コーダル静脈グルコース注射によるパラバイオティクスマウスにおける共有血液供給の検出

Summary

ここでは、グルコースの尾静脈注射を通じて2つのパラバイオリンの共有血液循環の確立を成功させたことを検出する新しい方法について説明します。

Abstract

パラビオシスは、身体の縦軸に沿って2つの平行動物を外科的に結合するための実験的方法である。我々は、グルコースの尾静脈注射によってパラバイオントにおける血液キメラリズムの確立を成功させるためのプロトコルを提示する。パラバイオティクスマウスを構築した。グルコースは、尾静脈を介してドナーマウスに注入され、そして、血糖量の変動を異なる時点で血液グルコメーターを用いて両マウスで測定した。我々の結果は、グルコース注射後、ドナーマウスの血糖値が1分後に急激に増加し、その後ゆっくりと減少することを示した。一方、レシピエントマウスの血糖値は、注射後15分にピークを迎えた。同様の結果は、グルコースの陽性対照として使用されるエバンスブルーで得られた。血糖レベルの同期変動は、2つのマウス間の血流が正常に確立されたことを示す。

Introduction

パラビオシスは、2つの生物が外科的に結合し、共有循環系¹を有する単一の生理システムとして発達するモデリング方法である。このようなモデルは、単一の個人によって産生される物質が共有循環系を介して両方の動物に同時に作用できるという利点のために生理学を研究するために広く使用されている。1800年代半ば以来、パラバイオティクス実験がPaul Bert²によって開拓された、パラバイオティクスモデルを構築するための方法が標準化されています。しかし、血液キメラリズムの確立が成功したことを確認するための簡単で便利な方法は欠けています。クロス循環は、腹腔内注射で0.5%のエバンスブルー染料を1つのパラバイオエントに注入し、続いてマイクロ^{プレートリーダーを}用いた両方のパラバイオレントの血液中のエバンスブルーの吸光度の測定によって正常に評価できることが報告されている。別の方法は、各パラバイオレントにCD45.1^{+ –}とCD45.2⁺– 標識単球を含む特定のマウス品種を必要とします。細胞サイトメトリーは、次に脾臓または血液⁴から単球中の2つのマーカーの頻度を測定することによって血液キメラリズムを決定するために使用される。しかし、これらの方法は、動物に対して致死的または面倒であることが多く、かつ、パラバイオティクスモデルの迅速かつ確実な検証のための安全で簡単な方法が非常に望ましい。本研究では、パラビオシスのマウスモデルで検証された新しい方法を確立しました。尾静脈から採取した血液サンプル中のグルコース濃度はグルコメーターを用いて測定され、ドナーマウスとレシピエントマウスにおけるグルコースレベルの変化のパターンは循環キメラリズムの指標と考えられる。この方法を「グルコース変動法」と名付けた。この検証方法の適用は、マウスに限らず、グルコース代謝の深刻な調節不変を有するものを除いて、多様な病理学的モデルに拡張することができる。手順は簡単で、時間を節約し、安全です。

Protocol

動物とそのケアに関するすべての手順は、ハルビン医科大学の機関動物ケアおよび使用委員会によって承認されました. 注: この方法に必要な工具および装置は、材料表にリストされています。 1. 素材・動物の製造 標準的な実験動物の供給業者からの20 g-25 g間の重量のC57BL/6雄のマウスを注文する。 マウスを12時間の光のサ…

Representative Results

ドナーマウス6匹では、血糖濃度が100μLのブドウ糖(1.2g/kg)を尾静脈に注射した後、平均1分で26.5μmol/L(173%増加)に急上昇し、60分で13.3μmol/Lに徐々に低下した。レシピエントマウスでは、注射後に血糖値がゆっくりと上昇し、15分で最初のピークレベルに達した(47%増加、12.2μmol/L)。上記の結果に基づいて、循環キメラ症の標準は次のように設定した:1)グルコース注入後1分?…

Discussion

パラバイオシスは、実験手段^6、7、8によって共通の血管系を確立するために2匹の生きている動物を接続する外科的技術を指す。このモデルの利点は、単一の個人によって生成された物質が同時に両方の動物に作用することができるということです。したがって、パラビオシスモデルは、関連疾患における物質または因子?…

Materials

curved forceps	JZ surgical Instruments, China	J31340
fine scissors	JZ surgical Instruments, China	WA1030
needle forcep	JZ surgical Instruments, China	60017961
2.5 mL syringes	Agilent, USA	5182-9642
Tribromoethano	Sigma-Aldrich, USA	T48402-5G
penicillin	Solarbio, China	IP0150
tramadol	Yijishiye, China	YJT712520
glucometer	Roche Diabetes Care, Indiana	Accu-Chek Active test strips
Evan's blue Counterstain	Solarbio, China	G1810
depilatory cream	Nair, USA	LL9161
Warming Blanket (Heating pad)	Kent Scientific Corp, USA	TP-22G
Electrical shaver	Codos, China	CP-5000
3-0,5-0 surgical suture	Shanghai Medical Suture Needle Factory, China	SYZ 3-0#, SYZ 5-0#