検査のための不完全切除軟部肉腫のマウスモデル(ネオ)アジュバント療法
Summary
このプロトコルでは、検査用軟部肉腫の不完全な外科的切除(neo)アジュバント療法のマウスモデルについて述べた。
Abstract
手術は、多くの固形腫瘍の最初の治療法であることが多い。しかし、局所再発は、アジュバントまたはネオアジュバント療法にもかかわらず、原発性腫瘍切除後に頻繁に起こる。これは、外科的マージンが腫瘍を含まない不十分な場合に起こり、癌細胞が残留する。生物学的および免疫学的観点から、手術はヌル事象ではありません。創傷治癒環境は、プロおよび抗腫瘍形成経路の両方を誘導することが知られている。その結果、局所再発を予防することを目的とした医薬品開発のための前臨床モデルは、手術で治療された患者の臨床設定をモデル化するために、新しい(ネオ)アジュバント療法をテストする際に外科的切除を組み込むべきである。
ここでは、創傷治癒応答の設定における(ネオ)アジュバント療法の検査を可能にするWEHI 164軟部肉腫の不完全な外科的切除のマウスモデルについて述べた。このモデルでは、腫瘍の50%または75%が除去され、臨床現場で手術後の総残留疾患をモデル化するために、その場でいくつかの癌組織を残す。このモデルは、(ネオ)アジュバント治療の有効性に影響を与える可能性のある創傷治癒応答を考慮しながら、手術の文脈での検査療法を可能にする。不完全な外科的切除は、アジュバント療法がない場合に全てのマウスにおいて腫瘍の再増殖を再現する結果となる。チェックポイント封鎖によるアジュバント治療は、腫瘍再増殖を減少させる。このモデルは、逆増手術およびそれに関連する創傷治癒応答の文脈における検査療法に適しており、他のタイプの固形癌にも拡張することができる。
Introduction
手術は、軟部組織肉腫2、3を含む多くの固形腫瘍1の3主要な治療オプションのままです。癌手術技術の改善、および(neo)アジュバント療法との併用にもかかわらず、原発性腫瘍切除,4、5に続く癌再発および転移のリスクが依然として高い4。軟部組織肉腫では、再発は特に局所的に起こり、手術部位では、罹患率および死亡率が増加する。臨床現場では、十分な広いマージン(例えば、解剖学的制約による)を得ることは困難であり、不完全な切除およびそれに続く腫瘍再発を生じる6。外科的ストレスとその後の創傷治癒のプロセスは、腫瘍再発に有利な免疫抑制性腫瘍微小環境を作り出すことが知られている7,8。8したがって、軟部組織肉腫、特に免疫療法のための新しい治療法の発見と開発は、理想的には外科的創傷治癒応答を考慮に入れるべきである。
アジュバント療法のためのほとんどの前臨床試験は、最初に外科的ストレスおよび創傷治癒応答99,1010を組み込まずに皮下同系または異種移植マウスモデルを用いて行われる。そこで、不完全な外科的切除を組み込んだ、皮下マウス軟部肉腫モデルを開発した。WEHI 164線維肉腫細胞は皮下に接種され、腫瘍が確立されると、腫瘍バルクの50〜75%を除去する(図1A-E)。腫瘍は一貫して残りの腫瘍から再成長する。このモデルは外科的ストレスおよび創傷治癒の効果を考慮している間のアジュバント療法をテストすることを可能にする。不完全な切除の同様の外科モデルは、いくつかのグループによって多くの研究で使用され、再現性が高く、効果的な1111、12、1312,13であることが判明した。ここでは、このプロトコルの詳細な説明を提供します。
Protocol
Representative Results
Discussion
我々は、軟部組織肉腫の不完全な外科的切除のマウスモデルのためのプロトコルを提供し、周回手術療法を試験する。また、治療後のマウス間の創傷治癒の評価を可能にするために、外科的切開を標準化した。
腫瘍の配置は、このプロトコルの重要な部分です。我々は、腫瘍部位への容易な外科的アクセスとマウスの負担を最小限に抑えた局所療法の投与を可能にする?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、肉腫にそれを靴下からの助成金によって支えられている!財団、オーストラリアとニュージーランド肉腫協会、小児白血病&がん研究財団、永久フィランソロピー。W.J.Lは、サイモン・リー・フェローシップと国家保健医療研究評議会とがん評議会WAの研究フェローシップによってサポートされています。
Materials
| 26 gauge 0.5 mL insulin syringe | Becton Dickinson, Australia | 326769 | None |
| 2-Mercaptoethanol | Life Technologies Australia Pty Ltd | 21985023 | None |
| Anaestetic gas machine | Darvall Vet, Australia | SKU: 2848 | None |
| Anti-CTLA-4 | BioXcell, USA | BE0164 | None |
| Anti-PD-1 | BioXcell, USA | BP0273 | None |
| Buprenorphine Hydrochloride Injection, 0.3mg/mL | RB healthcare UK Limited, UK | 55175 | Prescription order |
| Chlorhexidine Surgical Scrub 4% | Perigo Australia, Australia | CHL01449F(scrub | None |
| Fetal Bovine serum | CellSera, Australia | AU-FBS-PG | None |
| Forceps Fine 10.5 cm | Surgical house, Western Australia | CC74110 | None |
| Forceps Fine 12 cm Serrated | Surgical house, Western Australia | CC74212 | None |
| Forceps Halsted 14 cm | Surgical house, Western Australia | CD01114 | None |
| Heating chamber | Datesand Ltd, UK | Mini-Thermacage | None |
| HEPES (1M) | Life Technologies Australia Pty Ltd | 15630080 | None |
| Isoflurane | Henry Schein Animal Health, Australia | SKU: 29405 | Prescription order |
| Lubricating Eye Ointment | Alcon | n/a | None |
| Penicillin/streptomycin 1000X | Life Technologies Australia Pty Ltd | 15140122 | None |
| Phosphate Buffered Solution 10x | Life Technologies Australia Pty Ltd | 70013-032 | None |
| Reflex 7mm Clips | Able scientific, Australia | AS59038 | None |
| Reflex 7mm Wound Clip Applicator | Able scientific, Australia | AS59036 | None |
| Reflex Wound Clip Remover | Able scientific, Australia | AS59037 | None |
| Rodent Qube Anesthesia Breathing Circuit | Darvall Vet, Australia | #7885 | None |
| Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medium + L-glutamine | Life Technologies Australia Pty Ltd | 21870092 | None |
| Scissors Iris STR 11 cm | Surgical house, Western Australia | KF3211 | None |
| Scissors Iris STR 9 cm | Surgical house, Western Australia | JH4209 | None |
| Small Induction Chamber | Darvall Vet, Australia | SKU: 9630 | None |
| TrypLE express 1x | Life Technologies Australia Pty Ltd | 12604-021 | None |
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