يمكن استخدام الجينات المورجينية النباتية لتحسين التحول الوراثي للأنماط الجينية المتمردة. وصف هنا هو بروتوكول التحول الوراثي بوساطة Agrobacterium(QuickCorn) لثلاثة خطوط ذرة عامة هامة أصيلة.
أظهرت هنا هو بروتوكول مفصل للتحول الوراثي Agrobacteriumبوساطة من خطوط الذرة الأصيلة باستخدام الجينات المورفيجينية طفرة بيبي (Bbm) وWuschel2 (Wus2). وينظم BBM من قبل الذرة الفوسفوليبيد المنتقلة جين(Pltp)المروج، وWus2 تحت سيطرة الذرة auxin-inducible(Axig1)المروج. سلالة Agrobacterium تحمل هذه الجينات المورفولوجية على نقل الحمض النووي (T-DNA) ونسخ إضافية من الفوعة الزراعية (vir)وتستخدم لتصيب الذرة الأجنة غير ناضجة explants. تتشكل الأجنة الجسدية على الكوتيلا من الأجنة المصابة ويمكن اختيارها عن طريق مقاومة مبيدات الأعشاب وتنبت في النباتات. يسمح نظام إعادة التركيب /اللوكسP المنشط بالحرارة المدمج في بناء الحمض النووي بإزالة الجينات المورجينية من جينوم الذرة خلال مرحلة مبكرة من عملية التحول. يمكن تحقيق ترددات تحويل ية تبلغ حوالي 14% و4% و4% (أعداد الأحداث المعدلة وراثياً المستقلة لكل 100 جنين مصاب) لـ W22 وB73 وMo17 على التوالي باستخدام هذا البروتوكول.
التحول هو أداة أساسية لتقييم التعبير الجيني الأجنبي في الذرة وإنتاج خطوط الذرة المعدلة وراثيا لأغراض البحث والأغراض التجارية على حد سواء. الوصول إلى التحول الإنتاجية العالية يمكن أن يسهل الحاجة المتزايدة للذرة الجزيئية ودراسات البيولوجيا الخلوية1. والقدرة على تحويل أنواع المحاصيل وراثيا أمر حيوي للمختبرات العامة والخاصة على حد سواء. وهذا يسمح لكل من الفهم الأساسي لآليات تنظيم الجينات وكذلك تحسين المحاصيل على نطاق عالمي لدعم السكان المتزايدين باستمرار.
اكتشاف أن الأجنة غير ناضجة من الذرة يمكن استخدامها لإنتاج الكالوس regenerable نشأت في عام 19752. منذ هذا الوحي ، تطلبت معظم بروتوكولات تحويل الذرة القابلة للتوسع تشكيل واختيار callus قبل التجديد3. أثناء عملية التحول الجيني، يتم استزراع الأجنة غير الناضجة المصابة بالأجنةالزراعية أو اللاليستية الغير ناضجة على الوسائط للتحريض الجنيني على الكاموس. ثم يتم استزراع calli المستحث على وسائل الإعلام الانتقائية (على سبيل المثال ، التي تحتوي على مبيد أعشاب) بحيث تكون قطع الكالوس المتحولة فقط قادرة على البقاء على قيد الحياة. هذه المقاومة للمبيدات الأعشاب كالي المعدلة وراثيا المفترضة هي يستكثر وتجدد في النباتات. في حين أن هذه الطريقة فعالة ، إلا أن العملية طويلة وكثيفة العمالة ، ويمكن أن يستغرق الأمر أكثر من 3 أشهر لإكمال4. والأهم من ذلك، أن بروتوكولات تحويل الذرة التقليدية تمتلك قيدًا أكبر بكثير،أي أنه لا يمكن تحويل سوى عدد محدود من الأنماط الجينية للذرة 5و6.
لوي وآخرون7,8 ذكرت سابقا “QuickCorn” طريقة التحول التي خفضت ليس فقط إلى حد كبير مدة عملية التحول ولكن أيضا توسيع قائمة الأنماط الجينية القابلة للتحويل. طريقة QuickCorn يستخدم تقويم العظام الذرة(Zm-Bbm وZm-Wus2)من عوامل النسخ Arabidopsis BABY BOOM (BBM)9 وWUSCHEL (WUS)10. عندما أدرجت في نظام ناقلات التحول، هذه الجينات تعمل بشكل تآزري لتحفيز النمو الجنيني7.
ويستند بروتوكول QuickCorn الموصوفة في هذا العمل على البروتوكول في جونز وآخرون11، الذي كان تحسينا آخر للطريقة التي ذكرتها لوي وآخرون7،8. في هذه الدراسة ، سلالة Agrobacterium LBA4404 (Thy-) التي تؤوي ناقل ثنائي بناء PHP81430(الشكل 1)والتبعية plasmid PHP7153912 وتستخدم للتحول. يحتوي T-DNA من PHP81430 على المكونات الجزيئية التالية. (1) التحول الانتقائية علامة الجين Hra التعبير كاسيت. الذرة Hra (Zm-Hra)الجين هو تعديل الجين acetolactase (ALS) التي تتحمل مبيدات الأعشاب ALS المثبطة مثل sulfonylureas وimidazolinones13،14. وينظم الجين Zm-Hra من قبل المروج ALS الذرة الرفيعة8 ومثبط البروتينات البطاطس الثاني(دبوسالثاني) المنهي15. يحتوي T-DNA أيضا (2) كاسيت التعبير تمتلك التحول علامة للشاشة الجينات ZsGreen. وينظم هذا الجين البروتين الفلورسنت الأخضر ZsGreen من زوانثوس sp. الشعاب المرجانية16 من قبل مروج في بيهوم أوبيكيتين / intron والأرز ubiquitin المنهي.
بالإضافة إلى ذلك، يحتوي T-DNA على (3) الجين المورجينيجين Bbm كاسيت التعبير. BBM هو عامل النسخ المرتبطة نمو الجنين9،17. وينظم BBM من قبل الذرة فوسفوليبيد تورفيز البروتين(Pltp)المروج8 والأرز T28 المنهي18. Zm-Pltp هو جين مع تعبير قوي في ظهارة scutellar الجنين ، والشعر الحريري ، والخلايا الفرعية ورقة (يحيط خلايا الحرس) ، وانخفاض التعبير في الأعضاء التناسلية ، وليس التعبير في جذور8. كما أنه يحتوي على (4) الجين morphogenic Wus2 كاسيت التعبير. Wus2 هو آخر عامل النسخ المرتبطة بالحفاظ على meristem apical19. Zm-Wus2 تحت سيطرة مروج الذرة auxin-inducible(Zm-Axig1)20 والذرة In2-1 المنهي21. وأخيرا، يحتوي الحمض النووي T(5) على الكري– نظام إعادةالتركيب. الجين recombinase الكريات 22 تحت سيطرة الذرة الحرارة صدمة البروتين 17.7 (Hsp17.7)23 المروج والبطاطا دبوسالثاني المنهي. موقعين loxP (في نفس الاتجاه)24 الجناح أربعة أشرطة التعبير الجيني بما في ذلك ZsGreen، cre، Bbm وWus2.
ولأن وجود الجينات المورجينية غير مرغوب فيه لنضج النبات وذرية لاحقة، تم بناء نظام إعادة تركيب الكري-لوكسب الناجم عن الحرارة في الحمض النووي T لإزالة الجينات المورجينية من جينوم الذرة للسماح بتجديد الكالوس الطبيعي وتطوير النبات. عند المعالجة الحرارية ، يزيل تعبير بروتين CRE جميع الجينات المتحولة باستثناء جين اختيار Hra. يجب أن تكون التحويلات الناجحة مقاومة لمبيدات الأعشاب ولكن ZsGreen-negative. لزيادة تعزيز وتيرة التحول ، وسلالة Agrobacterium تؤوي أيضا بلازميد التبعي إضافية (PHP71539) التي لديها نسخ إضافية من الفوعة Agrobacterium (فير)الجينات12.
تختلف طريقة QuickCorn عن بروتوكولات تحويل الذرة التقليدية ، لأنها لا تنطوي على خطوة التعريفي الكالوس أثناء التحويل. خلال الأسبوع الأول بعد الإصابة بالبكتيريا الزراعية، تتطور الأجنة الجسدية على ظهارة scutellar للأجنة غير الناضجة المصابة. ثم يتم نقل الأجنة إلى وسط مع الهرمونات التي تشجع نضوج الأجنة وتشكيل تبادل لاطلاق النار. نقل سريع للأجنة الجسدية على النضج / اطلاق النار تشكيل المتوسطة يتخطى مرحلة كالوس التقليدية المستخدمة سابقا لتحويل الذرة ويسمح التوليد المباشر للنباتات T08. بالمقارنة مع أساليب تحويل الذرة المنشورة سابقا6، فإن طريقة QuickCorn أسرع وأكثر كفاءة وأقل اعتمادًا على النمط الجيني. باستخدام هذه الطريقة، عادة ما تكون النباتات المتجذرة جاهزة للنقل إلى التربة في غضون 5-7 أسابيع فقط، بدلاً من الأشهر الثلاثة أو أكثر التي تتطلبها البروتوكولات التقليدية. الغرض من هذه المقالة هو تقديم وصف متعمق وبيان توضيحي للطريقة ، مما يسمح للتكرار بشكل أسهل في بيئة المختبر الموجودة عادة في معظم المؤسسات الأكاديمية.
البروتوكولات التقليدية لتحويل الذرة تتبع نموذج عزل الأجنة الزيجوتية غير الناضجة لإنتاج أنسجة الكالوس المعدلة وراثيا، والتي يتم تجديدها في النباتات الخصبة4،6. في حين أن هذا فعال ، يمكن أن تكون البروتوكولات القائمة على الكالوس مضيعة للوقت ، وغالبًا ما يستغرق الأمر ما يصل إلى 3 أشهر حتى تنتج عملية زراعة الأنسجة النباتات. ما يجعل الأسلوب المعروض هنا مهمًا هو أنه خالٍ من الكالوس وفعال وسريع ويسمح بتجديد نباتات T0 في نصف الإطار الزمني تقريبًا. كما يبدو أن أقل اعتمادا على النمط الجيني، وبالتالي يمكن أن تكون فعالة لمعظم inbreds المتاحة للجمهور8،11.
وفي حين ينبغي اتباع جميع الخطوات بفعالية، فإن الإعداد الصحيح لوسائط الإعلام للنمو أمر حتمي. يجب إضافة مكونات وسائط النمو في المراحل الصحيحة، سواء قبل الأوتوكلاف أو ما بعد هُنا، لضمان أن تُستلم المواد النباتية التركيز المناسب للمواد الكيميائية. وهذا يضمن أن المركبات الحساسة مثل المضادات الحيوية لا تنهار. ومن المهم أيضا أن توضع المواد النباتية على وسط النمو الصحيح في كل مرحلة، كما هو مبين في البروتوكول. عدم وضع المواد على متوسط النمو السليم يمكن أن يؤدي إلى الموت المادي. بالإضافة إلى ذلك ، يجب تجنب وضع عدد كبير جدًا من الأجنة أو الأنسجة النامية على لوحات. في حين أن وضع ضعف عدد قطع الأنسجة قد يوفر تكلفة المواد الكيميائية وأطباق بيتري (وحتى مساحة الحاضنة) ، يمكن أن يمنع نمو الأنسجة في الأطباق المكتظة بشكل خطير. أثناء إجراء العدوى ، يجب التأكد من أن الكثافة البصرية لتعليق Agrobacterium مناسبة. إذا كانت كثافة التعليق البكتيري منخفضة للغاية، فقد لا تحدث عدوى مناسبة.
إن جودة مواد البدء ضرورية للنجاح في بروتوكولات التحويل. يجب أن تكون الأذنالمستخدمة في تشريح الأجنة صحية، مما يعني أن النبات الذي ينتجها صحي. كما يجب أن تمتلك مجموعة بذور كافية وأن تكون خالية من الآفات والأمراض. أيضا، لا ينبغي أن تستخدم Agrobacterium القديمة. يجب ألا يزيد عمر لوحة “الأم” عن أسبوعين. بعد هذه النقطة ، يجب أن تكون لوحة “الأم” الجديدة مخطوطة لبدء تجارب جديدة.
في حين تم إظهار هذا الأسلوب أن تكون أقل اعتماداً على النمط الجيني، فإنه لا يمكن افتراض أن كافة الأسطر ستكون ناجحة بنفس القدر. لا يزال هناك اختلاف بين الخطوط وكذلك الاختلافات في النجاح على أساس البناء المستخدم. كما أن التغير بين الأذنو الأذن والأذن أمر لا مفر منه عند العمل مع أجنة غير ناضجة، لذا من الناحية المثالية يجب أن تستخدم التجارب آذانًا متعددة لحساب ذلك. في هذا العمل ، كان أداء W22 الأصيل هو الأفضل ، مع تردد تحويل يُبعد هـو 14 ٪، يليه B73 و Mo17 (4٪ لكل منهما). وذكر لوي وآخرون8 باستخدام بروتوكول QuickCorn لتحويل B73 و Mo17. في هذا العمل، تراوحت ترددات التحويل بين 9% -50% لـ B73 و15%-35% لـ Mo17.
ويمكن أن تعزى إحدى الاحتمالات لترددات التحويل المنخفضة لـ B73 و Mo17 الملحوظة في هذا العمل إلى التقلبات الموسمية في نوعية الأذن. الفرق الآخر بين هذا العمل وعمل لوي وآخرون8 هو أن بنيات ناقلات مختلفة استخدمت هنا. في عمل لوي، لم تتم إزالة الجينات المورجينية من النباتات المتحولة، بل تم إسكاتها تنموياً في المراحل اللاحقة. في هذا العمل ، تمت إزالة الجينات المورفولوجية بعد 8 أيام من العدوى. من الممكن أن B73 و Mo17 قد تحتاج إلى وجود أطول من Bbm / Wus2 لتطوير الأجنة الجسدية.
باستخدام هذه الطريقة ، هناك إمكانية للحصول على نباتات الهروب غير المعدلة وراثيا ، والغرز متعددة الأبعاد ، والجينات المتحولة غير المهورة. لن يكون لهذه النباتات نمط ظاهري مختلف بشكل ملحوظ ، لذلك يلزم الكشف عن طريق PCR لتحديد ما إذا كان النبات معدل وراثيا. ولتحقيق ذلك، يمكن استخدام أجهزة تحديد أولي ة لـ PCR داخل المنطقة المنتاستئصال والتمهيديات المحيطة بالمنطقة المنتاستئصالة. كما يمكن أن تنتج التحولات المستقلة المتعددة نباتات من نفس الجنين غير الناضج، مما يجعل تحديد معدل الاسترداد المتحول المستقل الكلي أمرًا صعبًا. كان معيارنا هو حساب معدل التحول على أساس أخذ عينات من نبات واحد من كل جنين غير ناضج أنتج النباتات وقسمة هذا على عدد الأجنة المصابة. من شبه المؤكد أن هذه الطريقة تقلل من العدد الفعلي للأحداث المستقلة التي تم استردادها كزارع. ويتطلب التمييز بين الأحداث المستقلة من نفس الجنين تسلسل المناطق الحدودية حول الجينات المتحولة، وسيكون ذلك مكلفا ً للغاية ويستغرق وقتاً طويلاً بالنسبة لمعظم التطبيقات؛ على الرغم من ذلك، قد تكون هناك حالات تكون فيها هذه البيانات مفيدة.
وقد ثبت أن هذه الطريقة من التحول زراعة الأنسجة لتكون فعالة جدا، ولكن لا يزال يمكن أن تحدث مشاكل. وإذا كانت المواد النباتية لا تستجيب، فمن الممكن أن تكون هناك مشكلة في الخط الأصيل الخاص، مما يشير إلى أن متغيرات مثل تكوين وسائط النمو وتوقيت الاستزراع الفرعي تتطلب تعديلات. متغير آخر هو تصميم متجه السليم والبناء الدقيق للمتجه ، إذا تم تغيير المتجه الأصلي. يمكن أن يكون هناك أيضا مشاكل مع حساسية imazapyr، وبعض الخطوط هي أكثر حساسية من غيرها، وتركيز imazapyr قد تحتاج إلى تعديل لتحقيق النباتات التي تم تحويلها بنجاح.
وعلى مدى السنوات الثلاثين الماضية، تغيرت وأحرزت بروتوكولات زراعة أنسجة الذرة وتحويلها تقدما؛ ويعتقد أن هذا البروتوكول تقصير سوف تعزز هذا التقدم. هذه الطريقة فعالة للإعدادات الأكاديمية لأنها أقل استهلاكًا للوقت من الطرق التقليدية. وبالإضافة إلى ذلك، فإنه لا يتطلب مشغلين مدربين تدريبا عاليا، مما يجعله أكثر قابلية للتوزيع على نطاق واسع بالمقارنة مع الأساليب التقليدية. في المستقبل ، يمكن الجمع بين هذه الطريقة مع التكنولوجيات الجديدة مثل هندسة الجينوم.
The authors have nothing to disclose.
نشكر فريق كورتيفا للدفيئة على توفير آذان غير ناضجة للذرة ، ومختبر إعداد ية وسائل الإعلام Corteva لتقديم المساعدة في صنع وسائل الإعلام ، ونينغ وانغ من كورتيفا للمساعدة في بناء Agrobacterium ، وكيونسوب لي من جامعة ولاية أيوا للمساعدة. تم دعم هذا المشروع جزئيًا من قبل برنامج أبحاث الجينوم النباتي للمؤسسة العلمية الوطنية ، ومنحة 1725122 و 1917138 إلى K.W.، ومن قبل برنامج التدريب البحثي للبحوث النباتية التنبؤية (منحة مؤسسة العلوم الوطنية DGE-1545453) إلى J.Z.، من قبل مشروع USDA NIFA Hatch #IOW04341، من قبل صناديق ولاية أيوا، ومركز الهندسة الحيوية للمحاصيل التابع لجامعة ولاية أيوا.
2,4-D | Millipore Sigma | D7299 | |
6-Benzylaminopurine (BAP) | Millipore Sigma | B3408 | |
Acetosyringone | Millipore Sigma | D134406 | |
Agar | Millipore Sigma | A7921 | |
Aluminum foil | To cover the flask | ||
Ammonium Sulfate | Millipore Sigma | A4418 | |
Analytical balance | To weigh small quantities of chemicals | ||
Autocalve | Primus (Omaha, NE) | PSS5-K | To autoclave media and tools |
Bacterial culture loop (10 µl) | Fisher scientific | 22-363-597 | Collects Agrobacterium from plate to transfer to liquid |
Bactoagar | BD bioscience | 214030 | |
Beakers (1 L, 2 L, 4 L) | To mix the chemicals for media | ||
Benomyl | Millipore Sigma | #45339 | |
Bleach (8.25% Sodium Hypochlorite) | Clorox | For seed sterilization | |
Boric Acid | Millipore Sigma | B6768 | |
Calcium Chloride Dihydrate | Millipore Sigma | C7902 | |
Carbenicillin | Millipore Sigma | C3416 | |
Casein Hydrolysate | Phytotech | C184 | |
Cefotaxime | Phytotech | C380 | |
Conical tube (50 mL) | Fisher scientific | 06-443-19 | Contain liquid medium and Agro suspension |
Cuvette (Semi-micro) | Fisher scientific | 14955127 | To hold liquid for measuring OD |
Dicamba | Phytotech | D159 | |
Digital hygrometer | Checking temperature and humidity for heat treatment | ||
EDTA, Disodium Salt, Dihydrate | Millipore Sigma | 324503 | |
Eppendorf tube (2.0 mL) | ThermoFischer Scientific | AM12475 | |
Eriksson's Vitamins | Phytotech | E330 | 1000x in liquid |
Ethanol (70%) | Sterilizing tools and surfaces | ||
Ferrous Sulfate Heptahydrate | Millipore Sigma | F8263 | |
Fertilizer, Osmocote Plus 15-9-12 | ICL Specialty Fertilizers (Dublin, OH) | A903206 | Fertilizer |
Flask (2 L) | Pyrex | 10-090E | To autoclave media and tools |
Flats (Standard 1020, open w/holes, 11"W x 21.37"L x 2.44"D) | Hummert International (Earth City, Mo) | 11300000 | Tray to hold soil and pot insert, fits Humidome |
Forceps (fine-tipped and large) | Fine for handling embryos; larger for large plant materials and use as ear holders | ||
Gentamicin | Gold Biotechnologies | G-400 | |
Glass bottle (1 L) | Pyrex | 06-414-1D | To autoclave medium |
Graduated cylinder | To adjust volume of media | ||
Imazapyr | Millipore Sigma | 37877 | |
Incubator, 20 °C | Percival Scientific | Model I-36NL | To grow mother plate and incubate embryos during Agro infection |
Incubator, 27 °C | Percival Scientific | Model I-36NL | To grow co-cultivation plate and maize embryo culture |
Incubator, 45 °C | Heat shock treatment | ||
Insert TO Standard, pots | Hummert International (Earth City, Mo) | 11030000 | For transplanting plants from rooting to soil, fits flat and Humidome |
Laminar flow hood | Maintains sterile conditions | ||
L-proline | Phytotech | P698 | |
Magnesium Sulfate Heptahydrate | Millipore Sigma | M1880 | |
Maize inbred seed B73 | U.S National Plant Germplasm | id=47638 | |
Maize inbred seed Mo17 | U.S National Plant Germplasm | id=15785 | |
Maize inbred seed W22 | U.S National Plant Germplasm | id=61755 | |
Manganese Sulfate Monohydrate | Millipore Sigma | M7899 | |
Milli-Q Water purification systems | Millipore sigma | MILLIQ | For tissue culture grade water |
MS Basal Medium | Millipore Sigma | M5519 | |
MS Basal Salt Mixture | Millipore Sigma | M5524 | |
N6 Basal Salt Mixture | Millipore Sigma | C1416 | |
Paperclips, non-skid | Holding on tassel bags | ||
Peptone | BD bioscience | 211677 | |
Petri dish (100×15 mm) | Fisher scientific | FB0875713 | For bacteria culture medium |
Petri dish (100×25 mm) | Fisher scientific | FB0875711 | For the plant tissue culture medium |
pH meter | Fisher scientific | AB150 | To adjust pH of media |
Pipette (1 mL) | ThermoFischer Scientific | 4641100N | |
Plastic Boxes | The Container Store | 10048430 | For tissue culture storage and incubation |
Plastic humidy dome (Humi-Dome) | Hummert International (Earth City, Mo) | 14385100 | Plastic cover for soil flat |
Potassium Iodide | Millipore Sigma | 793582 | |
Potassium Nitrate | Millipore Sigma | P8291 | |
Potassium Phosphate Monobasic | Millipore Sigma | P5655 | |
Scale | To weigh chemicals for media | ||
Scalpel Blade (No. 11, 4 cm) | Thermo Scientific | 3120030 | remove the top of the kernel crowns for embryo dissection |
Scalpel handle | Holding scalpel blades | ||
Schenk & Hildebrandt Vitamin (S&H vitamin) | Phytotech | S826 | 100x powder |
Scissors | Cutting ear shoots | ||
Shoot bag (Canvasback- semi-transparent) | Seedburo (Des Plaines, IL) | S26 | Semi-transparent bag to cover ear shoots |
Silver Nitrate | Millipore Sigma | S7276 | |
Sodium Molybdate Dihydrate | Millipore Sigma | M1651 | |
Soiless substrate LC1 | SunGro Horticulture (Agawam, Ma) | #521 | For growing maize plants |
Spatula (Double Ended Micro-Tapered) | Fischer Scientific | 2140110 | Dissecting embryos from kernels |
Spatula (with spoon) | Fisher scientific | 14-375-10 | To measure chemicals for media |
Spectinomycin | Millipore Sigma | S4014 | |
Spectrophotometer (Genesys 10S UV-Vis) | Thermo Scientific | 840-300000 | Measure OD of Agro suspension |
Stirring bar | Fisher scientific | 14-513-67 | To mix media |
Stirring hotplates | To mix media | ||
Syringe (without needle, 60 mL) | Fisher scientific | 14-823-43 | For filter sterilization |
Syringe filter (0.22 µm) | Fisher scientific | 09-720-004 | For filter sterilization |
Tassel bag (Canvasback- brown) | Seedburo (Des Plaines, IL) | T514 | Bag to cover tassels of non-transgenic plants |
Tassel bag (Canvasback-green stripe) | Seedburo (Des Plaines, IL) | T514G | Bag to cover tassels of transgenic plants |
Thiamine HCl | Phytotech | T390 | |
Thidiazuron | Phytotech | T888 | |
Thymidine | Millipore Sigma | T1895 | |
Timentin | Phytotech | T869 | |
Tween 20 | Fisher Scientific | Cas #9005-64-5 | surfactant |
Vortex Genie 2 | Scientific Industries | SI0236 | Homogenizes liquids (Agro suspension) |
Water bath (large – Precision model 186) | Fisher scientific | any that can fit 4+ 2L flasks and reach 55 °C | Keeps autoclaved media at optimal temperature |
Weigh dish | Fisher scientific | 08-732-112 | To measure chemicals for media |
Weighing paper | Fisher scientific | 09-898-12A | To measure chemicals for media |
Yeast Extract | Fisher Scientific | BP14222 | |
Zeatin | Millipore Sigma | Z0164 |