परीक्षण के लिए अधूरा पुनः प्राप्त सॉफ्ट टिशू सारकोमा का एक माउस मॉडल (नियो) एडजुवेंट थेरेपी
Summary
इस प्रोटोकॉल में, हम परीक्षण (नव) एडजुवेंट चिकित्सा के लिए नरम ऊतक सारकोमा के अधूरे सर्जिकल रिसेक्शन के माउस मॉडल का वर्णन करते हैं।
Abstract
सर्जरी अक्सर कई ठोस ट्यूमर के लिए पहला इलाज है। हालांकि, स्थानीय रिलेप्स अक्सर प्राथमिक ट्यूमर रीसेक्शन के बाद होते हैं, एडजुवेंट या नव-एडजुवेंट चिकित्सा के बावजूद। यह तब होता है जब सर्जिकल मार्जिन अपर्याप्त ट्यूमर मुक्त होते हैं, जिसके परिणामस्वरूप अवशिष्ट कैंसर कोशिकाएं होती हैं। जैविक और इम्यूनोलॉजिकल नजरिए से, सर्जरी एक शून्य घटना नहीं है; घाव भरने का वातावरण समर्थक और एंटी-ट्यूमरजनित रास्ते दोनों को प्रेरित करने के लिए जाना जाता है। नतीजतन, स्थानीय पतन को रोकने के उद्देश्य से दवा विकास के लिए प्रीक्लिनिकल मॉडल को सर्जरी के साथ इलाज किए गए रोगियों में नैदानिक सेटिंग्स को मॉडल करने के लिए नए (नव) एडजुवेंट चिकित्सा का परीक्षण करते समय सर्जिकल रिसेक्शन को शामिल करना चाहिए।
यहां, हम WEHI 164 नरम ऊतक सारकोमा के अधूरे सर्जिकल रिसेक्शन के एक माउस मॉडल का वर्णन करते हैं जो घाव भरने की प्रतिक्रिया की स्थापना में (नव) एडजुवेंट उपचारों के परीक्षण की अनुमति देता है। इस मॉडल में, ट्यूमर का 50% या 75% हटा दिया जाता है, जो नैदानिक सेटिंग में सर्जरी के बाद सकल अवशिष्ट रोग को मॉडल करने के लिए सीटू में कुछ कैंसर ऊतकों को पीछे छोड़ देता है। यह मॉडल सर्जरी के संदर्भ में परीक्षण उपचार की अनुमति देता है, जबकि घाव भरने की प्रतिक्रिया पर भी विचार करता है, जो (नव) एडजुवेंट उपचार की प्रभावकारिता को प्रभावित कर सकता है। अपूर्ण सर्जिकल रिसेक्शन के परिणामस्वरूप एडुवेंट थेरेपी के अभाव में सभी चूहों में ट्यूमर का पुन: उत्पन्न पुनर्विकास होता है। चेकपॉइंट नाकाबंदी के साथ एडुवेंट उपचार के परिणामस्वरूप कम ट्यूमर पुनर्विकास होता है। इस प्रकार यह मॉडल डीबुलिंग सर्जरी और उससे जुड़े घाव उपचार प्रतिक्रिया के संदर्भ में उपचारों के परीक्षण के लिए उपयुक्त है और इसे अन्य प्रकार के ठोस कैंसर तक बढ़ाया जा सकता है।
Introduction
सर्जरी कई ठोस ट्यूमर के लिए मुख्य उपचार विकल्प बनी हुई है1, जिसमें मुलायम ऊतक सारकोमा2,3शामिल हैं । कैंसर सर्जरी तकनीकों में सुधार के बावजूद, और (नव) एडजुवेंट चिकित्सा के साथ संयोजन, प्राथमिक ट्यूमर रेसेक्शन4,,5के बाद अभी भी कैंसर रिलेप्स और मेटास्टेसिस का एक उच्च जोखिम है। नरम ऊतक सारकोमा में, सर्जरी की साइट पर विशेष रूप से लोकोक्षेत्रीय रूप से होते हैं, जिसके परिणामस्वरूप रुग्णता और मृत्यु दर में वृद्धि होती है। नैदानिक सेटिंग में, व्यापक पर्याप्त मार्जिन प्राप्त करना मुश्किल हो सकता है (उदाहरण के लिए, शारीरिक बाधाओं के कारण), जिसके परिणामस्वरूप अधूरा रीसेक्शन और बाद में ट्यूमर पुनरावृत्ति6। सर्जिकल तनाव और घाव भरने की बाद की प्रक्रिया ट्यूमर पुनरावृत्ति 7,8के लिए अनुकूल इम्यूनोसप्रेसिव ट्यूमर माइक्रोएनवायरमेंट बनाने के लिए जानाजाताहै। इसलिए, नरम ऊतक सारकोमा, विशेष रूप से इम्यूनोथेरपी के लिए नए उपचारों की खोज और विकास, आदर्श रूप से सर्जिकल घाव उपचार प्रतिक्रिया को ध्यान में रखना चाहिए।
एडजुवेंट चिकित्सा के लिए अधिकांश प्रीक्लिनिकल अध्ययन शुरू में सर्जिकल तनाव और घाव हीलिंग प्रतिक्रिया9,,10को शामिल किए बिना चमड़े के नीचे सिनेजेनिक या ज़ेनोट्रांसप्लांट माउस मॉडल का उपयोग करके किए जाते हैं। इसलिए, हमने अधूरा सर्जिकल रीसेक्शन को शामिल करते हुए एक सिनेजेनिक चमड़े के नीचे माउस सॉफ्ट टिश्यू सारकोमा मॉडल विकसित किया। WEHI 164 फाइब्रोसारकोमा कोशिकाओं को चमड़े के नीचे टीका लगाया जाता है, और एक बार ट्यूमर स्थापित हो जाने के बाद, हम ट्यूमर बल्क(चित्रा 1A-ई) का 50-75% निकालतेहैं। ट्यूमर लगातार शेष ट्यूमर से फिर से बढ़ता है। यह मॉडल सर्जिकल तनाव और घाव भरने के प्रभाव पर विचार करते हुए एडजुवंत चिकित्सा के परीक्षण के लिए अनुमति देता है। अपूर्ण रिसेक्शन के समान सर्जिकल मॉडलों का उपयोग कई समूहों द्वारा किए गए कई अध्ययनों में किया गया है और यह प्रजनन योग्य और प्रभावी पाया गया है11,12,13.13 यहां, हम इस प्रोटोकॉल का विस्तृत विवरण प्रदान करते हैं।
Protocol
Representative Results
Discussion
हम पेरी-ऑपरेटिव उपचारों का परीक्षण करने के लिए नरम ऊतक सारकोमा के अधूरे सर्जिकल रिसेक्शन के माउस मॉडल के लिए एक प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं। हमने उपचार के बाद चूहों के बीच घाव भरने के आकलन की अनुमति देने …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
यह काम सारकोमा के लिए सॉक से अनुदान द्वारा समर्थित है! फाउंडेशन, ऑस्ट्रेलियन और न्यूजीलैंड सारकोमा एसोसिएशन, चिल्ड्रन ल्यूकेमिया एंड कैंसर रिसर्च फाउंडेशन और परपेचुअल परोपकार। W.J.L एक साइमन ली फैलोशिप और राष्ट्रीय स्वास्थ्य और चिकित्सा अनुसंधान परिषद से एक अनुसंधान फैलोशिप, और कैंसर परिषद WA द्वारा समर्थित है ।
Materials
| 26 gauge 0.5 mL insulin syringe | Becton Dickinson, Australia | 326769 | None |
| 2-Mercaptoethanol | Life Technologies Australia Pty Ltd | 21985023 | None |
| Anaestetic gas machine | Darvall Vet, Australia | SKU: 2848 | None |
| Anti-CTLA-4 | BioXcell, USA | BE0164 | None |
| Anti-PD-1 | BioXcell, USA | BP0273 | None |
| Buprenorphine Hydrochloride Injection, 0.3mg/mL | RB healthcare UK Limited, UK | 55175 | Prescription order |
| Chlorhexidine Surgical Scrub 4% | Perigo Australia, Australia | CHL01449F(scrub | None |
| Fetal Bovine serum | CellSera, Australia | AU-FBS-PG | None |
| Forceps Fine 10.5 cm | Surgical house, Western Australia | CC74110 | None |
| Forceps Fine 12 cm Serrated | Surgical house, Western Australia | CC74212 | None |
| Forceps Halsted 14 cm | Surgical house, Western Australia | CD01114 | None |
| Heating chamber | Datesand Ltd, UK | Mini-Thermacage | None |
| HEPES (1M) | Life Technologies Australia Pty Ltd | 15630080 | None |
| Isoflurane | Henry Schein Animal Health, Australia | SKU: 29405 | Prescription order |
| Lubricating Eye Ointment | Alcon | n/a | None |
| Penicillin/streptomycin 1000X | Life Technologies Australia Pty Ltd | 15140122 | None |
| Phosphate Buffered Solution 10x | Life Technologies Australia Pty Ltd | 70013-032 | None |
| Reflex 7mm Clips | Able scientific, Australia | AS59038 | None |
| Reflex 7mm Wound Clip Applicator | Able scientific, Australia | AS59036 | None |
| Reflex Wound Clip Remover | Able scientific, Australia | AS59037 | None |
| Rodent Qube Anesthesia Breathing Circuit | Darvall Vet, Australia | #7885 | None |
| Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medium + L-glutamine | Life Technologies Australia Pty Ltd | 21870092 | None |
| Scissors Iris STR 11 cm | Surgical house, Western Australia | KF3211 | None |
| Scissors Iris STR 9 cm | Surgical house, Western Australia | JH4209 | None |
| Small Induction Chamber | Darvall Vet, Australia | SKU: 9630 | None |
| TrypLE express 1x | Life Technologies Australia Pty Ltd | 12604-021 | None |
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