Eenvoudige zelfgemaakte gereedschappen voor het hanteren van fruit vliegjes-Drosophila melanogaster

Summary

Hier beschreven is het gebruik van verschillende zelfgemaakte tools om volwassen Drosophilaover te dragen, te koelen en te doden, evenals om glazen cultuur flesjes schoon te maken en eieren te verzamelen. Deze gereedschappen zijn gemakkelijk te maken en zijn vrij efficiënt in het hanteren van Drosophila.

Abstract

De fruitvlieg, Drosophila melanogaster, wordt veel gebruikt zowel in biologisch onderzoek als in het biologie onderwijs. Het hanteren van volwassen vliegen is gebruikelijk, maar moeilijk in de praktijk, als volwassen vliegen vliegen. Hier wordt gedemonstreerd hoe u enkele eenvoudige en kosteneffectieve hulpmiddelen maakt om moeilijke problemen bij de behandeling van Drosophilaaan te pakken. Gaten in Foam stoppers worden gemaakt en pipetpunten of trechters worden in de gaten gestoken. Vliegen gaat dan slechts in één richting naar de pipetpunt/trechter assemblage, waardoor de overdracht van volwassen Drosophila in of uit een injectieflacon efficiënt kan worden besturen. Bestaande protocollen zijn aangepast voor koel-anesthetiserende vliegen door te koelen in gemalen ijs en ze over te dragen op een koud, hard icepack oppervlak. Het icepack is bedekt met een stukje medisch gaas dat geïmmobiliseerde vliegt uit het gecondenseerde water wanneer onderzocht onder een stereomicroscoop. De vliegen worden uiteindelijk geëerd voor het tellen en sorteren of weggegooid door Microwaving. Er is ook een fles vormige kooi ontwikkeld voor het verzamelen van eieren, evenals een arbeidsbesparend apparaat en een begeleidend protocol voor het reinigen van glazen kweek flesjes.

Introduction

De fruitvlieg, Drosophila melanogaster, is een modelorganisme dat op grote schaal wordt gebruikt in biologisch onderzoek en biologie onderwijs om een breed scala aan onderwerpen^1,2te bestuderen. De fundamentele problemen van de behandeling Drosophila zijn de overdracht van volwassenen van flacon naar injectieflacon en immobilisatie van de vliegen, zodat ze gemakkelijker te hanteren, als alle volwassenen (behalve voor sommige mutanten^3,4) kan vliegen.

Conventioneel, een onderzoeker transfers vliegt van de ene flacon naar de andere door het houden van twee flesjes mond-tot-mond, het tikken van de vliegen naar beneden of het toestaan van vliegen om te vliegen in een andere flacon, vervolgens scheiden en opnieuw aansluiten beide flesjes⁴. Natuurlijk, dit vereist dat de opening van twee flesjes met dezelfde diameter, en het is moeilijk om de hoeveelheid vliegen overgedragen. Ondertussen vereist dit snelle handen om de klus te klaren, en ontsnappen aan zwerf vliegen kan resulteren in problemen voor het laboratorium of klaslokaal. Het toevoegen van extra Virgin vliegen of mannetjes vliegen naar een reeds voorbereide Kruis is een andere routine taak in Drosophila experimenten. Conventioneel, vliegen moet worden geïmmobiliseerd in het Kruis flacon voor de toevoeging van extra vliegen.

Volwassen Drosophila wordt routinematig verdoofd door ether, co₂of chillen⁵. In vergelijking met ether en co₂ blootstelling, is koeling de meest kostenefficiënte agent voor het immobiliseren van volwassen Drosophila en het minst schadelijk voor zowel de vliegen als onderzoekers (vooral jonge studenten)^6,7. Echter, water dat continu condenseert op het koude oppervlak of de kamer voor de vliegen. Het is moeilijk om de fenotypes van natte vliegen te bepalen, en ze kunnen gemakkelijk beschadigd raken tijdens het manipuleren^8,9. Dit heeft de koelmethode steeds meer geaccepteerd.

Tools voor Fly-transferal en een methode voor vlieg koeling zijn eerder beschreven¹⁰. Hierin wordt een gemodificeerde koel anesthesie techniek gerapporteerd die veilig, betrouwbaar en haalbaar is voor Drosophila experimenten. Ook beschreven in dit artikel zijn 1) methoden voor het doden van volwassenen voor het tellen, sorteren of verwijderen, 2) arbeidsbesparende apparaten en protocollen voor het schoonmaken van glazen cultuur flesjes, en 3) een eenvoudige kooi voor het verzamelen van eieren. De gemakkelijk ontworpen en kosteneffectieve instrumenten die hier worden beschreven, kunnen worden gebruikt om de moeilijke problemen van vlieg afhandeling aan te pakken, en deze methoden zijn getest en zijn bewezen robuust, betrouwbaar en gemakkelijk te hanteren voor ervaren en beginnende onderzoekers.

Protocol

1. gereedschappen en accessoires voorbereiden Tip/trechter stoppers Verkrijg twee spons pluggen (de diameter van de stekkers moet iets groter zijn dan de inwendige diameter van de flacons gebruikt voor het overbrengen van vliegen). Maak een gat in de centra van de spons pluggen met een verwarmde elektrische soldeerbout. Verkrijg twee pipetpunten van 1 mL, snijd één op de helft dwars met een scherp mes en gooi het puntige uiteinde weg. Snijd vervolgens 1,5 cm van het punti…

Representative Results

De T-en F-stoppers werden ontwikkeld als een set van eenvoudige gereedschappen die kunnen worden aangepast en gebruikt in elke Fly overdragen activiteiten. Het overdragen van vliegen van een oude cultuur in verschillende verse culturen omvat het verwijderen van de stekkers van de verse flesjes, vervangen door F-stoppers, dan aftappen van de vliegen in de oude injectieflacon, snel verwijderen van de stekker, en vervangen door een T-stopper. Als het oude voedsel compact is, dan is het belan…

Discussion

In dit artikel worden enkele zelfgemaakte hulpmiddelen beschreven voor het verwerken van basisactiviteiten die betrokken zijn bij het fokken en experimenteren met Drosophila . Deze tools zijn eenvoudig maar wel effectief. Praktisch, elk lab kan deze tools gemakkelijk te maken, en een onderzoek of een onderwijs laboratorium hoeft niet te vinden van een kant-en-klare alternatief dat is misschien niet beschikbaar lokaal.

Fly-overdracht is de meest voorkomende praktijk en een moeilijke ta…

Materials

a pair of pliers
cordless drill driver			max speed: 500 rpm
electric soldering iron
file
funnel			diameter of disk<60mm
ice box
insect pins
infrared thermometer			HCIYET HT-830
long cuff rubber gloves
mechanical pencils
medical gauze
microcentrifuge tube			100 ul
microwave oven
Parafilm
peri dish			internal diameter 60 mm
pipette tips			1 ml
plastic film
plastic peri dish			Φ36 mm used to cover the empty vial
point tweezers
protective work gloves
re-freezable hard icepacks			26.5×14.5×2.5 cm or larger
rubber air blower
snap cutter
soft drink bottle			500 ml, internal diameter c.a. 65 mm
sponge stopper
stainless steel sponges
tube brush
vial			Φ34 mm × 90 mm