Cellule progenitrici coronariche e biomarcatori solubili nella prognosi cardiovascolare dopo l'angioplastica coronaria

Summary

Lo sviluppo di importanti eventi cardiovascolari avversi, che influenzano la prognosi cardiovascolare dopo l’angioplastica coronarica, sono influenzati dall’entità del danno coronarica e dalla riparazione vascolare. L’uso di nuovi biomarcatori cellulari e solubili, reattivi ai danni vascolari e alla riparazione, sono utili per prevedere lo sviluppo di MACE e prognosi.

Abstract

I principali eventi cardiovascolari avversi (MACE) influiscono negativamente sulla prognosi cardiovascolare dei pazienti sottoposti a angioplastica coronarica a causa di lesioni ischemiche coronariche. L’entità del danno coronario e i meccanismi di riparazione vascolare sono fattori che influenzano il futuro sviluppo dei MACE. Caratteristiche vascolari intrinseche come le caratteristiche della placca e la complessità dell’arteria coronaria hanno dimostrato informazioni prognostiche per i MACE. Tuttavia, l’uso di biomarcatori circolanti intracoronarici è stato postulato come un metodo conveniente per l’identificazione precoce e la prognosi dei MACE, in quanto riflettono più da vicino meccanismi dinamici che coinvolgono danni coronarici e riparazione. La determinazione dei biomarcatori circolanti coronarici durante l’angioplastica, come il numero di sottopopolazioni di cellule progenitrici mononucleari (PPC) e la concentrazione di molecole solubili che riflettono l’infiammazione, l’adesione cellulare e la riparazione, valutazione degli sviluppi futuri e della prognosi dei MACE 6 mesi dopo l’angioplastica coronarica. Questo metodo è evidenziato dalla sua natura traslazionale e dalle migliori prestazioni rispetto ai biomarcatori periferici circolanti sul sangue per quanto riguarda la previsione dei MACE e il suo effetto sulla prognosi cardiovascolare, che possono essere applicati per la stratificazione del rischio dei pazienti con malattia coronarica in fase di angioplastica.

Introduction

L’angioplastica coronarica e lo stenting rappresentano una procedura di recupero per i pazienti con malattia coronarica (CAD). Tuttavia, importanti eventi cardiovascolari avversi (MACE), tra cui la morte cardiovascolare, l’infarto miocardico, la restenosi coronarica e gli episodi di angina o insufficienza cardiaca di scompensare, possono verificarsi mesi dopo l’intervento coronarico, spingendo visite non programmate in ospedale. I MACE sono comuni in tutto il mondo e la loro morbi-mortalità è alta¹.

La lesione coronarica ischemica induce la risposta vascolare precoce e meccanismi riparativi che coinvolgono la mobilitazione dei MMP a causa della loro capacità di differenziazione e/o del potenziale angio-reparativo, così come la produzione di molecole solubili come molecole di adesione intercellulare (ICAM), metalloproteine a matrice (MMM), e specie reattive dell’ossigeno, che riflette l’adesione cellulare, la rimodellamento dei tessuti e lo stress ossidativo. Anche se caratteristiche vascolari intrinseche come le caratteristiche della placca e la complessità dell’arteria coronaria sono state utilizzate per prevedere i MACE, alcuni studi hanno suggerito che i biomarcatori correlati ai meccanismi di lesione e riparazione che si verificano nell’endotelio coronario potrebbero essere molto utili per l’identificazione precoce e la prognosi di eventi cardiovascolari in pazienti con CAD sottoposti all’angioplastica coronaria^2,3,4,5.

Il continuo interesse per la comprensione dei meccanismi alla base delle lesioni e della riparazione CAD ha motivato gli sperimentatori a studiare i biomarcatori circolanti intracoronari, perché il campionamento coronarica riflette più da vicino i danni vascolari e la riparazione⁶. Tuttavia, la caratterizzazione dei biomarcatori coronarici negli studi sull’uomo è stata scarsa^7,8,9. Pertanto, lo scopo del presente studio era descrivere un metodo per determinare la quantità di MPC circolanti coronarici e molecole solubili, riflettendo sia lesioni vascolari che riparazioni, e per mostrare se questi biomarcatori sono associati ai MACE e alla prognosi clinica dei pazienti CAD che hanno subito un’angioplastica coronarica. Questo metodo si basa sull’uso di MPC vascolari circolanti, circolanti e molecole solubili ottenute campionando posizioni più vicine al danno del vaso. Può anche essere utile per studi clinici per l’ischemia degli arti inferiori, ictus, vavulite, trombosi venosa, e altre lesioni che coinvolgono lesioni vascolari e riparazione.

Protocol

Questo protocollo soddisfa le linee guida istituzionali del Comitato Etico per la ricerca umana. 1. Angiografia coronaria, ultrasuoni e campionamento del sangue Richiedere informazioni cliniche e demografiche di base prima dell’intervento coronarica. Raccogliere i dati dell’individuo: età, sesso, stato di fumo attuale, indice di massa corporea (BMI), alta pressione sanguigna, dilipidemia, diabete mellito, farmaci e l’indicazione per l’attuale angiografia coronarica. Esegui…

Representative Results

Coronaria, seno venoso e sangue periferico sono stati raccolti da 52 pazienti sottoposti ad angiografia coronarica (Figura 1) e hanno mostrato un’alta prevalenza di ipertensione e dislipidemia. Al follow-up clinico, 11 (21,1%) I MACE si sono verificati 6 mesi dopo l’angiografia coronarica: morte (n ) e angina che richiedono la frequenza ospedaliera (n . 6), infarto miocardico (n ) e/o prove di insufficienza cardiaca (n . 4). <p class="jove_content" fo:kee…

Discussion

La raccolta di sangue dall’arteria coronaria interessata può essere difficile. A volte, l’arteria coronaria è a malapena accessibile. In questo caso, il campionamento dal seno venoso può essere un’alternativa. Abbiamo eseguito test di convalida confrontando biomarcatori circolanti nell’arteria coronaria contro il seno venoso, senza differenze significative. Tuttavia, le prestazioni dei biomarcatori circolanti sono state convalidate solo per il campionamento coronario. Pertanto, le prestazioni dei biomarcatori ottenuti…

Materials

BSA	Roche	10735086001	Bovine Serum Albumin (BSA) as a buffering agent, stabilizer, standard and for blending.
Calibration Beads	Miltenyi Biotec / MACS	#130-093-607	MACQuant calibration beads are supplied in aqueous solution containing 0.05% sodium azide. 3.5 ml for up to 100 tests
CD133/1 (AC133)-PE	Milteny Biotec / MACS	#130-080-801	Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer
CD184 (CXCR4)-PE-VIO770	Miltenyi Biotec / MACS	#130-103-798	Monoclonal, Isotype recombinant human IgG1, conjugated
CD309 (VEGFR-2/KDR)-APC	Miltenyi Biotec / MACS	#130-093-601	Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer
CD34-FITC	Miltenyi Biotec / MACS	#130-081-001	The monoclonal antibody clone AC136 detecs a class III epitope of the CD34
CD45- VioBlue	Miltenyi Biotec / MACS	#130-092-880	Monoclonal CD45 Antibody, human conjugated
Conical Tubes	Thermo SCIENTIFIC	#339651	15ml conical centrifuge tubes
Cytometry Tubes	FALCON Corning Brand	#352052	5 mL Polystyrene Round-Bottom Tube. 12×75 style. Sterile.
EDTA	BIO-RAD	#161-0729	Heavy metals, (as Pb) <10ppm, Fe <0.01%, As <1ppm, Insolubles <0.005%
Improved Neubauer	Without brand	Without catalog number	Hemocytometer for cell counting. (range 0.1000mm, 0.0025mm2)
K2 EDTA Blood Collection Tubes	BD Vacutainer	#367863	Lilac plastic vacutainer tube (K2E) 10.8mg, 6 mL.
Lymphoprep	Stemcell Technologies	01-63-12-002-A	Sterile and checked on the presence of endotoxins. Density: 1.077±0.001g/mL
Paraformaldehyde	SIGMA-ALDRICH	#SZBF0920V	Fixation of biological samples, (powder, 95%)
Pipette Transfer 1,3mL	CRM Globe	PF1016, PF1015	The transfer pipette is a tool that facilitates liquid transfer with greater accuracy.
Test Tubes	KIMBLE CHASE	45060 13100	Heat-resistant test tubes. SIZE/CAP 13 x 100 mm