מודל עכבר של Insected רקמה רכה לחלוטין סרקומה עבור בדיקה (ניאו) שפיטה טיפולים
Summary
בפרוטוקול זה, אנו מתארים מודל העכבר של כריתת כירורגית לא הושלמה של סרקומה של רקמה רכה עבור בדיקות (ניאו) שדון טיפולים.
Abstract
ניתוח הוא לעתים קרובות הטיפול הראשון עבור גידולים מוצקים רבים. עם זאת, התפרצויות מקומיות מתרחשות לעתים קרובות בעקבות הטיפול העיקרי הגידול, למרות הפסיקה או הניאו-שדון טיפולים. זה מתרחש כאשר שוליים כירורגי ללא מספיק גידול, וכתוצאה מכך תאים סרטניים שיורית. מנקודת מבט ביולוגית וחיסונית, ניתוח אינו אירוע null; סביבת הריפוי של הפצע ידוע כדי לגרום למסלולים הפרו-והאנטי-טוטגניים. כתוצאה מכך, דגמים פרה-קליניים לפיתוח תרופות שמטרתן למנוע התדרדרות מקומית צריך לשלב כריתת כירורגית כאשר בדיקות חדשות (ניאו) שדון טיפולים, כדי לדגמן את ההגדרות הקליניות בחולים שטופלו בניתוח.
כאן, אנו מתארים מודל העכבר של כריתת כירורגית שלא הושלמה של WEHI 164 סרקומה רקמה רכה המאפשר בדיקה של (ניאו) טיפולים והנמלה בקביעת תגובה ריפוי הפצע. במודל זה, 50% או 75% של הגידול מוסר, משאיר מאחורי רקמות סרטן באתרו כדי לדגמן מחלות שיורית גולמי לאחר הניתוח בסביבה הקלינית. מודל זה מאפשר טיפולים בדיקה בהקשר של ניתוח בעוד בהתחשב בתגובה ריפוי הפצע, אשר עשוי להשפיע על היעילות של הטיפול (ניאו) שדון טיפולים. כריתת כירורגית מלאה תוצאות לצמיחה מחודשת של הגידול בכל העכברים בהעדר טיפול שדון. הטיפול שדון עם המצור תוצאות מחסום לצמיחה מחודשת הגידול. מודל זה מתאים אפוא לבדיקת טיפולים בהקשר של ניתוח debulking ואת התגובה הקשורה שלה הפצע ריפוי והוא יכול להיות מורחב לסוגים אחרים של סרטן מוצק.
Introduction
ניתוח נשאר אפשרות הטיפול העיקרי עבור גידולים מוצקים רבים1, כולל סרקומה של רקמה רכה2,3. למרות שיפורים בטכניקות ניתוח סרטן, ושילובים עם (ניאו) שדון טיפולים, יש עדיין סיכון גבוה של התדרדרות סרטן גרורות בעקבות כריתת הגידול העיקרי4,5. ב סרקומה רקמת רך, הישנות להתרחש במיוחד locoregionally, באתר של ניתוח, וכתוצאה מכך תחלואה מוגברת תמותה. בהגדרה הקלינית, זה יכול להיות קשה להשיג שוליים רחבים מספיק (למשל, עקב אילוצים אנטומיים), וכתוצאה מכך כריתת שלמים והחזרה הגידול הבאים6. לחץ כירורגי והתהליך הבא של ריפוי הפצע ידועים ליצור מיקרו מדכאים הגידול מיקרוסביבתי חיוביות להישנות הגידול7,8. לכן, גילוי ופיתוח של טיפולים חדשים עבור סרקומה של רקמה רכה, בעיקר חיסוני, צריך לקחת באופן אידיאלי את התגובה הריפוי פצע כירורגי בחשבון.
המחקרים הקדם-קליניים ביותר עבור הטיפולים מתבצעים בתחילה באמצעות מודלים של העכבר בסינגנמית או xenotransplant שתלות, מבלי לשלב את הלחץ כירורגי תגובה ריפוי הפצע9,10. לכן, פיתחנו את העכבר תת עורית מודל סרקומה של רקמה רכה המשלב ניתוח כירורגי שלם. WEHI 164 תאים פיברוסרקומה מחוסנת תת-עורי, ופעם גידולים מבוססים, אנו מסירים 50-75% הגידול הגורפת (איור 1A-E). גידולים מחדש בעקביות לצמוח מתוך הגידול שנותר. מודל זה מאפשר בדיקת שפיטה טיפולים תוך בהתחשב בהשפעה של לחץ כירורגי וריפוי הפצע. מודלים כירורגיים דומים של כריתה לא שלמה שימשו במספר מחקרים על ידי מספר קבוצות ומצאו להיות בתוקף ואפקטיבי11,12,13. כאן, אנו מספקים תיאור מפורט של פרוטוקול זה.
Protocol
Representative Results
Discussion
אנו מספקים פרוטוקול עבור מודל העכבר של כריתת כירורגית שלא הושלמה של סרקומה רקמת רך לבדוק טיפולים פרי-פעיל. אנו גם מתוקננת את החתך כירורגי כדי לאפשר הערכה של ריפוי הפצע בין עכברים בעקבות הטיפול.
הצבת הגידול היא חלק חשוב. בפרוטוקול הזה בחרתי מודל גידול תת עורי כדי לאפשר גישה כ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
עבודה זו נתמכת על ידי מענקים מתוך גרב זה סרקומה! קרן, האוסטרלי, ניו זילנד האגודה סרקומה, לוקמיה לילדים & הקרן לחקר הסרטן ופילנתרופיה נצחית. W. J. L נתמך על ידי מלגת סימון לי ומלגת מחקר מבית החולים הלאומי לחקר הרפואה, ואת המועצה לסרטן WA.
Materials
| 26 gauge 0.5 mL insulin syringe | Becton Dickinson, Australia | 326769 | None |
| 2-Mercaptoethanol | Life Technologies Australia Pty Ltd | 21985023 | None |
| Anaestetic gas machine | Darvall Vet, Australia | SKU: 2848 | None |
| Anti-CTLA-4 | BioXcell, USA | BE0164 | None |
| Anti-PD-1 | BioXcell, USA | BP0273 | None |
| Buprenorphine Hydrochloride Injection, 0.3mg/mL | RB healthcare UK Limited, UK | 55175 | Prescription order |
| Chlorhexidine Surgical Scrub 4% | Perigo Australia, Australia | CHL01449F(scrub | None |
| Fetal Bovine serum | CellSera, Australia | AU-FBS-PG | None |
| Forceps Fine 10.5 cm | Surgical house, Western Australia | CC74110 | None |
| Forceps Fine 12 cm Serrated | Surgical house, Western Australia | CC74212 | None |
| Forceps Halsted 14 cm | Surgical house, Western Australia | CD01114 | None |
| Heating chamber | Datesand Ltd, UK | Mini-Thermacage | None |
| HEPES (1M) | Life Technologies Australia Pty Ltd | 15630080 | None |
| Isoflurane | Henry Schein Animal Health, Australia | SKU: 29405 | Prescription order |
| Lubricating Eye Ointment | Alcon | n/a | None |
| Penicillin/streptomycin 1000X | Life Technologies Australia Pty Ltd | 15140122 | None |
| Phosphate Buffered Solution 10x | Life Technologies Australia Pty Ltd | 70013-032 | None |
| Reflex 7mm Clips | Able scientific, Australia | AS59038 | None |
| Reflex 7mm Wound Clip Applicator | Able scientific, Australia | AS59036 | None |
| Reflex Wound Clip Remover | Able scientific, Australia | AS59037 | None |
| Rodent Qube Anesthesia Breathing Circuit | Darvall Vet, Australia | #7885 | None |
| Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medium + L-glutamine | Life Technologies Australia Pty Ltd | 21870092 | None |
| Scissors Iris STR 11 cm | Surgical house, Western Australia | KF3211 | None |
| Scissors Iris STR 9 cm | Surgical house, Western Australia | JH4209 | None |
| Small Induction Chamber | Darvall Vet, Australia | SKU: 9630 | None |
| TrypLE express 1x | Life Technologies Australia Pty Ltd | 12604-021 | None |
References
- Orosco, R. K., et al. Positive Surgical Margins in the 10 Most Common Solid Cancers. Scientific Reports. 8 (1), 5686 (2018).
- Haas, R. L., et al. Perioperative Management of Extremity Soft Tissue Sarcomas. Journal of Clinical Oncology. 36 (2), 118-124 (2018).
- Brennan, M. F., Antonescu, C. R., Moraco, N., Singer, S. Lessons learned from the study of 10,000 patients with soft tissue sarcoma. Annals of Surgery. 260 (3), 416-421 (2014).
- Smith, H. G., et al. Patterns of disease relapse in primary extremity soft-tissue sarcoma. British Journal of Surgery. 103 (11), 1487-1496 (2016).
- Uramoto, H., Tanaka, F. Recurrence after surgery in patients with NSCLC. Translational Lung Cancer Research. 3 (4), 242-249 (2014).
- Stojadinovic, A., et al. Analysis of the prognostic significance of microscopic margins in 2,084 localized primary adult soft tissue sarcomas. Annals of Surgery. 235 (3), 424-434 (2002).
- Krall, J. A., et al. The systemic response to surgery triggers the outgrowth of distant immune-controlled tumors in mouse models of dormancy. Science Translational Medicine. 10 (436), (2018).
- Bakos, O., Lawson, C., Rouleau, S., Tai, L. H. Combining surgery and immunotherapy: turning an immunosuppressive effect into a therapeutic opportunity. Journal for ImmunoTherapy of Cancer. 6 (1), 86 (2018).
- Predina, J. D., et al. Characterization of surgical models of postoperative tumor recurrence for preclinical adjuvant therapy assessment. American Journal of Translational Research. 4 (2), 206-218 (2012).
- Talmadge, J. E., Singh, R. K., Fidler, I. J., Raz, A. Murine models to evaluate novel and conventional therapeutic strategies for cancer. American Journal of Pathology. 170 (3), 793-804 (2007).
- Khong, A., et al. The efficacy of tumor debulking surgery is improved by adjuvant immunotherapy using imiquimod and anti-CD40. BMC Cancer. 14, 969 (2014).
- Broomfield, S., et al. Partial, but not complete, tumor-debulking surgery promotes protective antitumor memory when combined with chemotherapy and adjuvant immunotherapy. 암 연구학. 65 (17), 7580-7584 (2005).
- Predina, J. D., et al. A positive-margin resection model recreates the postsurgical tumor microenvironment and is a reliable model for adjuvant therapy evaluation. Cancer Biology & Therapy. 13 (9), 745-755 (2012).
- Tsukamoto, A., Serizawa, K., Sato, R., Yamazaki, J., Inomata, T. Vital signs monitoring during injectable and inhalant anesthesia in mice. Experimental Animals. 64 (1), 57-64 (2015).
- Overwijk, W. W., Restifo, N. P. B16 as a mouse model for human melanoma. Current Protocols in Immunology. , (2001).
- Predina, J., et al. Changes in the local tumor microenvironment in recurrent cancers may explain the failure of vaccines after surgery. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (5), E415-E424 (2013).
- Endo, M., Lin, P. P. Surgical margins in the management of extremity soft tissue sarcoma. Chinese Clinical Oncology. 7 (4), 37 (2018).
- Liu, J., et al. Improved Efficacy of Neoadjuvant Compared to Adjuvant Immunotherapy to Eradicate Metastatic Disease. Cancer Discovery. 6 (12), 1382-1399 (2016).
- Park, C. G., et al. Extended release of perioperative immunotherapy prevents tumor recurrence and eliminates metastases. Science Translational Medicine. 10 (433), (2018).
- Tai, L. H., et al. A mouse tumor model of surgical stress to explore the mechanisms of postoperative immunosuppression and evaluate novel perioperative immunotherapies. Journal of Visualized Experiments. (85), e51253 (2014).
- Gast, C. E., Shaw, A. K., Wong, M. H., Coussens, L. M. Surgical Procedures and Methodology for a Preclinical Murine Model of De Novo Mammary Cancer Metastasis. Journal of Visualized Experiments. (125), (2017).
- Qiu, W., Su, G. H. Development of orthotopic pancreatic tumor mouse models. Methods in Molecular Biology. 980, 215-223 (2013).
- Erstad, D. J., et al. Orthotopic and heterotopic murine models of pancreatic cancer and their different responses to FOLFIRINOX chemotherapy. Disease Models & Mechanisms. 11 (7), (2018).
