중요 사지 이혈증을 가진 Angioplasty 처리한 환자에 있는 현지 순환 단핵 전구 세포를 사용하여 절단을 예측합니다
Summary
낮은 사지 절단은 중요한 사지 허혈 (CLI)에 있는 방해한 선박의 혈관 성형술 후에조차 생길 수 있습니다. 단핵 전구 세포 (MpC)는 혈관 수리를 반영합니다. 본 프로토콜은 혈관 성형술에 가까운 순환에서 MpC의 정량화, 내피 기능 장애및 낮은 사지 절단의 예측과의 관계를 설명합니다.
Abstract
중요한 사지 허혈 (CLI)은 말초 동맥 질환의 고급 단계를 나타냅니다. 혈관 성형술은 하반신에 혈류를 향상시킵니다; 그러나 일부 환자는 팔다리 절단으로 돌이킬 수 없이 진행됩니다. 혈관 손상의 정도와 혈관 수리 메커니즘은 혈관 성형술 후 결과에 영향을 미치는 요인입니다. 단핵 전구 세포 (MpC)는 혈관 손상을 반사하는 능력으로 혈관 손상 및 수리에 반응합니다. 본 프로토콜은 혈관 성형술 부위에 가까운 혈관으로부터 혈액 순환에서 얻은 MpC의 정량화뿐만 아니라 내피 기능 장애와의 관계 및 CLI 환자의 혈관 성형술 후 다음 30 일 동안 사지 절단을위한 예측 능력을 설명합니다.
Introduction
말초 동맥 질환(PAD)은 혈액 공급1의한계를 가진 만성 및 진행성 혈관 방해를 특징으로 한다. 전 세계적으로, 하반신의 PAD는 노인 인구의 약 10%에 영향을 미치고, 그러한 경우의 최대 7%는 사지 절단2,3에제출된다.
중요 사지 허혈 (CLI)는 PAD1의가장 심각한 프리젠 테이션을 나타냅니다. 환자는 일반적으로 폐색동맥에 기인하는 휴식, 궤양, 또는 회지에서 고통을 경험합니다; 임상 예후는 불리하고 1 년 동안 사지 절단 및 사망률의 30 % 위험에 의해 표시되는 동안3,4,5.
혈관 성형술은 CLI환자에서 하반신에 혈류를 회복할 수 있는 최소 침습성 혈관 내 시술이다. 그러나, 몇몇 환자는 혈관 성형술 치료1,5후에조차, 필연적으로 중요한 사지 절단을 요구할 것입니다 . 혈관 성형술 후 불리한 결과의 조기 식별은 매우 귀중하다, 치료 집행의 가능성으로 인해.
전통적인 위험 요소는 혈관 성형술 6을 겪고 있는 CLI를 가진 환자에 있는 중요한 사지 절단을 위한 제한적인 예측 능력을 제공할 수있습니다. 병리학 지향 바이오마커는 잠재적인 임상 응용을 가진 새로운 방법을 나타내며, 이는 혈관 손상과 관련된 질병에 특히 유용할 수 있다7. 요즘, 죽상 경화성 플라크의 사이트에 내피 수리 특성을 소유 하는 세포 인구의 참여, 점점 인식 되고있다8,9.
단핵 전구 세포 (MpC)는 골수에서 파생되고 혈관 재생 능력을 가진 줄기 세포의 구조적 및 기능적 특성을 소유하고 있습니다. MPC의 증식 능력으로 인해 혈관 준수를 연장, 마이그레이션 및 표시; 이들 세포는 허혈10,11,12에대한 응답으로 내피 수리를 반영하는 좋은 후보가 되었다. 또한, 혈관 손상의 근본적인 메커니즘에 대한 지속적인 관심은 혈관 손상을 반영하고7,13,14를수리하는것으로 간주되기 때문에 국소 발생 바이오마커의 예후 역할을 탐구하는 동기를 부여하고 있다.
본 연구의 목적은 혈관 성형술을 겪고 있는 CLI를 가진 환자에 있는 혈관 방해에 가깝게 순환하는 MpC의 양을 결정하는 방법을 기술하는 것입니다; 그리고 내피 기능 장애 및 사지 절단의 지표와 MpC 사이의 관계를 평가하는 방법.
comorbidities 및 본질적인 혈관 특징에 근거를 둔 예후와 비교된, 현지 MPC의 양은 내피 기능 장애 및 사지 절단에 관하여 임상 결과를 예측하는 특정 능력을 보여줍니다. 일관되게, 몇몇 연구 결과는 PAD15,16를가진 환자의 평가 도중 유사한 biomarkers의 예후 역할을 기술했습니다.
이전 결과7에기초하여, 여기에 설명된 방법은 하반신 및 관상 동맥 허혈, 뇌졸중, 혈관염, 정맥 혈전증 및 혈관 손상 및 수리와 관련된 다른 것과 같은 여러 임상 환경에서 불리한 혈관 결과의 위험에 처한 인구의 조기 식별에 유용할 수 있다.
Protocol
Representative Results
Discussion
혈관 블록의 정확한 부위에서 혈액 수집은 기술적 인 어려움을 나타낼 수 있습니다; 따라서, 우리는 혈관 블록에 근접하여 혈액 수집을 수행했습니다. 마찬가지로 혈관 플라크에 가까운 MpC의 양은 매우 역동적인 것으로 보이며 혈관 성형술 전후의 변형을 생성할 수 있습니다. 우리의 관측에 따르면, 그들은 혈관 손상 및 수리 내에서 발생하는 여러 병생리학적 과정을 반영 할 수 있기 때문에, MPC의…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
저자는 프로젝트 ID 356.2015에 대한 기관 프로그램 E015의 지원에 감사드립니다.
Materials
| BSA | Roche | 10735086001 | Bovine Serum Albumin (BSA) as a buffering agent, stabilizer, standard and for blending. |
| Calibration Beads | Miltenyi Biotec / MACS | #130-093-607 | MACQuant calibration beads are supplied in aqueous solution containing 0.05% sodium azide. 3.5 ml for up to 100 tests |
| CD133/1 (AC133)-PE | Milteny Biotec / MACS | #130-080-801 | Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer |
| CD184 (CXCR4)-PE-VIO770 | Miltenyi Biotec / MACS | #130-103-798 | Monoclonal, Isotype recombinant human IgG1, conjugated |
| CD309 (VEGFR-2/KDR)-APC | Miltenyi Biotec / MACS | #130-093-601 | Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer |
| CD34-FITC | Miltenyi Biotec / MACS | #130-081-001 | The monoclonal antibody clone AC136 detecs a class III epitope of the CD34 |
| CD45- VioBlue | Miltenyi Biotec / MACS | #130-092-880 | Monoclonal CD45 Antibody, human conjugated |
| Conical Tubes | Thermo SCIENTIFIC | #339651 | 15ml conical centrifuge tubes |
| Cytometry Tubes | FALCON Corning Brand | #352052 | 5 mL Polystyrene Round-Bottom Tube. 12×75 style. Sterile. |
| EDTA | BIO-RAD | #161-0729 | Heavy metals, (as Pb) <10ppm, Fe<0.01%, As<1ppm, Insolubles<0.005% |
| Improved Neubauer | Without brand | Without catalog number | Hemocytometer for cell counting. (range 0.1000mm, 0.0025mm2) |
| K2 EDTA Blood Collection Tubes | BD Vacutainer | #367863 | Lilac plastic vacutainer tube (K2E) 10.8mg, 6 mL. |
| Lymphoprep | Stemcell Technologies | 01-63-12-002-A | Sterile and checked on the presence of endotoxins. Density: 1.077±0.001g/mL |
| Paraformaldehyde | SIGMA-ALDRICH | #SZBF0920V | Fixation of biological samples, (powder, 95%) |
| Pipette Transfer 1,3mL | CRM Globe | PF1016, PF1015 | The transfer pipette is a tool that facilitates liquid transfer with greater accuracy. |
| Test Tubes | KIMBLE CHASE | 45060 13100 | Heat-resistant test tubes. SIZE/CAP 13 x 100 mm |
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