JoVE Journal > Bioengineering
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Results
Discussion
Disclosures
Acknowledgements
Materials
References
자동 번역
생체공학

Fremstilling af Zero Mode Waveguides for høj koncentration enkelt molekyle mikroskopi

Published: May 12, 2020
doi:
10.3791/61154
, , , , ,
1Pennsylvania Muscle Institute, Perelman School of Medicine,University of Pennsylvania, 2Department of Physics,West Chester University

Summary

Beskrevet her er en nanosfære litografi metode til parallel fremstilling af nul mode waveguides, som er arrays af nanoapertures i en metal-klædt glas mikroskopi coverslip for enkelt molekyle billeddannelse på nano-til mikromolar koncentrationer af fluorophores. Metoden udnytter kolloid krystal selvmontering til at oprette en waveguide skabelon.

Abstract

I enkeltmolekyle fluorescens enzymologi, baggrund fluorescens fra mærkede substrater i opløsning ofte begrænser fluorophore koncentration til pico- til nanomolar intervaller, flere størrelsesordener mindre end mange fysiologiske ligand koncentrationer. Optiske nanostrukturer kaldet zero mode waveguides (ZMWs), som er 100−200 nm i diameteråbninger fremstillet i et tyndt ledende metal som aluminium eller guld, tillader billeddannelse af individuelle molekyler ved mikromolarkoncentrationer af fluorophorer ved at begrænse synlig lysudledning til zeptoliter effektive mængder. Behovet for dyrt og specialiseret nanofabrikationsudstyr har imidlertid udelukket udbredt brug af Z BMW’er. Typisk opnås nanostrukturer som Z BMW’er ved direkte skrivning ved hjælp af elektronstråle litografi, som er sekventiel og langsom. Her, kolloid, eller nanosfære, litografi bruges som en alternativ strategi for at skabe nanometer-skala masker til waveguide fabrikation. Denne rapport beskriver tilgangen i detaljer med praktiske overvejelser for hver fase. Metoden gør det muligt at lave tusindvis af aluminiums- eller guld-Z BMW’er parallelt med endelige waveguide-diametre og dybder på 100−200 nm. Der kræves kun almindeligt laboratorieudstyr og en termisk fordamper til metalaflejring. Ved at gøre Z BMW’er mere tilgængelige for det biokemiske samfund kan denne metode lette studiet af molekylære processer ved cellulære koncentrationer og hastigheder.

Introduction

Enkeltmolekyleteknikker såsom enkeltmolekyle fluorescensresonansenergioverførsel (smFRET) eller enkeltmolekyle fluorescenskorrelationsspektroskopi (FCS) er kraftfulde værktøjer til molekylær biofysik, der gør det muligt at studere dynamiske bevægelser, konformationer og interaktioner mellem individuelle biomolekyler i processer som transskription1,2,3, oversættelse4,5,6og mange andre7. For smFRET er total intern refleksions-fluorescens (TIRF) mikroskopi en almindelig metode, fordi mange tøjrede molekyler kan følges over tid, og den evanescentbølge, der genereres af TIR, er begrænset til en 100−200 nm region, der støder op til coverslip8. Men selv med denne begrænsning af excitationsvolumen skal fluorophorer af interesse stadig fortyndes til pM- eller nM-intervaller for at detektere enkeltmolekylesignaler over baggrundsfluorecens9. Da Michaelis-Menten konstanter af cellulære enzymer er typisk i μM til mM rækkevidde10, biokemiske reaktioner i enkelt molekyle undersøgelser er normalt meget langsommere end dem i cellen. For eksempel forekommer proteinsyntese ved 15−20 aminosyrer pr. Sekund i E. coli11,12, mens de fleste prokaryote ribosomer i smFRET-eksperimenter oversætter ved 0,1−1 aminosyre pr. Sekund13. I proteinsyntese viste krystalstrukturer og smFRET på fastlåste ribosomer, at overførsels-RNA’er (tRNA’er) svinger mellem ‘hybride’ og ‘klassiske’ tilstande før tRNA-mRNA-translokation trin14,15. Men når fysiologiske koncentrationer af translokation GTPase faktor, EF-G, var til stede, en anden kropsbygning, mellemliggende mellem hybrid og klassiske stater, blev observeret i smFRET6. Det er vigtigt at studere dynamiske molekylære processer med hastigheder og koncentrationer svarende til dem i cellen, men er fortsat en teknisk udfordring.

En strategi til at øge koncentrationen af fluorescerende substrater er brugen af metalbaserede, sub-synlige bølgelængdeåbninger, kaldet nultilstandsbølgeguider (ZMWs), til at generere begrænsede excitationsfelter, der selektivt ophidser biomolekyler lokaliseret i åbningerne16 (Figur 1). Åbningerne er typisk 100−200 nm i diameter og 100−150 nm i dybden17. Over en cutoff bølgelængde relateret til størrelsen og formen af brøndene (λc ≈ 2,3 gange diameteren for cirkulære waveguides med vand som dielektrisk medium18), ingen formering tilstande er tilladt i waveguide, og dermed udtrykket nul mode waveguides. Men en oscillerende elektromagnetisk felt, nævnte en evanescent bølge, eksponentielt henfalder i intensitet stadig tunneler en kort afstand ind i waveguide18,19. Selv ligner TIR evanescent bølger, ZMW evanescent bølger har en kortere henfald konstant, hvilket resulterer i 10−30 nm effektiv excitation region inden for waveguide. Ved mikromolarkoncentrationer af fluorescerende mærkede ligands er kun et eller nogle få molekyler samtidig til stede inden for excitationsregionen. Denne begrænsning af excitationsvolumen og deraf følgende reduktion af baggrundsfluorescens muliggør fluorescensbilleddannelse af enkelte molekyler i biologisk relevante koncentrationer. Dette er blevet anvendt på mange systemer20, herunder FCS-målinger af enkeltproteindiffusion21, enkeltmolekyle FRET-målinger af lav-affinitets ligand-protein22 og proteinproteininteraktioner23og spektroelektriske målinger af enkeltmolekyleomsætningshændelser24.

Z BMW’er er fremstillet ved direkte at mønstre et metallag ved hjælp af ionstrålefræsning25,26 eller elektronstråle litografi (EBL) efterfulgt af plasma-ætsning16,27. Disse maskeløse litografimetoder skaber bølgeledere i serier og kræver typisk adgang til specialiserede nanofabrikker, hvilket forhindrer udbredt anvendelse af ZMW-teknologi. En anden metode, ultraviolet nanoimprint litografi lift-off28, bruger en kvarts dias skimmel til at trykke en omvendt ZMW skabelon på en modstå film som et stempel. Mens denne metode er mere strømlinet, kræver den stadig EBL til fremstilling af kvartsformen. Denne artikel præsenterer protokollen for en enkel og billig skabelon fabrikation metode, der ikke kræver EBL eller ion-stråle fræsning og er baseret på tæt pakning af nanosfærer til at danne en litografisk maske.

Nanosfære eller “naturlig” litografi, som først blev foreslået i 1982 af Deckman og Dunsmuir29,30, bruger selvsamling af monodisperse kolloid partikler, der spænder fra snesevis af nanometer til snesevis af mikrometer31, til at skabe skabeloner til overflademønstre via ætsning og / eller deposition af materialer. De todimensionale (2D) eller tredimensionelle (3D) udvidede periodiske arrays af kolloide partikler, kaldet kolloide krystaller, er kendetegnet ved en lys iriscence fra spredning og diffraktion32. Selvom denne maskeringsmetode er mindre udbredt end elektronstråle eller fotolitografi, er den enkel, billig og let skaleret ned for at skabe funktionsstørrelser under 100 nm.

At lede selvsamlingen af kolloide partikler bestemmer succesen med at bruge kolloide krystaller som masker til overflademønstre. Hvis partiklernes størrelse og form er homogene, kan kolloide partikler let samles selv med sekskantet pakning, drevet af entropisk udtømning33. Vandfordampning efter dråbebelægning er en effektiv vej til sediment af kolloide partiklerne, selv om andre metoder omfatter dip-coating34, spin coating35, elektrophoretic deposition36og konsolidering ved en luft-vand interface37. Nedenstående protokol er baseret på fordampningssedimenteringsmetoden, som var den enkleste at implementere. De trekantede interstices mellem tætpakkede polystyrenperler danner åbninger, hvor man kan plade et offermetal, danne stillinger(figur 2 og supplerende figur 1). Kort udglødning af perlerne, før dette trin justerer formen og diameteren af disse stillinger. Perlerne fjernes, et sidste metallag deponeres omkring stolperne, og derefter fjernes stolperne. Efter de to metalaflejringstrin på kolloid nanomaske, fjernelse af de mellemliggende stillinger og overfladekemimodifikation til passivering og tøjring er ZMW-arrays klar til brug til enkeltmolekylebilleddannelse. Mere omfattende karakterisering af ZMW optiske egenskaber efter fabrikation kan findes i en ledsagende artikel38. Udover en termisk fordamper til dampaflejring af metallerne kræves der ingen specialiserede værktøjer.

Protocol

BEMÆRK: Alle trin kan udføres i generelt laboratorierum. 1. Rengøring af glasskår For at give en ren overflade til fordampningsaflejring af kolloidpartikler skal du placere 24 x 30 mm optiske borosilikatglasovertræk (0,16−0,19 mm tykkelse) i de rillede skær på en coplinglaspletter til rengøring.BEMÆRK: Sørg for, at overtræksskålerne står oprejst og er godt adskilte, så alle overflader er tydeligt eksponeret under rengøringsprocessen. Hæld nok acetone i…

Representative Results

Polystyrenkolloidpartiklernes selvmontering via fordampningssedimentering (trin 2.1−2.13) kan give en række resultater, da det kræver kontrol af fordampningshastigheden for opløsningsmidler. Men da depositionerne er hurtige (10-15 min pr. runde), kan proceduren hurtigt optimeres til forskellige omgivende laboratorieforhold. Figur 3A viser en velformet kolloid skabelon efter aflejring og fordampning. Makroskopisk er området af perler cirkulært med kanter, der er defineret af en uigenne…

Discussion

Til kolloid selvmontering (protokol afsnit 2) fremskynder brugen af ethanol i stedet for vand, da ophængningsopløsningsmidlet fremskynder fordampningsprocessen, så skabeloner er klar i 2−3 minutter efter aflejring i stedet for 1−2 timer som i tidligere metoder48,49. Den fordampningssedisationsprotokol, der præsenteresher,er også enklere end tidligere sedimenteringsprotokoller, der kræver kontrol af overfladehældning, temperatur og luftvolume…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Dette arbejde blev støttet af NIH tilskud R01GM080376, R35GM118139, og NSF Center for Engineering MechanoBiology CMMI: 15-48571 til Y.E.G., og af en NIAID præ-ph.d.-stipendiat NRSA stipendium F30AI114187 til R.M.J.

Materials

1. Glass Coverslip Cleaning
Acetone Sigma 32201 1 L
Coplin glass staining jar Fisher Scientific 08-817 Staining jar with 8 grooves and molded glass cover
Coverslips VWR 48404-467 24 mm x 30 mm (No.1½, Rectangular)
Ethanol Sigma E7023 1 L
KOH Sigma 30603 Potassium hydroxide
Petri dishes Fisher Scientific R80115TS 100 mm diameter, 15 mm deep
Sonicator Branson Z245143 Tabletop ultrasonic cleaner, 5510
2. Evaporative Deposition of Polystyrene Beads
Clear storage container Fisher Scientific 50-110-8222 26 x 18 x 15 in.
Desk fan O2Cool FD05001A Any small desk (~5 in.) fan will work
Glass beaker Fisher Scientific 02-555-25B 250 mL
Humidity meter Fisher Scientific 11-661-19
Microcentrifuge tubes Fisher Scientific 21-402-903 1.5 mL
Polystyrene microspheres Polysciences 18602-15 1.00 µm diameter, non-functionalized
Triton X-100 deturgent Sigma X100 100 mL
3. Bead Annealing for Reducing Pore Size in the Colloidal Crystal Template
Aluminum plate Fisher Scientific AA11062RY Customized in-house to 14 cm x 14 cm
Ceramic hotplate Fisher Scientific HP88857100 13 x 8.2 x 3.8 in.
Temperature controller McMaster-Carr 38615K71 Read temperature with thermocouple probe
Thermocouple probe McMaster-Carr 9251T93 Type K, surface probe
4/5. Nanofabrication of Zero Mode Waveguides Using the Colloidal Crystal Template
Aluminum etchant Transene Type A
Aluminum pellets Kurt J. Lesker EVMAL40QXHB For electron beam evaporation
Chloroform Sigma 288306 1 L
Copper etchant Transene 49-1
Copper pellets Kurt J. Lesker EVMCU40QXQA For electron beam evaporation
Gold pellets Kurt J. Lesker EVMAUXX40G For electron beam evaporation
Lens paper Thorlabs MC-5
Plasma cleaner Harrick Plasma PDC-32G
Scotch tape Staples MMM119
Thin film deposition system Kurt J. Lesker PVD-75 Tabletop thermal evaporation system will also work
Titanium pellets Kurt J. Lesker EVMTI45QXQA For electron beam evaporation
Toluene Sigma 244511 1 L
Representative Results
COMSOL Multiphysics Modeling Software COMSOL, Inc.
Dual View spectral splitter Photometrics, Inc.
DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Kapanidis, A. N., et al. Initial transcription by RNA polymerase proceeds through a DNA-scrunching mechanism. Science. 314 (5802), 1144-1147 (2006).
  2. Santoso, Y., et al. Conformational transitions in DNA polymerase I revealed by single-molecule FRET. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (2), 715-720 (2010).
  3. Herbert, K. M., Greenleaf, W. J., Block, S. M. Single-molecule studies of RNA polymerase: motoring along. Annual Review of Biochemistry. 77, 149-176 (2008).
  4. Chen, C., et al. Dynamics of translation by single ribosomes through mRNA secondary structures. Nature Structural & Molecular Biology. 20 (5), 582-588 (2013).
  5. Chen, C., et al. Single-molecule fluorescence measurements of ribosomal translocation dynamics. Molecular Cell. 42 (3), 367-377 (2011).
  6. Jamiolkowski, R. M., Chen, C., Cooperman, B. S., Goldman, Y. E. tRNA Fluctuations Observed on Stalled Ribosomes Are Suppressed during Ongoing Protein Synthesis. Biophysical Journal. 113 (11), 2326-2335 (2017).
  7. Myong, S., Stevens, B. C., Ha, T. Bridging Conformational Dynamics and Function Using Single-Molecule Spectroscopy. Structure. 14 (4), 633-643 (2006).
  8. Martin-Fernandez, M. L., Tynan, C. J., Webb, S. E. A ‘pocket guide’ to total internal reflection fluorescence. Journal of Microscopy. 252 (1), 16-22 (2013).
  9. Holzmeister, P., Acuna, G. P., Grohmann, D., Tinnefeld, P. Breaking the concentration limit of optical single-molecule detection. Chemical Society Reviews. 43 (4), 1014-1028 (2014).
  10. Scheer, M., et al. BRENDA, the enzyme information system in 2011. Nucleic Acids Research. 39, 670-676 (2011).
  11. Kudva, R., et al. Protein translocation across the inner membrane of Gram-negative bacteria: the Sec and Tat dependent protein transport pathways. Research in Microbiology. 164 (6), 505-534 (2013).
  12. Talkad, V., Schneider, E., Kennell, D. Evidence for variable rates of ribosome movement in Escherichia coli. Journal of Molecular Biology. 104 (1), 299-303 (1976).
  13. Blanchard, S. C., Kim, H. D., Gonzalez, R. L., Puglisi, J. D., Chu, S. tRNA dynamics on the ribosome during translation. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 101 (35), 12893-12898 (2004).
  14. Dunkle, J. A., et al. Structures of the bacterial ribosome in classical and hybrid states of tRNA binding. Science. 332 (6032), 981-984 (2011).
  15. Kim, H. D., Puglisi, J. D., Chu, S. Fluctuations of transfer RNAs between classical and hybrid states. Biophysical Journal. 93 (10), 3575-3582 (2007).
  16. Levene, M. J., et al. Zero-mode waveguides for single-molecule analysis at high concentrations. Science. 299 (5607), 682-686 (2003).
  17. Zhu, P., Craighead, H. G. Zero-mode waveguides for single-molecule analysis. Annual Review of Biophysics. 41, 269-293 (2012).
  18. Pollack, G. L., Stump, D. R. . Electromagnetism. , (2002).
  19. Jackson, J. D. . Classical electrodynamics. Third edition. , (1999).
  20. Crouch, G. M., Han, D., Bohn, P. W. Zero-mode waveguide nanophotonic structures for single molecule characterization. Journal of Physics D: Applied Physics. 51 (19), 193001 (2018).
  21. Wenger, J., et al. Dual-color fluorescence cross-correlation spectroscopy in a single nanoaperture: towards rapid multicomponent screening at high concentrations. Optics Express. 14 (25), 12206-12216 (2006).
  22. Goldschen-Ohm, M. P., et al. Structure and dynamics underlying elementary ligand binding events in human pacemaking channels. eLife. 5, 20797 (2016).
  23. Miyake, T., et al. Real-Time Imaging of Single-Molecule Fluorescence with a Zero-Mode Waveguide for the Analysis of Protein-Protein Interaction. Analytical Chemistry. 80 (15), 6018-6022 (2008).
  24. Zhao, J., Branagan, S. P., Bohn, P. W. Single-Molecule Enzyme Dynamics of Monomeric Sarcosine Oxidase in a Gold-Based Zero-Mode Waveguide. Applied Spectroscopy. 66 (2), 163-169 (2012).
  25. Fore, S., Yuen, Y., Hesselink, L., Huser, T. Pulsed-interleaved excitation FRET measurements on single duplex DNA molecules inside C-shaped nanoapertures. Nano Letters. 7 (6), 1749-1756 (2007).
  26. Rigneault, H., et al. Enhancement of single-molecule fluorescence detection in subwavelength apertures. Physical Review Letters. 95 (11), 117401 (2005).
  27. Foquet, M., et al. Improved fabrication of zero-mode waveguides for single-molecule detection. Journal of Applied Physics. 103 (3), 034301 (2008).
  28. Wada, J., et al. Fabrication of Zero-Mode Waveguide by Ultraviolet Nanoimprint Lithography Lift-Off Process. Japanese Journal of Applied Physics. 50 (6), 06 (2011).
  29. Fischer, U. C., Zingsheim, H. P. Submicroscopic pattern replication with visible light. Journal of Vacuum Science and Technology. 19 (4), 881-885 (1981).
  30. Deckman, H. W., Dunsmuir, J. H. Natural lithography. Applied Physics Letters. 41 (4), 377-379 (1982).
  31. Li, B., Zhou, D., Han, Y. Assembly and phase transitions of colloidal crystals. Nature Reviews Materials. 1 (2), 15011 (2016).
  32. Bohn, J. J., Tikhonov, A., Asher, S. A. Colloidal crystal growth monitored by Bragg diffraction interference fringes. Journal of Colloid and Interface Science. 350 (2), 381-386 (2010).
  33. Dimitrov, A. S., Nagayama, K. Continuous Convective Assembling of Fine Particles into Two-Dimensional Arrays on Solid Surfaces. Langmuir. 12 (5), 1303-1311 (1996).
  34. Pisco, M., et al. Nanosphere lithography for optical fiber tip nanoprobes. Light: Science & Applications. 6 (5), 16229 (2017).
  35. Chandramohan, A., et al. Model for large-area monolayer coverage of polystyrene nanospheres by spin coating. Scientific Reports. 7, 40888 (2017).
  36. Besra, L., Liu, M. A review on fundamentals and applications of electrophoretic deposition (EPD). Progress in Materials Science. 52 (1), 1-61 (2007).
  37. Yu, J., et al. Preparation of High-Quality Colloidal Mask for Nanosphere Lithography by a Combination of Air/Water Interface Self-Assembly and Solvent Vapor Annealing. Langmuir. 28 (34), 12681-12689 (2012).
  38. Jamiolkowski, R. M., et al. Nanoaperture fabrication via colloidal lithography for single molecule fluorescence analysis. PLoS ONE. 14 (10), 0222964 (2019).
  39. Innocenzi, P., et al. Evaporation of Ethanol and Ethanol-Water Mixtures Studied by Time-Resolved Infrared Spectroscopy. The Journal of Physical Chemistry A. 112 (29), 6512-6516 (2008).
  40. Rieger, J. The glass transition temperature of polystyrene. Journal of Thermal Analysis. 46 (3), 965-972 (1996).
  41. Donev, A., Torquato, S., Stillinger, F. H., Connelly, R. Jamming in hard sphere and disk packings. Journal of Applied Physics. 95 (3), 989-999 (2004).
  42. Kinz-Thompson, C. D., et al. Robustly Passivated, Gold Nanoaperture Arrays for Single-Molecule Fluorescence Microscopy. ACS Nano. 7 (9), 8158-8166 (2013).
  43. Korlach, J., et al. Selective aluminum passivation for targeted immobilization of single DNA polymerase molecules in zero-mode waveguide nanostructures. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (4), 1176-1181 (2008).
  44. Chandradoss, S. D., et al. Surface passivation for single-molecule protein studies. Journal of Visualized Experiments. (86), e50549 (2014).
  45. Plénat, T., Yoshizawa, S., Fourmy, D. DNA-Guided Delivery of Single Molecules into Zero-Mode Waveguides. ACS Applied Materials & Interfaces. 9 (36), 30561-30566 (2017).
  46. Kudalkar, E. M., Davis, T. N., Asbury, C. L. Single-Molecule Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy. Cold Spring Harbor protocols. 2016 (5), 077800 (2016).
  47. Schindelin, J., et al. Fiji: an open-source platform for biological-image analysis. Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).
  48. Hoogenboom, J. P., Derks, D., Vergeer, P., Blaaderen, A. v. Stacking faults in colloidal crystals grown by sedimentation. The Journal of Chemical Physics. 117 (24), 11320-11328 (2002).
  49. Micheletto, R., Fukuda, H., Ohtsu, M. A Simple Method for the Production of a Two-Dimensional, Ordered Array of Small Latex Particles. Langmuir. 11 (9), 3333-3336 (1995).
  50. Denkov, N., et al. Mechanism of formation of two-dimensional crystals from latex particles on substrates. Langmuir. 8 (12), 3183-3190 (1992).
  51. Okubo, T. Convectional, sedimentation and drying dissipative patterns of colloidal crystals of poly(methyl methacrylate) spheres on a watch glass. Colloid and Polymer Science. 286 (11), 1307-1315 (2008).
  52. Ye, S., Routzahn, A. L., Carroll, R. L. Fabrication of 3D Metal Dot Arrays by Geometrically Structured Dynamic Shadowing Lithography. Langmuir. 27 (22), 13806-13812 (2011).
  53. Zhao, Y., et al. Dark-Field Illumination on Zero-Mode Waveguide/Microfluidic Hybrid Chip Reveals T4 Replisomal Protein Interactions. Nano Letters. 14 (4), 1952-1960 (2014).
  54. Goldschen-Ohm, M. P., White, D. S., Klenchin, V. A., Chanda, B., Goldsmith, R. H. Observing Single-Molecule Dynamics at Millimolar Concentrations. Angewandte Chemie International Edition. 56 (9), 2399-2402 (2017).
  55. Noriega, T. R., Chen, J., Walter, P., Puglisi, J. D. Real-time observation of signal recognition particle binding to actively translating ribosomes. eLife. 3, 04418 (2014).
  56. Uemura, S., et al. Real-time tRNA transit on single translating ribosomes at codon resolution. Nature. 464 (7291), 1012-1017 (2010).
  57. Choi, J., Puglisi, J. D. Three tRNAs on the ribosome slow translation elongation. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (52), 13691-13696 (2017).
  58. Eid, J., et al. Real-Time DNA Sequencing from Single Polymerase Molecules. Science. 323 (5910), 133-138 (2009).
  59. Martin, W. E., Srijanto, B. R., Collier, C. P., Vosch, T., Richards, C. I. A Comparison of Single-Molecule Emission in Aluminum and Gold Zero-Mode Waveguides. The Journal of Physical Chemistry A. 120 (34), 6719-6727 (2016).
  60. Wenger, J., et al. Single molecule fluorescence in rectangular nano-apertures. Optics Express. 13 (18), 7035-7044 (2005).
  61. Pineda, A. C., Ronis, D. Fluorescence quenching in molecules near rough metal surfaces. The Journal of Chemical Physics. 83 (10), 5330-5337 (1985).

Tags

Keywords: Zero Mode WaveguidesSingle Molecule MicroscopyNanosphere LithographyEvaporative DepositionPolystyrene BeadsHumidity ChamberOptical Borosilicate Glass CoverslipsAcetonePotassium HydroxideEthanolCentrifugationRelative Humidity
check_url/kr/61154?article_type=t

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Cite This Article
Chen, K. Y., Jamiolkowski, R. M., Tate, A. M., Fiorenza, S. A., Pfeil, S. H., Goldman, Y. E. Fabrication of Zero Mode Waveguides for High Concentration Single Molecule Microscopy. J. Vis. Exp. (159), e61154, doi:10.3791/61154 (2020).
Download Citation
Reprints and Permissions

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image