Einfache hausgemachte Werkzeuge, um Fruchtfliegen zu behandeln —Drosophila melanogaster
Summary
Beschrieben hier ist die Verwendung von mehreren hausgemachten Werkzeugen zu übertragen, kühlen, und töten erwachsene Drosophila, sowie Glaskultur Fläschchen zu reinigen und Eier zu sammeln. Diese Werkzeuge sind einfach zu machen und sind ziemlich effizient im Umgang mit Drosophila.
Abstract
Die Fruchtfliege, Drosophila melanogaster, ist sowohl in der biologischen Forschung als auch in der Biologieausbildung weit verbreitet. Der Umgang mit erwachsenen Fliegen ist häufig, aber schwierig in der Praxis, da erwachsene Fliegen fliegen. Hier wird gezeigt, wie Sie einige einfache und kostengünstige Werkzeuge herstellen, um schwierige Probleme im Umgang mit Drosophilaanzugehen. Löcher in Schaumstopfen werden gemacht und Pipettenspitzen oder Trichter werden in die Löcher eingesetzt. Fliegen bewegen sich dann nur in eine Richtung in die Pipette-Spitze/Trichter-Assemblage, was eine effiziente Kontrolle der Übertragung von erwachsenen Drosophila in oder aus einer Durchstechflasche ermöglicht. Bestehende Protokolle wurden für die Kühlung von Fliegen modifiziert, indem sie in zerkleinertem Eis gekühlt und auf eine kalte, harte Eispackung übertragen werden. Die Eispackung ist mit einem Stück medizinischer Gaze bedeckt, das immobilisierte Fliegen aus dem kondensierten Wasser hält, wenn sie unter einem Stereomikroskop untersucht werden. Die Fliegen werden schließlich zum Zählen und Sortieren eingeschläfert oder durch Mikrowaden entsorgt. Ein flaschenförmiger Käfig wurde auch zum Sammeln von Eiern entwickelt, sowie ein arbeitssparendes Gerät und ein Begleitprotokoll zur Reinigung von Glaskulturfläschchen.
Introduction
Die Fruchtfliege, Drosophila melanogaster, ist ein Modellorganismus weit verbreitet in der biologischen Forschung und Biologie-Bildung verwendet, um eine breite Palette von Themen1,2zu studieren. Die grundlegenden Probleme des Umgangs mit Drosophila sind die Übertragung von Erwachsenen von der Durchstechflasche in die Durchstechflasche und die Immobilisierung der Fliegen, so dass sie leichter zu handhaben sind, da alle Erwachsenen (mit Ausnahme einiger Mutanten3,4) fliegen können.
Konventionell überträgt ein Forscher Fliegen von einer Durchstechflasche zur anderen, indem er zwei Fläschchen mund-zu-Mund-Propaganda hält, die Fliegen heruntertippt oder Fliegen in eine andere Durchstechflasche fliegen lässt, dann beide Fläschchen trennt und wieder einsteckt4. Offensichtlich erfordert dies, dass das Öffnen von zwei Fläschchen mit dem gleichen Durchmesser, und es ist schwer, die Menge der übertragenen Fliegen zu kontrollieren. In der Zwischenzeit erfordert dies schnelle Hände, um die Arbeit zu erledigen, und die Flucht aus streunenden Fliegen kann zu Problemen für das Labor oder Klassenzimmer führen. Das Hinzufügen von extra jungfräulichen Fliegen oder männlichen Fliegen zu einem bereits vorbereiteten Kreuz ist eine weitere Routineaufgabe in Drosophila-Experimenten. Konventionell müssen Fliegen in der Kreuzdurchstecher immobilisiert werden, bevor zusätzliche Fliegen hinzukommen.
Erwachsene Drosophila werden routinemäßig durch Äther, CO2oder kühlend5anbeäscht. Im Vergleich zur Ether- und CO2-Exposition ist das Kühlen das kostengünstigste Mittel zur Immobilisierung von Erwachsenen Drosophila und der am wenigsten schädliche für die Fliegen und Forscher (vor allem junge Studenten)6,7. Wasser, das sich kontinuierlich auf der kalten Oberfläche kondensiert oder Kammer benetzt die Fliegen. Es ist schwierig, die Phänotypen von Nassfliegen zu bestimmen, und sie können leicht während der Manipulation beschädigt werden8,9. Dies hat verhindert, dass die Kühlmethode immer mehr akzeptiert wird.
Werkzeuge für den Fliegentransfer und ein Verfahren zur Fliegenkühlung wurden zuvor beschrieben10. Hierbei wird eine modifizierte Kühlanästhesietechnik berichtet, die für Drosophila-Experimente sicher, zuverlässig und machbar ist. Ebenfalls in diesem Papier beschrieben sind 1) Methoden zum Töten von Erwachsenen zum Zählen, Sortieren oder Entsorgen, 2) arbeitssparende Geräte und Protokolle zur Reinigung von Glaskulturfläschchen und 3) ein einfacher Käfig zum Sammeln von Eiern. Die leicht zu gestaltenden und kostengünstigen Tools, die hier beschrieben werden, können verwendet werden, um die schwierigen Probleme der Fliegenhandhabung anzugehen, und diese Methoden wurden getestet und haben sich als robust, zuverlässig und für erfahrene Forscher bewährt.
Protocol
Representative Results
Discussion
Einige hausgemachte Werkzeuge für den Umgang mit grundlegenden Aktivitäten in Drosophila Aufzucht und Experimente beteiligt sind in diesem Papier beschrieben. Diese Werkzeuge sind einfach, aber ziemlich effektiv. Praktisch kann jedes Labor diese Werkzeuge mit Leichtigkeit herstellen, und ein Forschungs- oder Lehrlabor muss keine vorgefertigte Alternative finden, die vielleicht nicht lokal verfügbar ist.
Fliegentransfer ist die häufigste Praxis und eine schwierige Aufgabe in Dr…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
nichts
Materials
| a pair of pliers | |||
| cordless drill driver | max speed: 500 rpm | ||
| electric soldering iron | |||
| file | |||
| funnel | diameter of disk<60mm | ||
| ice box | |||
| insect pins | |||
| infrared thermometer | HCIYET HT-830 | ||
| long cuff rubber gloves | |||
| mechanical pencils | |||
| medical gauze | |||
| microcentrifuge tube | 100 ul | ||
| microwave oven | |||
| Parafilm | |||
| peri dish | internal diameter 60 mm | ||
| pipette tips | 1 ml | ||
| plastic film | |||
| plastic peri dish | Φ36 mm used to cover the empty vial | ||
| point tweezers | |||
| protective work gloves | |||
| re-freezable hard icepacks | 26.5×14.5×2.5 cm or larger | ||
| rubber air blower | |||
| snap cutter | |||
| soft drink bottle | 500 ml, internal diameter c.a. 65 mm | ||
| sponge stopper | |||
| stainless steel sponges | |||
| tube brush | |||
| vial | Φ34 mm × 90 mm |
References
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