og biologi uddannelse til at studere en bred vifte af emner1,2. De grundlæggende problemer med håndtering Drosophila er overførsel af voksne fra hætteglas til hætteglas og immobilisering af fluer, så de er lettere at håndtere, som alle voksne (bortset fra nogle mutanter3,4) kan flyve.
Konventionelt, en forsker overførsler flyver fra et hætteglas til et andet ved at holde to hætteglas mund til mund, tappe fluer ned eller tillade fluer at flyve op i et andet hætteglas, derefter adskille og genkoble begge hætteglas4. Det kræver naturligvis, at åbningen af to hætteglas med samme diameter, og det er svært at kontrollere mængden af fluer overført. I mellemtiden, dette kræver hurtige hænder til at få arbejdet gjort, og undslippe herreløse fluer kan resultere i problemer for laboratoriet eller klasseværelset. Tilføjelse af ekstra jomfru fluer eller mandlige fluer til et allerede forberedt kors er en anden rutineopgave i Drosophila eksperimenter. Konventionelt, skal fluer være immobiliseret i Cross hætteglasset før tilsætning af ekstra fluer.
Voksne Drosophila er rutinemæssigt bedøvet af ETHER, co2, eller Chilling5. Sammenlignet med ether og co2 eksponering, Chilling er den mest omkostningseffektive agent for immobilisering voksne Drosophila og den mindst skadelige for både fluer og forskere (især unge studerende)6,7. Men vand, der kondenserer kontinuerligt på den kolde overflade eller kammer Wets fluer. Det er svært at bestemme fænotyper af våde fluer, og de kan nemt blive beskadiget under manipulation8,9. Dette har holdt chillings metoden fra at blive mere bredt accepteret.
Værktøjer til fly dokumentation og en metode til flyve køling er tidligere beskrevet10. Heri, en modificeret Chilling anæstesi teknik er rapporteret, der er sikker, pålidelig, og muligt for Drosophila eksperimenter. Også beskrevet i dette papir er 1) metoder til at dræbe voksne til optælling, sortering eller kassere, 2) arbejdsbesparende anordninger og protokoller til rengøring glas kultur hætteglas, og 3) en simpel bur til opsamling af æg. De let designede og omkostningseffektive værktøjer, der er beskrevet her, kan bruges til at løse de vanskelige problemer med flyve håndtering, og disse metoder er blevet testet og har vist sig at være robuste, pålidelige og nemme at håndtere for erfarne og uerfarne forskere.
Nogle hjemmelavede værktøjer til håndtering af grundlæggende aktiviteter involveret i Drosophila opdræt og eksperimenter er beskrevet i dette dokument. Disse værktøjer er enkle, men ret effektive. Næsten, enhver Lab kan gøre disse værktøjer med lethed, og en forskning eller et undervisningslaboratorium behøver ikke at finde et færdiggjort alternativ, der er måske ikke tilgængelig lokalt.
Fly overførsel er den mest almindeligt praksis og en vanskelig opgave i Drosop…
The authors have nothing to disclose.
Ingen
a pair of pliers | |||
cordless drill driver | max speed: 500 rpm | ||
electric soldering iron | |||
file | |||
funnel | diameter of disk<60mm | ||
ice box | |||
insect pins | |||
infrared thermometer | HCIYET HT-830 | ||
long cuff rubber gloves | |||
mechanical pencils | |||
medical gauze | |||
microcentrifuge tube | 100 ul | ||
microwave oven | |||
Parafilm | |||
peri dish | internal diameter 60 mm | ||
pipette tips | 1 ml | ||
plastic film | |||
plastic peri dish | Φ36 mm used to cover the empty vial | ||
point tweezers | |||
protective work gloves | |||
re-freezable hard icepacks | 26.5×14.5×2.5 cm or larger | ||
rubber air blower | |||
snap cutter | |||
soft drink bottle | 500 ml, internal diameter c.a. 65 mm | ||
sponge stopper | |||
stainless steel sponges | |||
tube brush | |||
vial | Φ34 mm × 90 mm |