Prédire l’amputation à l’aide de cellules progénitrices mononucléaires circulantes locales chez les patients traités par angioplastie atteints d’ischémie des membres critiques
Summary
L’amputation de membre inférieur peut se produire même après angioplastie des vaisseaux obstrués dans l’ischémie critique de membre (CLI). Les cellules progénitrices mononucléaires (PMC) reflètent la réparation vasculaire. Le protocole actuel décrit la quantification des MPCs de la circulation près de l’angioplastie, et sa relation avec le dysfonctionnement endothélial et la prédiction de l’amputation de membre inférieur.
Abstract
L’ischémie critique de membre (CLI) représente un stade avancé de la maladie artérielle périphérique. L’angioplastie améliore le flux sanguin vers le membre inférieur; cependant, quelques patients progressent irréversiblement à l’amputation de membre. L’étendue des dommages vasculaires et les mécanismes de réparation vasculaire sont des facteurs affectant des résultats post-angioplastie. Les cellules progénitrices mononucléaires (PMC) sont réactives aux dommages vasculaires et à la réparation, avec la capacité de refléter des maladies vasculaires. Le présent protocole décrit la quantification des MPCs obtenus de la circulation sanguine du navire près du site d’angioplastie, aussi bien que sa relation avec le dysfonctionnement endothélial et sa capacité prédictive pour l’amputation de membre dans les 30 prochains jours après angioplastie dans les patients présentant CLI.
Introduction
La maladie artérielle périphérique (PAD) est caractérisée par une obstruction vasculaire chronique et progressive avec limitation de l’approvisionnement en sang1. À l’échelle mondiale, le PAD des membres inférieurs touche environ 10 % de la population âgée, tandis que jusqu’à 7 % de ces cas sont soumis à l’amputation desmembres 2,3.
Critical Limb Ischemia (CLI) représente la présentation la plus sérieuse de PAD1. Les patients éprouvent habituellement la douleur au repos, aux ulcères, ou à la gangrène attribuables aux artères occluses ; tandis que le pronostic clinique est défavorable et marqué par un risque de 30% d’amputation et de mortalité de membre pendant 1an 3,4,5.
L’angioplastie est une procédure endovasculaire mini-invasive qui peut rétablir le flux sanguin vers le membre inférieur chez les patients atteints de CLI; cependant, quelques patients exigeront inévitablement l’amputation majeure de membre, même après thérapie d’angioplastie1,5. L’identification tôt des résultats défavorables après angioplastie est tout à fait valable, due à la possibilité de l’application de thérapie.
Les facteurs de risque traditionnels peuvent fournir une capacité prédictive limitée pour l’amputation majeure de membre dans les patients présentant CLI subissant l’angioplastie6. Les biomarqueurs orientés vers la pathophysiologie représentent de nouvelles méthodes avec des applications cliniques potentielles, qui peuvent résulter spécifiquement utiles dans les maladies liées aux dommagesvasculaires 7. Aujourd’hui, la participation des populations cellulaires propriétaires de propriétés de réparation endothéliale, sur le site de la plaque athéroclérotique, a été de plus enplus reconnue 8,9.
Les cellules progénitrices mononucléaires (PMC) sont dérivées de la moelle osseuse et possèdent des caractéristiques structurelles et fonctionnelles des cellules souches ayant des capacités régénératrices vasculaires. En raison de la capacité de MPC à proliférer, migrer et montrer l’adhérence vasculaire ; ces cellules sont devenues de bons candidats pour refléter la réparation endothéliale en réponse à l’ischémie10,11,12. En outre, l’intérêt continu pour les mécanismes sous-jacents aux lésions vasculaires a motivé l’exploration du rôle pronostique des biomarqueurs locaux, puisqu’ils sont considérés comme refléter les dommages vasculaireset la réparation 7,13,14.
Le but de la présente étude est de décrire comment déterminer la quantité de MPCs qui circulent près de l’obstruction vasculaire dans les patients présentant CLI subissant l’angioplastie ; et comment évaluer la relation entre les CPM avec des indicateurs de dysfonctionnement endothélial et d’amputation des membres.
Comparé au pronostic basé sur des comorbidités et des dispositifs vasculaires intrinsèques, la quantité de MPCs locaux montrent la capacité spécifique de prévoir des résultats cliniques concernant le dysfonctionnement endothélial et l’amputation de membre. Uniformément, quelques études ont décrit le rôle pronostique des biomarqueurs semblables pendant l’évaluation des patients présentant PAD15,16.
Basé sur des résultatsprécédents 7,la méthode décrite ici peut être utile pour une identification tôt de la population à risque des résultats vasculaires défavorables dans plusieurs arrangements cliniques, tels que l’ischémie inférieure de membre et de coronaire, course, vascularite, thrombose veineuse et d’autres impliquant des dommages vasculaires et la réparation.
Protocol
Representative Results
Discussion
La collecte de sang à l’emplacement précis du bloc vasculaire peut montrer des difficultés techniques ; par conséquent, nous avons effectué la collecte de sang à proximité du bloc vasculaire. De même, la quantité de MPCs près de la plaque vasculaire semble être fortement dynamique et peut provenir des variations avant et après l’angioplastie. Selon nos observations, il est recommandé d’évaluer les changements de base et de post-angioplastie de 30 min dans le nombre de MPCs, puisqu’ils peuvent reflé…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Les auteurs remercient le soutien du Programme institutionnel E015 pour le projet ID 356.2015.
Materials
| BSA | Roche | 10735086001 | Bovine Serum Albumin (BSA) as a buffering agent, stabilizer, standard and for blending. |
| Calibration Beads | Miltenyi Biotec / MACS | #130-093-607 | MACQuant calibration beads are supplied in aqueous solution containing 0.05% sodium azide. 3.5 ml for up to 100 tests |
| CD133/1 (AC133)-PE | Milteny Biotec / MACS | #130-080-801 | Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer |
| CD184 (CXCR4)-PE-VIO770 | Miltenyi Biotec / MACS | #130-103-798 | Monoclonal, Isotype recombinant human IgG1, conjugated |
| CD309 (VEGFR-2/KDR)-APC | Miltenyi Biotec / MACS | #130-093-601 | Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer |
| CD34-FITC | Miltenyi Biotec / MACS | #130-081-001 | The monoclonal antibody clone AC136 detecs a class III epitope of the CD34 |
| CD45- VioBlue | Miltenyi Biotec / MACS | #130-092-880 | Monoclonal CD45 Antibody, human conjugated |
| Conical Tubes | Thermo SCIENTIFIC | #339651 | 15ml conical centrifuge tubes |
| Cytometry Tubes | FALCON Corning Brand | #352052 | 5 mL Polystyrene Round-Bottom Tube. 12×75 style. Sterile. |
| EDTA | BIO-RAD | #161-0729 | Heavy metals, (as Pb) <10ppm, Fe<0.01%, As<1ppm, Insolubles<0.005% |
| Improved Neubauer | Without brand | Without catalog number | Hemocytometer for cell counting. (range 0.1000mm, 0.0025mm2) |
| K2 EDTA Blood Collection Tubes | BD Vacutainer | #367863 | Lilac plastic vacutainer tube (K2E) 10.8mg, 6 mL. |
| Lymphoprep | Stemcell Technologies | 01-63-12-002-A | Sterile and checked on the presence of endotoxins. Density: 1.077±0.001g/mL |
| Paraformaldehyde | SIGMA-ALDRICH | #SZBF0920V | Fixation of biological samples, (powder, 95%) |
| Pipette Transfer 1,3mL | CRM Globe | PF1016, PF1015 | The transfer pipette is a tool that facilitates liquid transfer with greater accuracy. |
| Test Tubes | KIMBLE CHASE | 45060 13100 | Heat-resistant test tubes. SIZE/CAP 13 x 100 mm |
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