Здесь мы описываем новый метод выявления успешного установления общего кровообращения двух парабионтов через инъекцию caudal вен глюкозы, которая вызывает минимальный ущерб и не является фатальной для парабионтов.
Парабиоз является экспериментальным методом хирургического объединения двух параллельных животных вдоль продольной оси тела. Мы представляем протокол для обнаружения успешного установления химеризма крови в парабионтах путем инъекции caudal вен глюкозы. Были построены парабиотические мыши. Глюкоза вводилась в донорскую мышь через хвостовую вену, и колебания уровня глюкозы в крови измерялись у обеих мышей с помощью глюкометра крови в разное время. Наши результаты показали, что после инъекции глюкозы уровень глюкозы в крови у мышей-доноров резко повысился после 1 мин и медленно снизился после этого. Между тем, уровень глюкозы в крови мышей-реципиентов достиг 15 мин после инъекции. Аналогичные результаты были получены с Эванс синий, используется в качестве положительного контроля для глюкозы. Синхронные колебания уровня глюкозы в крови свидетельствуют о том, что кровоток между двумя мышами был успешно установлен.
Парабиоз является методом моделирования, в котором два живых организма соединяются хирургическим путем и развиваются как единая физиологическая система с общей системой кровообращения1. Такие модели широко используются для изучения физиологии, что объясняется тем преимуществом, что вещества, производимые одним человеком, могут действовать на обоих животных одновременно через общую систему кровообращения. С середины 1800-х годов, когда парабиотические эксперименты были впервые Пол Берт2, методы для построения парабиотических моделей стали стандартизированы. Однако простого и удобного метода проверки успешного создания кровного химеризма не хватает. Было сообщено, что перекрестный оборот может быть успешно оцененин интраперитонеально инъекционных 0,5% Эванс синий краситель в одном из парабионтов следуют измерения абсорбции Эванс синий в крови обоих парабионтов с микроплитой читателя3. Другой метод требует определенной породы мышей, которая содержит CD45.1–и CD45.2–помеченные моноциты в каждом парабионте. Клеточная цитометрия затем используется для определения химеризма крови путем измерения частоты двух маркеров в моноцитах из селезенки или крови4. Тем не менее, эти методы часто являются смертельными или громоздкими для животных, и безопасный и простой метод для быстрой и надежной проверки парабиотических моделей является весьма желательным. В этом исследовании мы создали новый метод для этой цели, который был проверен в мышиной модели парабиоза. Концентрация глюкозы в образцах крови, взятых из хвостовой вены, измеряется с помощью глюкометра, а модель изменений уровня глюкозы у мышей-доноров и реципиентов считается признаком циркуляции химеризма. Мы назвали этот метод «методом колебаний глюкозы». Применение этого метода проверки не ограничивается мышами, но может быть распространено на различные патологические модели, за исключением тех, с серьезнымдисрегрецией метаболизма глюкозы. Процедура проста, экономия времени и безопасна.
Парабиоз относится к хирургической технике соединения двух живых животных для создания общей сосудистой системы экспериментальными средствами6,7,8. Преимущество этой модели заключается в том, что вещества, производимые одним человеко…
The authors have nothing to disclose.
Эта работа была поддержана Национальным фондом науки о природе Китая (81570399 и 817737335), Национальной ключевой программой исследований и разработок Китая – Научно-исследовательским проектом модернизации традиционной китайской медицины (2017YFC1702003) и Хэй Лонг Цзян Выдающийся молодежный научный фонд (JC2017020).
curved forceps | JZ surgical Instruments, China | J31340 | |
fine scissors | JZ surgical Instruments, China | WA1030 | |
needle forcep | JZ surgical Instruments, China | 60017961 | |
2.5 mL syringes | Agilent, USA | 5182-9642 | |
Tribromoethano | Sigma-Aldrich, USA | T48402-5G | |
penicillin | Solarbio, China | IP0150 | |
tramadol | Yijishiye, China | YJT712520 | |
glucometer | Roche Diabetes Care, Indiana | Accu-Chek Active test strips | |
Evan's blue Counterstain | Solarbio, China | G1810 | |
depilatory cream | Nair, USA | LL9161 | |
Warming Blanket (Heating pad) | Kent Scientific Corp, USA | TP-22G | |
Electrical shaver | Codos, China | CP-5000 | |
3-0,5-0 surgical suture |
Shanghai Medical Suture Needle Factory, China | SYZ 3-0#, SYZ 5-0# |