מזהה הקמת אספקת דם משותף בעכברים Parabiotic על ידי הזרקת הסוכר קאודל וריד

Summary

כאן אנו מתארים שיטה חדשה של זיהוי הקמת מוצלח של זרימת דם משותפת של שני parabits באמצעות הזרקת וריד caudal של גלוקוז, הגורם נזק מינימלי והוא לא קטלני לתוך parabionts.

Abstract

Parabiosis היא שיטה ניסיונית לשילוב בניתוח שתי בעלי חיים מקבילים לאורך ציר האורך של הגוף. אנו מציגים פרוטוקול לגילוי הקמתה המוצלחת של כימריזם דם בפראביטס על ידי הזרקת וריד caudal של גלוקוז. . עכברים מיוטיים נבנו גלוקוז הוזרק לתוך העכבר התורם דרך הווריד הזנב, ותנודות של רמת הגלוקוז בדם נמדד בשני העכברים באמצעות גלומוטר דם בנקודות זמן שונות. התוצאות שלנו הראו כי לאחר הזרקת גלוקוז, רמת הגלוקוז בדם בעכברים תורמים גדל בחדות אחרי 1 דקות ירד לאט לאחר מכן. בינתיים, רמת הגלוקוז בדם של עכברים הנמען לשיאה 15 דקות לאחר ההזרקה. תוצאות דומות הושגו עם אוונס כחול, משמש שליטה חיובית עבור גלוקוז. התנודות הסינכרוניות של רמות הגלוקוז בדם מעידות על כך שזרימת הדם בין שני העכברים הוקמה בהצלחה.

Introduction

Parabiosis היא שיטת דוגמנות שבה שני אורגניזמים חיים מחוברים יחד בניתוח ולהתפתח כמערכת פיזיולוגית אחת עם מערכת משותפת מחזור הדם¹. דגמים כאלה שימשו באופן נרחב לחקר הפיזיולוגיה בשל היתרון כי החומרים המיוצרים על ידי אדם אחד יכולים לפעול על שתי בעלי חיים באותו זמן דרך מערכת הדם המשותפת. מאז אמצע 1800, כאשר הניסויים parabiotic היו חלוץ על ידי פול ברט², השיטות לבניית מודלים parabiotic הפכו סטנדרטיים. עם זאת, שיטה פשוטה ונוחה לאימות הקמתה המוצלחת של כימריזם דם חסר. נמסר כי מחזור הזרימה ניתן להעריך בהצלחה על ידי intraperitoneally הזרקת 0.5% הצבע הכחול אוונס באחד הפראביבטים ואחריו מדידה של בספיגת כחול אוונס בדם של שני הפראביב עם קורא מיקרולוח³. שיטה נוספת מחייבת גזע עכבר מסוים המכיל CD 45.1⁺-ו-cd 45.2⁺-מונוציטים עם התווית בכל מבנה. Cy, תא הציטונסה משמש לאחר מכן כדי לקבוע כמינות דם על ידי מדידת תדירות של שני סמנים ב מונוציטים מן הטחול או הדם⁴. עם זאת, שיטות אלה הן לעתים קרובות קטלני או מסורבל לבעלי חיים, ושיטה בטוחה ופשוטה לאימות מהיר ואמין של מודלים parabiotic הוא רצוי מאוד. במחקר זה, הקמנו שיטה חדשה למטרה זו, אשר אומתה במודל העכבר של parabiosis. הריכוז של גלוקוז בדגימות דם שנלקח מווריד הזנב נמדד באמצעות גלוקומיטר, והתבנית של שינויים ברמת הגלוקוז בעכברי התורם והנמען נחשבת אינדיקציה לצ המחזור. קראנו לשיטה זו את שיטת התנודות בגלוקוז. היישום של שיטת אימות זו אינו מוגבל לעכברים, אך ניתן להרחיב אותם למודלים פתולוגיים שונים, למעט אלה עם חוסר התקנה רציני של מטבוליזם הגלוקוז. ההליך הוא פשוט, הצלת זמן, ובטוח.

Protocol

כל ההליכים הכרוכים בבעלי חיים והטיפול בהם אושרו על-ידי שימוש בבעלי חיים מוסדיים ובוועדת הרפואה של חרבין. הערה: הכלים והציוד הנדרשים לשיטה מפורטים בטבלת החומרים. 1. הכנת חומרים ובעלי חיים סדר C57BL/6 עכברים זכרים עם משקל בין 20 g-25 גרם מספק בעלי חיים ס?…

Representative Results

ב שישה עכברים תורמים, רמות הגלוקוז בדם עלה בחדות כדי 26.5 μm/L (173% עלייה) בממוצע של 1 דקות לאחר ההזרקה של 100 μL של גלוקוז (1.2 g/ק”ג) דרך הווריד הזנב ולאחר מכן ירד בהדרגה ל 13.3 μm/L ב 60 דקות. בעכברי הנמען, הגלוקוז בדם עלה באיטיות לאחר ההזרקה והגיע לרמת השיא הראשונה ב -15 דקות (47% הגדלה, 12.2 μm…

Discussion

Parabiosis מתייחס לטכניקה כירורגית של חיבור שתי חיות חיים כדי להקים מערכת כלי דם משותף על ידי ניסיוני פירושו^6,7,8. היתרון של מודל זה הוא כי החומרים המיוצרים על ידי אדם אחד יכול לפעול על שני בעלי חיים באותו זמן. לפיכך, ניתן להשתמש במודל הפרביוזיס כ…

Materials

curved forceps	JZ surgical Instruments, China	J31340
fine scissors	JZ surgical Instruments, China	WA1030
needle forcep	JZ surgical Instruments, China	60017961
2.5 mL syringes	Agilent, USA	5182-9642
Tribromoethano	Sigma-Aldrich, USA	T48402-5G
penicillin	Solarbio, China	IP0150
tramadol	Yijishiye, China	YJT712520
glucometer	Roche Diabetes Care, Indiana	Accu-Chek Active test strips
Evan's blue Counterstain	Solarbio, China	G1810
depilatory cream	Nair, USA	LL9161
Warming Blanket (Heating pad)	Kent Scientific Corp, USA	TP-22G
Electrical shaver	Codos, China	CP-5000
3-0,5-0 surgical suture	Shanghai Medical Suture Needle Factory, China	SYZ 3-0#, SYZ 5-0#