Summary

Een high-throughput beeldgeleide stereotactische neuronavigatie en gericht echografiesysteem voor het openen van bloed - hersenbarrière bij knaagdieren

Published: July 16, 2020
doi:

Summary

De bloed-hersenbarrière (BBB) kan tijdelijk worden verstoord met microbubble-gemedieerde gerichte echografie (FUS). Hier beschrijven we een stapsgewijs protocol voor BBB-opening met hoge doorvoer in vivo met behulp van een modulair FUS-systeem dat toegankelijk is voor niet-echografie-experts.

Abstract

De bloed-hersenbarrière (BBB) is een belangrijke hindernis geweest voor de behandeling van verschillende hersenziekten. Endotheelcellen, verbonden door nauwe verbindingen, vormen een fysiologische barrière die voorkomt dat grote moleculen (>500 Da) het hersenweefsel binnendringen. Microbubble-gemedieerde gerichte echografie (FUS) kan worden gebruikt om een voorbijgaande lokale BBB-opening te induceren, waardoor grotere geneesmiddelen het parenchym van de hersenen kunnen binnendringen.

Naast grootschalige klinische apparaten voor klinische vertaling, vereist preklinisch onderzoek voor therapieresponsbeoordeling van geneesmiddelkandidaten speciale echografie-opstellingen voor kleine dieren voor gerichte BBB-opening. Bij voorkeur maken deze systemen workflows met hoge doorvoer mogelijk met zowel hoge ruimtelijke precisie als geïntegreerde cavitatiebewaking, terwijl ze nog steeds kosteneffectief zijn in zowel initiële investeringen als bedrijfskosten.

Hier presenteren we een bioluminescentie- en röntgengeleid stereotactisch FUS-systeem voor kleine dieren dat is gebaseerd op in de handel verkrijgbaar componenten en voldoet aan de bovengenoemde vereisten. Bijzondere nadruk is gelegd op een hoge mate van automatisering die de uitdagingen vergemakkelijkt die doorgaans worden ondervonden in preklinische geneesmiddelenevaluatiestudies met een hoog volume. Voorbeelden van deze uitdagingen zijn de noodzaak van standaardisatie om de reproduceerbaarheid van gegevens te waarborgen, de variabiliteit binnen de groep te verminderen, de steekproefgrootte te verminderen en zo te voldoen aan ethische vereisten en onnodige werklast te verminderen. Het voorgestelde BBB-systeem is gevalideerd in het kader van BBB-opening gefaciliteerde geneesmiddelenleveringsproeven op patiënt-afgeleide xenograftmodellen van glioblastoom multiforme en diffuse midline glioma.

Introduction

De bloed-hersenbarrière (BBB) is een groot obstakel voor de levering van geneesmiddelen in het parenchym van de hersenen. De meeste therapeutische geneesmiddelen die zijn ontwikkeld, kruisen de BBB niet vanwege hun fysisch-chemische parameters (bijv. lipofielheid, moleculair gewicht, waterstofbindingsacceptoren en donoren) of worden niet behouden vanwege hun affiniteit voor effluxtransporters in de hersenen1,2. De kleine groep geneesmiddelen die de BBB kunnen kruisen, zijn meestal kleine lipofiele moleculen, die slechts effectief zijn bij een beperkt aantal hersenziekten1,2. Als gevolg hiervan zijn voor de meeste hersenziekten de farmacologische behandelingsopties beperkt en zijn nieuwe strategieën voor de toediening van geneesmiddelen nodig3,4.

Therapeutische echografie is een opkomende techniek die kan worden gebruikt voor verschillende neurologische toepassingen zoals BBB-verstoring (BBBD), neuromodulatie en ablatie4,5,6,7. Om een BBB-opening te bereiken met een extracorporale echografie-emitter door de schedel, wordt gerichte echografie (FUS) gecombineerd met microbubbels. Microbubble-gemedieerde FUS resulteert in een verhoogde biologische beschikbaarheid van geneesmiddelen in het hersenparenchym5,8,9. In aanwezigheid van geluidsgolven beginnen microbubbels te oscilleren bij het initiëren van transcytose en verstoring van de nauwe verbindingen tussen de endotheelcellen van de BBB, waardoor paracellulair transport van grotere moleculen mogelijk wordt10. Eerdere studies bevestigden de correlatie tussen de intensiteit van de akoestische emissie en de biologische impact op de BBB-opening11,12,13,14. FUS in combinatie met microbubbels is al gebruikt in klinische studies voor de behandeling van glioblastoom met temozolomide of liposomale doxorubicine als chemotherapeutisch middel, of voor de behandeling van de ziekte van Alzheimer en amyotrofische laterale sclerose5,9,15,16.

Aangezien echografie gemedieerde BBB-opening resulteert in geheel nieuwe mogelijkheden voor farmacotherapie, is preklinisch onderzoek voor klinische vertaling nodig om de therapierespons van geselecteerde geneesmiddelkandidaten te beoordelen. Dit vereist meestal een workflow met hoge doorvoer met zowel hoge ruimtelijke precisie als bij voorkeur een geïntegreerde cavitatiedetectie voor het bewaken van gerichte BBB-opening met een hoge reproduceerbaarheid. Indien mogelijk moeten deze systemen kosteneffectief zijn in zowel initiële investeringen als bedrijfskosten om schaalbaar te zijn op basis van de studiegrootte. De meeste preklinische FUS-systemen worden gecombineerd met MRI voor beeldbegeleiding en behandelingsplanning15,17,18,19. Hoewel MRI gedetailleerde informatie geeft over de anatomie en het volume van de tumor, is het een dure techniek, die over het algemeen wordt uitgevoerd door getrainde / bekwame operators. Bovendien is MRI met hoge resolutie mogelijk niet altijd beschikbaar voor onderzoekers in preklinische faciliteiten en vereist het lange scantijden per dier, waardoor het minder geschikt is voor farmacologische studies met hoge doorvoer. Opmerkelijk is dat voor preklinisch onderzoek op het gebied van neuro-oncologie, in het bijzonder infiltratieve tumormodellen, de mogelijkheid om de tumor te visualiseren en te targeten essentieel is voor het succes van de behandeling20. Momenteel wordt aan deze eis alleen voldaan door MRI of door tumoren die worden getransduceerd met een fotoproteïne, waardoor visualisatie met bioluminescentiebeeldvorming (BLI) in combinatie met toediening van het fotoproteïnesubstraat mogelijk is.

MRI-geleide FUS-systemen gebruiken vaak een waterbad om ultrasone golfvoortplanting te garanderen voor transcraniële toepassingen, waarbij het hoofd van het dier gedeeltelijk in het water wordt ondergedompeld, de zogenaamde ”bottom-up” systemen15,17,18. Hoewel deze ontwerpen over het algemeen goed werken in kleinere dierstudies, zijn ze een compromis tussen de bereidingstijden van dieren, draagbaarheid en realistisch handhaafbare hygiënische normen tijdens het gebruik. Als alternatief voor MRI omvatten andere geleidingsmethoden voor stereotactische navigatie het gebruik van een anatomische atlas voor knaagdieren21,22,23, laserpointer assisted visual sighting24, pinhole-assisted mechanical scanning device25, of BLI26. De meeste van deze ontwerpen zijn “top-down” systemen waarbij de transducer bovenop het hoofd van het dier wordt geplaatst, met het dier in een natuurlijke positie. De ”top-down” workflow bestaat uit een waterbad22,25,26 of een met water gevulde kegel21,24. Het voordeel van het gebruik van een transducer in een gesloten kegel is de compactere voetafdruk, kortere insteltijd en eenvoudige ontsmettingsmogelijkheden die de hele workflow vereenvoudigen.

De interactie van het akoestische veld met de microbubbels is drukafhankelijk en varieert van oscillaties met lage amplitude (stabiele cavitatie genoemd) tot voorbijgaande instorting van de bellen (inertial cavitatie genoemd)27,28. Er is een vaste consensus dat ultrasound-BBBD een akoestische druk vereist die ver boven de stabiele cavitatiedrempel ligt om succesvolle BBBD te bereiken, maar onder de traagheids cavitatiedrempel, die over het algemeen geassocieerd wordt met vasculaire/neuronale schade29. De meest voorkomende vorm van monitoring en controle is de analyse van het (back-)scattered akoestische signaal met behulp van passieve cavitatiedetectie (PCD), zoals voorgesteld door McDannold et al.12. PCD baseert zich op de analyse van de Fourier spectra van microbubble emissiesignalen, waarbij de sterkte en het uiterlijk van stabiele cavitatie-kenmerken (harmonischen, subharmonica en ultraharmonica) en traagheids cavitatiemarkers (breedbandrespons) in realtime kunnen worden gemeten.

Een “one size fits all” PCD-analyse voor nauwkeurige drukregeling is gecompliceerd vanwege de polydispersiteit van de microbubbelformulering (de oscillatieamplitude hangt sterk af van de bubbeldiameter), de verschillen in bubble shell-eigenschappen tussen merken en de akoestische oscillatie, die sterk afhankelijk is van frequentie en druk30,31,32. Als gevolg hiervan zijn veel verschillende PCD-detectieprotocollen voorgesteld, die zijn aangepast aan specifieke combinaties van al deze parameters en zijn gebruikt in verschillende toepassingsscenario’s (variërend van in vitro experimenten over protocollen voor kleine dieren tot PCD voor klinisch gebruik) voor robuuste cavitatiedetectie en zelfs voor retroactieve feedbackcontrole van de druk11,14,30,31,32,33,34,35. Het PCD-protocol dat in het kader van deze studie wordt gebruikt, is rechtstreeks afgeleid van McDannold et al.12 en bewaakt de harmonische emissie voor de aanwezigheid van stabiele cavitatie en breedbandgeluid voor traagheids cavitatiedetectie.

We hebben een beeldgestuurd neuronavigatie FUS-systeem ontwikkeld voor het transiënt openen van de BBB om de afgifte van geneesmiddelen in het parenchym van de hersenen te verhogen. Het systeem is gebaseerd op in de handel verkrijgbaar componenten en kan eenvoudig worden aangepast aan verschillende beeldvormingsmodaliteiten, afhankelijk van de beschikbare beeldvormingstechnieken in de dierenfaciliteit. Omdat we een workflow met hoge doorvoer nodig hebben, hebben we ervoor gekozen om röntgenfoto’s en BLI te gebruiken voor beeldbegeleiding en behandelingsplanning. Tumorcellen getransduceerd met een fotoproteïne (bijv. luciferase) zijn geschikt voor BLI imaging20. Na toediening van het fotoproteïnesubstraat kunnen tumorcellen in vivo worden gecontroleerd en kunnen tumorgroei en locatie worden bepaald20,36. BLI is een goedkope beeldvormingsmodaliteit, het maakt het mogelijk om de tumorgroei in de loop van de tijd te volgen, het heeft snelle scantijden en het correleert goed met tumorgroei gemeten met MRI36,37. We hebben ervoor gekozen om het waterbad te vervangen door een met water gevulde kegel die aan de transducer is bevestigd om flexibiliteit mogelijk te maken om het platform waarop het knaagdier is gemonteerd vrij te verplaatsen8,24. Het ontwerp is gebaseerd op een afneembaar platform dat is uitgerust met integratie van (I) stereotactisch platform voor kleine dieren (II) fiducial markers met zowel röntgen- als optische beeldcompatibiliteit (III) snel-afneembare anesthesiemasker en (IV) geïntegreerd temperatuurgeregeld dierverwarmingssysteem. Na de eerste inductie van anesthesie wordt het dier in een precieze positie op het platform gemonteerd waar het tijdens de hele procedure blijft. Bijgevolg passeert het hele platform alle stations van de workflow van de hele interventie, met behoud van een nauwkeurige en reproduceerbare positionering en aanhoudende anesthesie. De besturingssoftware maakt de automatische detectie van de fiducial markers mogelijk en registreert automatisch alle soorten beelden en beeldmodaliteiten (d.w.z. micro-CT, röntgen, BLI en fluorescentiebeeldvorming) in het referentiekader van het stereotactische platform. Met behulp van een automatische kalibratieprocedure is de brandpuntsafstand van de ultrasone transducer precies bekend binnenin, wat de automatische fusie van interventionele planning, akoestische levering en follow-up beeldvormingsanalyse mogelijk maakt. Zoals weergegeven in figuur 1 en figuur 2,biedt deze opstelling een hoge mate van flexibiliteit om specifieke experimentele workflows te ontwerpen en maakt het mogelijk om het dier op verschillende stations met elkaar te behandelen, wat op zijn beurt experimenten met hoge doorvoer vergemakkelijkt. We hebben deze techniek gebruikt voor succesvolle medicijnafgifte bij muis xenografts van hoogwaardig glioom zoals diffuus midline glioom.

Protocol

Alle in vivo experimenten zijn goedgekeurd door de Nederlandse ethische commissie (vergunningsnummer AVD114002017841) en het Dierenwelzijnsorgaan van de Vrije Universiteit Amsterdam. De onderzoekers werden getraind in de basis van het FUS-systeem om het ongemak van de dieren te minimaliseren. 1. Gericht echografiesysteem OPMERKING: De beschreven opstelling is een in eigen huis gebouwd BBB-storingssysteem op basis van in de handel verkrijgbare componenten en bevat een …

Representative Results

Het beschrevenFUS-systeem ( figuur 1 en figuur 2) en de bijbehorende workflow zijn gebruikt bij meer dan 100 dieren en produceerden reproduceerbare gegevens over zowel gezonde als tumordragende muizen. Op basis van de geregistreerde cavitatie en de spectrale dichtheid bij de harmonischen op het piekmoment van de microbubble bolus injectie, kan het spectrale vermogen van elke frequentie worden berekend met behulp van de Fourier-analyse zoals uitgelegd in stap 4 v…

Discussion

In deze studie ontwikkelden we een kosteneffectief beeldgestuurd FUS-systeem voor voorbijgaande BBB-verstoring voor verhoogde medicijnafgifte in het hersenparenchym. Het systeem werd grotendeels gebouwd met in de handel verkrijge componenten en in combinatie met röntgen en BLI. De modulariteit van het voorgestelde ontwerp maakt het gebruik van verschillende beeldvormende modaliteiten mogelijk voor planning en beoordeling in workflows met hoge doorvoer. Het systeem kan worden gecombineerd met uitgebreidere 3D-beeldvormin…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Dit project werd gefinancierd door de KWF-STW (Drug Delivery by Sonoporation in Childhood Diffuse Intrinsic Pontine Glioma and High-grade Glioma). Wij danken Ilya Skachkov en Charles Mougenot voor hun inbreng in de ontwikkeling van het systeem.

Materials

1 mL luer-lock syringe Becton Dickinson 309628 Plastipak
19 G needle Terumo Agani 8AN1938R1
23 G needle Terumo Agani 8AN2316R1
3M Transpore surgical tape Science applied to life 7000032707 or similar
Arbitrary waveform generator Siglent n.a. SDG1025, 25 MHz, 125 Msa/s
Automated stereotact in-house built n.a. Stereotact with all elements were in-house built
Bruker In-Vivo Xtreme Bruker n.a. Includes software
Buffered NaCl solution B. Braun Melsungen AG 220/12257974/110
Buprenorfine hydrochloride Indivior UK limitd n.a. 0.324 mg
Cage enrichment: paper-pulp smart home Bio services n.a.
Carbon filter Bickford NC0111395 Omnicon f/air
Ceramic spoon n.a n.a.
Cotton swabs n.a. n.a.
D-luciferin, potassium salt Gold Biotechnology LUCK-1
Ethanol VUmc pharmacy n.a. 70%
Evans Blue Sigma Aldrich E2129
Fresenius NaCl 0.9% Fresenius Kabi n.a. NaCl 0.9 %, 1000 mL
Histoacryl Braun Surgical n.a. Histoacryl 0.5 mL
Hydrophone Precision Acoustics n.a.
Insulin syringe Becton Dickinson 324825/324826 0.5 mL and 0.3 mL
Isoflurane TEVA Pharmachemie BV 8711218013196 250 mL
Ketamine Alfasan n.a. 10 %, 10 mL
Mouse food: Teklad global 18% protein rodent diet Envigo 2918-11416M
Neoflon catheter Becton Dickinson 391349 26 GA 0.6 x 19 mm
Oscilloscope Keysight technologies n.a. InfiniiVision DSOX024A
Plastic tubes Greiner bio-one 210261 50 mL
Power amplifier Electronics & Innovation Ltd 210L Model 210L
Preamplifier DC Coupler Precision Acoustics n.. Serial number: DCPS94
Scissors Sigma Aldrich S3146-1EA or similar
Sedazine AST Farma n.a. 2%
SonoVue microbubbles Bracco n.a. 8 µl/ml
Sterile water Fresenius Kabi n.a. 1000 mL
Syringe n.a. n.a. various syringes can be used
Temgesic Indivior UK limitd n.a. 0.3 mg/ml
Transducer Precision Acoustics n.a. 1 MHz
Tweezers Sigma Aldrich F4142-1EA or similar
Ultrasound gel Parker Laboratories Inc. 01-02 Aquasonic 100
Vidisic gel Bausch + Lomb n.a. 10 g

References

  1. Lipinski, C. A. Lead- and drug-like compounds: the rule-of-five revolution. Drug Discovery Today: Technologies. 1 (4), 337-341 (2004).
  2. Pardridge, W. M. Blood-brain barrier delivery. Drug Discovery Today. 12 (1-2), 54-61 (2007).
  3. Alli, S., et al. Brainstem blood brain barrier disruption using focused ultrasound: A demonstration of feasibility and enhanced doxorubicin delivery. Journal of Controlled Release. 281, 29-41 (2018).
  4. Burgess, A., Hynynen, K. Noninvasive and targeted drug delivery to the brain using focused ultrasound. ACS Chemical Neuroscience. 4 (4), 519-526 (2013).
  5. Meng, Y., et al. Safety and efficacy of focused ultrasound induced blood-brain barrier opening, an integrative review of animal and human studies. Journal of Controlled Release. 309, 25-36 (2019).
  6. Darrow, D. P. Focused Ultrasound for Neuromodulation. Neurotherapeutics. 16 (1), 88-99 (2019).
  7. Zhou, Y. F. High intensity focused ultrasound in clinical tumor ablation. World Journal of Clinical Oncology. 2 (1), 8-27 (2011).
  8. O’Reilly, M. A., Hough, O., Hynynen, K. Blood-Brain Barrier Closure Time After Controlled Ultrasound-Induced Opening Is Independent of Opening Volume. Journal of Ultrasound in Medicine. 36 (3), 475-483 (2017).
  9. Mainprize, T., et al. Blood-Brain Barrier Opening in Primary Brain Tumors with Non-invasive MR-Guided Focused Ultrasound: A Clinical Safety and Feasibility Study. Scientific Reports. 9 (1), 321 (2019).
  10. Dasgupta, A., et al. Ultrasound-mediated drug delivery to the brain: principles, progress and prospects. Drug Discovery Today: Technologies. 20, 41-48 (2016).
  11. O’Reilly, M. A., Waspe, A. C., Chopra, R., Hynynen, K. MRI-guided disruption of the blood-brain barrier using transcranial focused ultrasound in a rat model. Journal of Visualized Experiments. (61), (2012).
  12. McDannold, N., Vykhodtseva, N., Hynynen, K. Targeted disruption of the blood-brain barrier with focused ultrasound: association with cavitation activity. Physics in Medicine & Biology. 51 (4), 793 (2006).
  13. McDannold, N., Vykhodtseva, N., Hynynen, K. Blood-brain barrier disruption induced by focused ultrasound and circulating preformed microbubbles appears to be characterized by the mechanical index. Ultrasound in Medicine and Biology. 34 (5), 834-840 (2008).
  14. Sun, T., et al. Closed-loop control of targeted ultrasound drug delivery across the blood-brain/tumor barriers in a rat glioma model. Proceedings of the National Academy of Sciences. 114 (48), 10281-10290 (2017).
  15. Lipsman, N., et al. Blood-brain barrier opening in Alzheimer’s disease using MR-guided focused ultrasound. Nature Communications. 9 (1), 2336 (2018).
  16. Carpentier, A., et al. Clinical trial of blood-brain barrier disruption by pulsed ultrasound. Science Translational Medicine. 8 (343), 342 (2016).
  17. Chopra, R., Curiel, L., Staruch, R., Morrison, L., Hynynen, K. An MRI-compatible system for focused ultrasound experiments in small animal models. Medical Physics. 36 (5), 1867-1874 (2009).
  18. Kinoshita, M., McDannold, N., Jolesz, F. A., Hynynen, K. Targeted delivery of antibodies through the blood–brain barrier by MRI-guided focused ultrasound. Biochemical and Biophysical Research Communications. 340 (4), 1085-1090 (2006).
  19. Larrat, B., et al. MR-guided transcranial brain HIFU in small animal models. Physics in Medicine & Biology. 55 (2), 365 (2009).
  20. Contag, C. H., Jenkins, D., Contag, P. R., Negrin, R. S. Use of reporter genes for optical measurements of neoplastic disease in vivo. Neoplasia. 2 (1-2), 41 (2000).
  21. Choi, J. J., Pernot, M., Small, S. A., Konofagou, E. E. Noninvasive, transcranial and localized opening of the blood-brain barrier using focused ultrasound in mice. Ultrasound in Medicine & Biology. 33 (1), 95-104 (2007).
  22. Bing, C., et al. Trans-cranial opening of the blood-brain barrier in targeted regions using astereotaxic brain atlas and focused ultrasound energy. Journal of Therapeutic Ultrasound. 2 (1), 13 (2014).
  23. Marquet, F., et al. Real-time, transcranial monitoring of safe blood-brain barrier opening in non-human primates. PloS One. 9 (2), (2014).
  24. Anastasiadis, P., et al. characterization and evaluation of a laser-guided focused ultrasound system for preclinical investigations. Biomedical Engineering Online. 18 (1), 36 (2019).
  25. Liu, H. L., Pan, C. H., Ting, C. Y., Hsiao, M. J. Opening of the blood-brain barrier by low-frequency (28-kHz) ultrasound: a novel pinhole-assisted mechanical scanning device. Ultrasound in Medicine & Biology. 36 (2), 325-335 (2010).
  26. Zhu, L., et al. Focused ultrasound-enabled brain tumor liquid biopsy. Scientific Reports. 8 (1), 1-9 (2018).
  27. Bader, K. B., Holland, C. K. Gauging the likelihood of stable cavitation from ultrasound contrast agents. Physics in Medicine & Biology. 58 (1), 127 (2012).
  28. Neppiras, E. Acoustic cavitation series: part one: Acoustic cavitation: an introduction. Ultrasonics. 22 (1), 25-28 (1984).
  29. Aryal, M., Arvanitis, C. D., Alexander, P. M., McDannold, N. Ultrasound-mediated blood-brain barrier disruption for targeted drug delivery in the central nervous system. Advanced Drug Delivery Reviews. 72, 94-109 (2014).
  30. Tung, Y. S., Choi, J. J., Baseri, B., Konofagou, E. E. Identifying the inertial cavitation threshold and skull effects in a vessel phantom using focused ultrasound and microbubbles. Ultrasound in Medicine & Biology. 36 (5), 840-852 (2010).
  31. Arvanitis, C. D., Livingstone, M. S., Vykhodtseva, N., McDannold, N. Controlled ultrasound-induced blood-brain barrier disruption using passive acoustic emissions monitoring. PloS One. 7 (9), (2012).
  32. Tsai, C. H., Zhang, J. W., Liao, Y. Y., Liu, H. L. Real-time monitoring of focused ultrasound blood-brain barrier opening via subharmonic acoustic emission detection: implementation of confocal dual-frequency piezoelectric transducers. Physics in Medicine & Biology. 61 (7), 2926 (2016).
  33. Chen, W. S., Brayman, A. A., Matula, T. J., Crum, L. A. Inertial cavitation dose and hemolysis produced in vitro with or without Optison. Ultrasound in Medicine & Biology. 29 (5), 725-737 (2003).
  34. Qiu, Y., et al. The correlation between acoustic cavitation and sonoporation involved in ultrasound-mediated DNA transfection with polyethylenimine (PEI) in vitro. Journal of Controlled Release. 145 (1), 40-48 (2010).
  35. Sun, T., Jia, N., Zhang, D., Xu, D. Ambient pressure dependence of the ultra-harmonic response from contrast microbubbles. The Journal of the Acoustical Society of America. 131 (6), 4358-4364 (2012).
  36. Rehemtulla, A., et al. Rapid and quantitative assessment of cancer treatment response using in vivo bioluminescence imaging. Neoplasia. 2 (6), 491-495 (2000).
  37. Puaux, A. L., et al. A comparison of imaging techniques to monitor tumor growth and cancer progression in living animals. International Journal of Molecular Imaging. 2011, (2011).
  38. Wu, S. K., et al. Characterization of different microbubbles in assisting focused ultrasound-induced blood-brain barrier opening. Scientific Reports. 7, 46689 (2017).
  39. van den Broek, M. P., Groenendaal, F., Egberts, A. C., Rademaker, C. M. Effects of hypothermia on pharmacokinetics and pharmacodynamics. Clinical Pharmacokinetics. 49 (5), 277-294 (2010).
  40. Paxinos, G., Franklin, K. B. . Paxinos and Franklin’s the mouse brain in stereotaxic coordinates. , (2019).
  41. Saunders, N. R., Dziegielewska, K. M., Møllgård, K., Habgood, M. D. Markers for blood-brain barrier integrity: how appropriate is Evans blue in the twenty-first century and what are the alternatives. Frontiers in Neuroscience. 385, 385 (2015).
  42. Yao, L., Xue, X., Yu, P., Ni, Y., Chen, F. Evans blue dye: a revisit of its applications in biomedicine. Contrast Media & Molecular Imaging. 2018, (2018).
  43. Caretti, V., et al. Monitoring of tumor growth and post-irradiation recurrence in a diffuse intrinsic pontine glioma mouse model. Brain Pathology. 21 (4), 441-451 (2011).
  44. Yoshimura, J., Onda, K., Tanaka, R., Takahashi, H. Clinicopathological study of diffuse type brainstem gliomas: analysis of 40 autopsy cases. Neurologia Medico-Chirurgica. 43 (8), 375-382 (2003).
  45. Yang, F. Y., et al. Micro-SPECT/CT-based pharmacokinetic analysis of 99mTc-diethylenetriaminepentaacetic acid in rats with blood-brain barrier disruption induced by focused ultrasound. Journal of Nuclear Medicine. 52 (3), 478-484 (2011).
  46. Sirsi, S., Borden, M. Microbubble compositions, properties and biomedical applications. Bubble Science, Engineering & Technology. 1 (1-2), 3-17 (2009).
  47. Greis, C. Technology overview: SonoVue. European Radiology. 14, 11-15 (2004).
  48. Schneider, M. Characteristics of sonovue. Echocardiography. 16, 743-746 (1999).
  49. Talu, E., Powell, R. L., Longo, M. L., Dayton, P. A. Needle size and injection rate impact microbubble contrast agent population. Ultrasound in Medicine & Biology. 34 (7), 1182-1185 (2008).
  50. Pinton, G., et al. Attenuation, scattering, and absorption of ultrasound in the skull bone. Medical Physics. 39 (1), 299-307 (2012).
  51. Constantinides, C., Mean, R., Janssen, B. J. Effects of isoflurane anesthesia on the cardiovascular function of the C57BL/6 mouse. ILAR journal/National Research Council, Institute of Laboratory Animal Resources. 52, 21 (2011).
  52. McDannold, N., Zhang, Y., Vykhodtseva, N. The effects of oxygen on ultrasound-induced blood-brain barrier disruption in mice. Ultrasound in Medicine & Biology. 43 (2), 469-475 (2017).
  53. McDannold, N., Zhang, Y., Vykhodtseva, N. Blood-brain barrier disruption and vascular damage induced by ultrasound bursts combined with microbubbles can be influenced by choice of anesthesia protocol. Ultrasound in Medicine and Biology. 37 (8), 1259-1270 (2011).

Play Video

Cite This Article
Haumann, R., ’t Hart, E., Derieppe, M. P. P., Besse, H. C., Kaspers, G. J. L., Hoving, E., van Vuurden, D. G., Hulleman, E., Ries, M. A High-Throughput Image-Guided Stereotactic Neuronavigation and Focused Ultrasound System for Blood-Brain Barrier Opening in Rodents. J. Vis. Exp. (161), e61269, doi:10.3791/61269 (2020).

View Video