Enkle hjemmelavede værktøjer til at håndtere frugt fluer —Drosophila melanogaster

Summary

Beskrevet her er brugen af flere hjemmelavede værktøjer til at overføre, chill, og dræbe voksne Drosophila, samt at rense glas kultur hætteglas og indsamle æg. Disse værktøjer er nemme at lave og er ret effektive i håndteringen af Drosophila.

Abstract

Frugten flyver, Drosophila melanogaster, er meget udbredt både i biologisk forskning og biologi uddannelse. Håndtering af voksne fluer er almindeligt, men vanskeligt i praksis, som voksne fluer flyver. Demonstreret her er, hvordan man laver nogle enkle og omkostningseffektive værktøjer til at løse vanskelige problemer i håndteringen af Drosophila. Huller i skum propper er lavet, og pipettespidser eller tragte indsættes i hullerne. Fluer bevæger sig derefter kun i én retning ind i pipettespidsen/tragten, hvilket giver effektiv kontrol over overførslen af voksen Drosophila til eller fra et hætteglas. Eksisterende protokoller er blevet ændret for cool-bedøvelsesmidler fluer ved afkøling i knust is og overføre dem til en kold, hård is overflade. Is er dækket med et stykke medicinsk gaze, der holder immobiliserede fluer fra det kondenserede vand, når de undersøges under et stereomicroskop. Fluerne er endelig aflives til optælling og sortering eller kasseres ved microwaving. En flaske formet bur er også blevet udviklet til opsamling af æg, samt en arbejdsbesparende anordning og ledsagende protokol til rengøring glas kultur hætteglas.

Introduction

Frugten flue, Drosophila melanogaster, er en model organisme udbredt i biologisk forskning og biologi uddannelse til at studere en bred vifte af emner^1,2. De grundlæggende problemer med håndtering Drosophila er overførsel af voksne fra hætteglas til hætteglas og immobilisering af fluer, så de er lettere at håndtere, som alle voksne (bortset fra nogle mutanter^3,4) kan flyve.

Konventionelt, en forsker overførsler flyver fra et hætteglas til et andet ved at holde to hætteglas mund til mund, tappe fluer ned eller tillade fluer at flyve op i et andet hætteglas, derefter adskille og genkoble begge hætteglas⁴. Det kræver naturligvis, at åbningen af to hætteglas med samme diameter, og det er svært at kontrollere mængden af fluer overført. I mellemtiden, dette kræver hurtige hænder til at få arbejdet gjort, og undslippe herreløse fluer kan resultere i problemer for laboratoriet eller klasseværelset. Tilføjelse af ekstra jomfru fluer eller mandlige fluer til et allerede forberedt kors er en anden rutineopgave i Drosophila eksperimenter. Konventionelt, skal fluer være immobiliseret i Cross hætteglasset før tilsætning af ekstra fluer.

Voksne Drosophila er rutinemæssigt bedøvet af ETHER, co₂, eller Chilling⁵. Sammenlignet med ether og co₂ eksponering, Chilling er den mest omkostningseffektive agent for immobilisering voksne Drosophila og den mindst skadelige for både fluer og forskere (især unge studerende)^6,7. Men vand, der kondenserer kontinuerligt på den kolde overflade eller kammer Wets fluer. Det er svært at bestemme fænotyper af våde fluer, og de kan nemt blive beskadiget under manipulation^8,9. Dette har holdt chillings metoden fra at blive mere bredt accepteret.

Værktøjer til fly dokumentation og en metode til flyve køling er tidligere beskrevet¹⁰. Heri, en modificeret Chilling anæstesi teknik er rapporteret, der er sikker, pålidelig, og muligt for Drosophila eksperimenter. Også beskrevet i dette papir er 1) metoder til at dræbe voksne til optælling, sortering eller kassere, 2) arbejdsbesparende anordninger og protokoller til rengøring glas kultur hætteglas, og 3) en simpel bur til opsamling af æg. De let designede og omkostningseffektive værktøjer, der er beskrevet her, kan bruges til at løse de vanskelige problemer med flyve håndtering, og disse metoder er blevet testet og har vist sig at være robuste, pålidelige og nemme at håndtere for erfarne og uerfarne forskere.

Protocol

1. klargøring af værktøj og tilbehør Spids/tragt propper Få to svamp propper (diameteren af stikkene skal være lidt større end den indvendige diameter af hætteglassene, der anvendes til at overføre fluer). Lav et hul i centrene af svamp propper med en opvarmet elektrisk loddekolbe. Få to 1 mL pipettespidser, skær en i halvt på tværs med en skarp kniv, og kassér den spidde ende. Skær derefter 1,5 cm af den spidde ende af den anden pipettespids. Lim resterne af…

Representative Results

T-og F-stopperne blev udviklet som et sæt af enkle værktøjer, der kan tilpasses og anvendes i enhver flyve overførsel aktiviteter. Overførsel af fluer fra en gammel kultur til flere friske kulturer indebærer fjernelse af propper af de friske hætteglas, erstatte dem med F-propper, derefter tappe ned fluer i det gamle hætteglas, hurtigt at fjerne stikket, og erstatte det med en T-prop. Hvis den gamle mad er kompakt, er det vigtigt at vende det gamle hætteglas og indsætte spidsen a…

Discussion

Nogle hjemmelavede værktøjer til håndtering af grundlæggende aktiviteter involveret i Drosophila opdræt og eksperimenter er beskrevet i dette dokument. Disse værktøjer er enkle, men ret effektive. Næsten, enhver Lab kan gøre disse værktøjer med lethed, og en forskning eller et undervisningslaboratorium behøver ikke at finde et færdiggjort alternativ, der er måske ikke tilgængelig lokalt.

Fly overførsel er den mest almindeligt praksis og en vanskelig opgave i Drosop…

Materials

a pair of pliers
cordless drill driver			max speed: 500 rpm
electric soldering iron
file
funnel			diameter of disk<60mm
ice box
insect pins
infrared thermometer			HCIYET HT-830
long cuff rubber gloves
mechanical pencils
medical gauze
microcentrifuge tube			100 ul
microwave oven
Parafilm
peri dish			internal diameter 60 mm
pipette tips			1 ml
plastic film
plastic peri dish			Φ36 mm used to cover the empty vial
point tweezers
protective work gloves
re-freezable hard icepacks			26.5×14.5×2.5 cm or larger
rubber air blower
snap cutter
soft drink bottle			500 ml, internal diameter c.a. 65 mm
sponge stopper
stainless steel sponges
tube brush
vial			Φ34 mm × 90 mm