Travmatik Beyin Hasarına Nöroinflamatuar ve Hemodinamik Yanıtın Sistem Analizi
Summary
Bu protokol, hafif travmatik beyin hasarına nöroinflamatuar ve hemodinamik yanıtı karakterize etmek ve bu verileri kısmi en küçük kareler regresyonunu kullanarak çok değişkenli bir sistem analizinin bir parçası olarak entegre etmek için yöntemler sunmaktadır.
Abstract
Hafif travmatik beyin yaralanmaları (mTBI) önemli bir halk sağlığı sorunudur. mTBI’ya tekrar tekrar maruz kalmak, kümülatif, uzun süreli fonksiyonel eksikliklere yol açabilir. Grubumuz ve diğerleri tarafından yapılan çok sayıda çalışma, mTBI’nın sitokin ekspresyonunu uyardığını ve mikroglia’yı aktive ettiğini, serebral kan akışını ve metabolizmasını azalttığını ve serebrovasküler reaktiviteyi bozduğunu göstermiştir. Ayrıca, birkaç çalışma bu nöroinflamatuar ve hemodinamik belirteçlerdeki bozukluklar ile bilişsel bozukluklar arasında bir ilişki olduğunu bildirmiştir. Burada, farelerde mTBI’ya nöroinflamatuar ve hemodinamik doku yanıtını karakterize etmek için yöntemler detaylandırılmıştır. Spesifik olarak, mTBI’nın ağırlık düşürme modelinin nasıl gerçekleştirileceğini, diffüz korelasyon spektroskopisi adı verilen invaziv olmayan bir optik teknik kullanarak serebral kan akışının uzunlamasına nasıl ölçüleceğini ve mikroglia ve diğer nöral bağışıklık hücrelerinin aktivitesine yanıt veren ve düzenleyen sitokinleri ve immünomodülatör fosfo-proteinleri (örneğin, MAPK ve NFκB yolları içinde) ölçmek için beyin dokusu örnekleri üzerinde Luminex çoklanmış immünoassay nasıl yapılacağını açıklıyoruz. Son olarak, tüm bu değişkenler arasındaki ilişkileri anlamak için çok değişkenli bir sistem analizi yaklaşımı kullanarak bu verilerin nasıl entegre edileceğini ayrıntılarıyla açıklıyoruz. Bu fizyolojik ve moleküler değişkenler arasındaki ilişkileri anlamak, sonuçta mTBI’dan sorumlu mekanizmaları tanımlamamızı sağlayacaktır.
Introduction
Genel bakış
Hafif travmatik beyin yaralanmaları (mTBI’lar) yılda ~ 1.6-3.8 milyon sporcuyu etkilemektedir1. Sub-sarsıntılı ve sarsıntılı yaralanmalar da dahil olmak üzere bu yaralanmalar, hastaları geçici fiziksel, duygusal, psikolojik vebilişsel semptomları olan 2 bırakabilir. Dahası, bir “güvenlik açığı penceresi” içinde sürdürülen tekrarlayan mTBI (rmTBI), tek başına tek bir mTBI’nın etkilerinden daha uzun süren bilişsel sonuçların kümülatif ciddiyetine ve süresine ve hatta sonuçta 4,5,6 işlevinin kalıcı kaybına yol açabilir. Birçok hasta nispeten kısa bir zaman diliminde ( mTBI’nın daha uzun süreli etkilerine maruz kalırken, bazıları 1 yıla kadar sürer 3,7,8,9. Bu yaralanmaların yüksek prevalansına ve kalıcı sonuçlarına rağmen, yaralanma mekanizmaları tam olarak anlaşılamamıştır ve etkili bir tedavi stratejisi bulunmamaktadır.
mTBI / rmTBI sonrası sonuçlardaki yüksek değişkenlik göz önüne alındığında, terminal mTBI / rmTBI çalışmalarında elde edilen dokudan erken evre moleküler tetikleyicilerin tanımlanmasındaki bir zorluk, bu moleküler tetikleyicilerin uzun vadeli sonuçlara kesin “akut moleküler bağlantılarını” gösteren uzunlamasına verilerin eksikliğidir. Bu zorluğun üstesinden gelmek için grubumuz, diffüz korelasyon spektroskopisi (DCS) adı verilen optik bir araç kullanılarak akut olarak ölçülen akut olarak azaltılmış serebral kan akışının, rmTBI10’un bir fare modelinde uzun vadeli bilişsel sonuçla güçlü bir şekilde ilişkili olduğunu keşfetti. Bu hemodinamik biyobelirteci kullanarak, akut olarak düşük serebral kan akışına (ve buna bağlı olarak daha kötü tahmin edilen uzun vadeli sonuç) sahip farelerin, hem MAPK hem de NFκB yolaklarında nöronal fosfo-sinyallemede eşlik eden akut artışlara, pro-inflamatuar sitokinlerin nöronal ekspresyonunda artışlara ve fagosit / mikroglial belirteç Iba111’in ekspresyonunda artışlara sahip olduğunu gösterdik. . Bu veriler, nöronal fosfo-sinyalleme, sitokin ekspresyonu ve mikroglial aktivasyon için hem yaralanma sonrası serebral kan akışının akut düzenlenmesinde hem de nöronal disfonksiyona ve daha kötü bilişsel sonuçlara yol açan bir sinyal kaskadının tetiklenmesinde olası bir rol olduğunu göstermektedir. Burada, rmTBI sonrası hem hemodinamik hem de nöroinflamatuar ortamı aynı anda araştırmak için yaklaşımımızı ve bu karmaşık veri kümelerinin nasıl entegre edileceğini detaylandırıyoruz. Spesifik olarak, bu kapsamlı yaklaşımın dört temel adımı için prosedürleri özetliyoruz: (1) hafif travmatik beyin hasarının ağırlık verme modeli, (2) serebral kan akışının diffüz korelasyon spektroskopisi ile değerlendirilmesi, (3) nöroenflamatuar ortamın nicelleştirilmesi ve (4) veri entegrasyonu (Şekil 1). Aşağıda, okuyuculara yöntemlerimizin arkasındaki mantık boyunca rehberlik etmeye yardımcı olmak için bu önemli adımların her birine kısa bir giriş sunuyoruz. Makalenin geri kalanı, bu önemli adımların her biri için ayrıntılı bir protokol sunmaktadır.
Hafif travmatik beyin hasarının ağırlık verme modeli
Tekrarlayan hafif TBİ’nin birçok mükemmel preklinik modeli 12,13,14,15,16,17,18 olmasına rağmen, iyi kurulmuş ve klinik olarak ilgili bir ağırlık düşüşü kapalı kafa travması modeli kullanıyoruz. Bu modelin temel özellikleri arasında (1) sağlam kafatası / kafa derisinin künt etkisi ve ardından başın boyun etrafında sınırsız dönmesi, (2) açık yapısal beyin hasarı, ödem, kan-beyin bariyeri hasarı, akut hücre ölümü veya kronik beyin dokusu kaybı ve (3) sadece birden fazla vuruştan sonra ortaya çıkan kalıcı (1 yıla kadar) bilişsel eksiklikler19 (Şekil 2).
Serebral kan akımının diffüz korelasyon spektroskopisi ile değerlendirilmesi
Diffüz korelasyon spektroskopisi (DCS), kan akışını ölçen invaziv olmayan bir optik tekniktir 5,20,21. DCS’de, doku yüzeyine yakın kızılötesi bir ışık kaynağı yerleştirilir. Doku yüzeyindeki kaynaktan sabit bir mesafeye, dokuya dağılmış olan ışığı tespit etmek için bir dedektör yerleştirilir (Şekil 3). Hareket eden kırmızı kan hücrelerinin saçılması, tespit edilen ışık yoğunluğunun zamanla dalgalanmasına neden olur. Korelasyon difüzyon teorisi olarak bilinen basit bir analitik model, bu yoğunluk dalgalanmalarını bir kan akışı indeksi ile ilişkilendirmek için kullanılır (CBFi, Şekil 4). CBF i birimleri (cm2 / s) geleneksel akış birimleri (mL / dak / 100 g) olmamasına rağmen, farelerde yapılan önceki bir çalışma, CBFi’nin MRI 21 etiketli arteriyel spin ile ölçülen serebral kan akışı ile güçlü bir şekilde ilişkili olduğunu göstermiştir.
Referans olarak, burada kullanılan DCS cihazı şirket içinde inşa edilmiştir ve 852 nm uzunluğunda bir tutarlılık uzunluğu lazeri, bir dizi 4 foton sayma çığ fotodiyotu ve bir donanım otokorelatör kartından (tek tau, 8 kanal, 100 ns minimum örnekleme süresi) oluşur 21,22. Veriler, LabView’da yazılmış ev yapımı yazılımlarla elde edilir. Cihazın hayvan arayüzü, 6 mm aralıklarla yerleştirilmiş ve siyah bir 3D baskılı sensöre (4 mm x 8 mm) gömülü 400 μm çok modlu kaynak fiber (400-2200 nm dalga boyu aralığı, saf silika çekirdek, TECS Sert Kaplama, 730 ± 30 nm ikinci mod kesme) ve 780 nm tek modlu dedektör fiberinden (4 mm x 8 mm, Şekil 3).
Nöroinflamatuar ortamın nicelleştirilmesi
Nöroinflamasyon çeşitli hücresel süreçler tarafından düzenlenmesine rağmen, iki temel ilgili mekanizma sitokinler / kemokinler tarafından hücre dışı sinyalizasyon ve fosfo-proteinler tarafından hücre içi sinyalleşmedir. Yaralanma sonrası beynin nöroinflamatuar ortamını araştırmak için, beyinler farelerden çıkarılır, mikrodisseke edilir ve sitokinler / kemokinler ve fosfo-proteinler Luminex kullanılarak ölçülür (Şekil 5, Şekil 6, Şekil 7). Luminex çoklanmış immünotahliller, enzime bağlı immünosorbent tahlillerini (ELISA’lar) floresan olarak etiketlenmiş manyetik boncuklara bağlayarak bu proteinlerin çeşitli koleksiyonlarının eşzamanlı olarak ölçülmesini sağlar. İlgilenilen her protein için farklı floresan etiketler kullanılır ve her etiketin boncukları, söz konusu proteine karşı bir yakalama antikoru ile işlevselleştirilir. Her proteini yakalamak için yüzlerce boncuk birlikte karıştırılır, 96 kuyucuklu bir tabağa yerleştirilir ve numune ile inkübe edilir. Numune inkübasyonundan sonra, numune yıkanırken boncukları kuyuya hapsetmek için bir mıknatıs kullanılır. Daha sonra, biyotinile tespit antikoru, geleneksel bir ELISA’ya benzer bir antikor-antijen sandviç oluşturmak için ilgilenilen analite bağlanır, ancak farklı bir floresan etiketli boncuk üzerinde meydana gelen her protein için ELISA ile. Fikoeritrin konjuge streptavidin (SAPE) eklenmesi her reaksiyonu tamamlar. Luminex cihazı daha sonra boncukları okur ve sinyali her floresan etiketine / proteinine göre ayırır.
Veri entegrasyonu
Luminex testinde ölçülen çok sayıda analit (örneğin, sitokinler) nedeniyle, her bir nicelleştirilmiş protein ayrı ayrı analiz edilirse, veri analizinin yorumlanması zor olabilir. Analizi basitleştirmek ve analitler arasında gözlemlenen eğilimleri yakalamak için, kısmi en küçük kareler regresyonu adı verilen çok değişkenli bir analiz yöntemi kullanıyoruz (PLSR, Şekil 8)23. PLSR, ölçülen her proteine (yani, “öngörücü değişkenler” olarak adlandırılan sitokinler veya fosfo-proteinler) karşılık gelen bir ağırlık ekseni tanımlayarak, ölçülen proteinlerin bir yanıt değişkeni (örneğin, serebral kan akışı) ile birlikte en iyi şekilde açıklanmasını sağlayarak çalışır. Ağırlıklar “yüklemeler” olarak adlandırılır ve gizli değişken (LV) olarak bilinen bir vektöre monte edilir. İki LV’nin her birinde ölçülen protein verilerini yansıtarak (“puanlama” olarak adlandırılır), veriler bu LV’ler açısından yeniden çizilebilir. PLSR’yi hesapladıktan sonra, AG’ye yapılan numune projeksiyonları ile öngörücü değişken24 arasındaki kovaryansı en üst düzeye çıkaran yeni bir AG tanımlamak için bir varimax rotasyonu kullanıyoruz. Bu yaklaşım, LV1’i yanıt değişkeninin varyansının en iyi açıklandığı eksen olarak tanımlamamızı sağlar. LV2, yanıt değişkeni ile LV1 artık verileri arasındaki eş-varyansı en üst düzeye çıkarır, bu da numuneler arasındaki biyolojik veya teknik değişkenlikle ilişkilendirilebilir. Son olarak, PLSR modelinin herhangi bir örnek23’e büyük ölçüde bağımlı olmadığından emin olmak için bir Leave One Out Cross Validation (LOOCV) yürütüyoruz.
Bu protokolde, mTBI’ya nöroinflamatuar ve hemodinamik doku yanıtını karakterize etmek için yöntemleri detaylandırıyoruz. Genel iş akışı Şekil 1’de özetlenmiştir. Bu protokolde, fareler ağırlık düşürme kapalı kafa travması modeli kullanılarak bir veya daha fazla mTBI’ye tabidir. Serebral kan akımı, yaralanmadan önce ve yaralanmadan sonra birden fazla zaman noktasında uzunlamasına ölçülür. Nöroenflamatuar değişikliklerin sorgulanması için ilgi duyulan zaman noktasında, hayvan ötenazi yapılır ve beyin çıkarılır. İlgilenilen beyin bölgeleri mikrodiseksiyon yoluyla izole edilir ve daha sonra proteini çıkarmak için lize edilir. Lisatlar daha sonra hem sitokin hem de fosfo-protein ekspresyonunun Luminex multipleks immünotahlilleri ve ayrıca Western lekesi için kullanılır. Son olarak, bu bütünsel veri kümesi kısmi en küçük kareler regresyon analizi kullanılarak tümleştirilir.
Protocol
Representative Results
Discussion
Bu yazıda, tekrarlayan hafif travmatik beyin hasarına karşı hemodinamik ve nöroinflamatuar yanıtın değerlendirilmesi için yöntemler ayrıntılı olarak açıklanmıştır. Ayrıca, bu verilerin kısmi en küçük kareler regresyonunu kullanarak çok değişkenli sistem analizinin bir parçası olarak nasıl entegre edileceğini gösterdik. Aşağıdaki metinde, protokolle ilişkili bazı önemli adımlar ve sınırlamaların yanı sıra yöntemlerin mevcut yöntemlere göre avantajlarını / dezavantajlarını …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu proje Ulusal Sağlık Enstitüleri R21 NS104801 (EMB) ve R01 NS115994 (LBW / EB) ve Atlanta Çocuk Sağlığı Fakülte Odaklı Ödülü (EMB) tarafından desteklenmiştir. Bu çalışma aynı zamanda ABD Savunma Bakanlığı tarafından Ödül No altındaki Kongre Tarafından Yönlendirilen Tıbbi Araştırma Programları aracılığıyla desteklenmiştir. W81XWH-18-1-0669 (LBW/EMB). Görüşler, yorumlar, sonuçlar ve öneriler yazara aittir ve mutlaka Savunma Bakanlığı tarafından onaylanmamıştır. Bu materyal, Ulusal Bilim Vakfı Lisansüstü Araştırma Burs Programı tarafından Hibe No. 1937971 altında desteklenen çalışmalara dayanmaktadır. Bu materyalde ifade edilen herhangi bir görüş, bulgu ve sonuç veya öneri yazarlara aittir ve mutlaka Ulusal Bilim Vakfı’nın görüşlerini yansıtmaz.
Materials
| Adjustable pipettes | any adjustable pipette | ||
| Aluminum foil | VWR | 89107-726 | |
| Bio-Plex cell lysis kit | C Bio-Rad | 171304012 | |
| BRAND BRANDplates pureGrade Microplates, Nonsterile | BrandTech | 781602 96 | |
| Complete mini protease inhibitor tablet | Sigma-Aldrich | 11836153001 | |
| Depilatory cream | Amazon | Nair | |
| DiH2O | VWR | VWRL0200-1000 | |
| Handheld magnetic separator block for 96 well flat bottom plates | Millipore Sigma Catalogue | 40-285 | |
| Hardware Autocorrelator Board | www.correlator.com | Flex05-8ch | |
| Isoflurane 250 mL | MED-VET INTERNATIONAL | RXISO-250 | |
| Kimwipe (11.2 x 21.3 cm) | VWR | 21905-026 | |
| Laboratory vortex mixer | VWR | 10153-838 | |
| LabView | National Instruments | LabVIEW | |
| Luminex 200, HTS, FLEXMAP 3D, or MAGPIX with xPONENT software | Luminex Corporation | ||
| Luminex Drive Fluid | Luminex | MPXDF-4PK | |
| Luminex sheath fluid | EMD Millipore | SHEATHFLUID | |
| MILLIPLEX MAP Mouse Cytokine/Chemokine Magnetic Bead Panel – Premixed 32 Plex – Immunology Multiplex Assay | Millipore Sigma | MCYTMAG-70K-PX32 | |
| MILLIPLEX MAPK/SAPK Signaling 10-Plex Kit-Cell Signaling Multiplex Assay | Millipore Sigma | 48-660MAG | |
| Mini LabRoller rotator | VWR | 10136-084 | |
| Phenylmethylsulfonyl fluoride | Sigma-Aldrich | P7626-1G | |
| Phosphate-buffered Saline (PBS) | VWR | 97064-158 | |
| Plate Sealer | VWR | 82050-992 | |
| Polypropylene microfuge tubes | VWR | 20901-547 | |
| Mini LabRoller | Millipore Sigma | Z674591 | |
| Reagent Reservoirs | VWR | 89094-668 | |
| R Programming Language | |||
| RStudio | www.rstudio.com | ||
| Sonicator | |||
| Titer plate shaker | VWR | 12620-926 | |
| Tween20 | Sigma-Aldrich | P9416-50ML | |
| 1 m acrylic guide tube | McMaster-Carr | 49035K85 | |
| 4 photon counting avalanche photodiode | Perkin-Elmer | SPCM-AQ4C-IO | |
| 400 um multimode source fiber | Thorlabs Inc. | FT-400-EMT | |
| 54 g bolt | Ace Hardware | 0.95 cm basic body diameter, 2 cm head diameter, 10.2 cm length | |
| 780 nm single mode detector fiber | Thorlabs Inc. | 780HP | |
| 852 nm long-coherence length laser | TOPTICA Photonics | iBeam smart |
References
- Langlois, J. A., Rutland-Brown, W., Wald, M. M. The epidemiology and impact of traumatic brain injury: a brief overview. Journal of Head Trauma Rehabilitation. 21 (5), 375-378 (2006).
- Iraji, A., et al. Resting State Functional Connectivity in Mild Traumatic Brain Injury at the Acute Stage: Independent Component and Seed-Based Analyses. Journal of Neurotrauma. 32 (14), 1031-1045 (2015).
- Guskiewicz, K. M., et al. Cumulative effects associated with recurrent concussion in collegiate football players: the NCAA Concussion Study. Journal of the American Medical Association. 290 (19), 2549-2555 (2003).
- Longhi, L., et al. Temporal window of vulnerability to repetitive experimental concussive brain injury. Neurosurgery. 56 (2), 364-374 (2005).
- Committee on Sports-Related Concussions in Youth, Board on Children, Youth, and Families, Institute of Medicine, National Research Council. . Sports-Related Concussions in Youth: Improving the Science, Changing the Culture. , (2014).
- Barkhoudarian, G., Hovda, D. A., Giza, C. C. The Molecular Pathophysiology of Concussive Brain Injury – an Update. Physical Medicine and Rehabilitation Clinics of North America. 27 (2), 373-393 (2016).
- McCrory, P., et al. Consensus statement on concussion in sport–the 4th International Conference on Concussion in Sport held in Zurich, November 2012. Clinical Journal of Sport Medicine. 23 (2), 89-117 (2012).
- Belanger, H. G., Vanderploeg, R. D., Curtiss, G., Warden, D. L. Recent neuroimaging techniques in mild traumatic brain injury. Journal of Neuropsychiatry and Clinical Neurosciences. 19 (1), 5-20 (2007).
- Sours, C., Zhuo, J., Roys, S., Shanmuganathan, K., Gullapalli, R. P. Disruptions in Resting State Functional Connectivity and Cerebral Blood Flow in Mild Traumatic Brain Injury Patients. PLoS ONE. 10 (8), 0134019 (2015).
- Buckley, E. M., et al. Decreased Microvascular Cerebral Blood Flow Assessed by Diffuse Correlation Spectroscopy after Repetitive Concussions in Mice. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 35 (12), 1995-2000 (2015).
- Sankar, S. B., et al. Low cerebral blood flow is a non-invasive biomarker of neuroinflammation after repetitive mild traumatic brain injury. Neurobiology of Disease. 124, 544-554 (2019).
- Vagnozzi, R., et al. Temporal window of metabolic brain vulnerability to concussions: mitochondrial-related impairment–part I. Neurosurgery. 61, 379-388 (2007).
- Longhi, L., et al. Temporal window of vulnerability to repetitive experimental concussive brain injury. Neurosurgery. 56, 364-374 (2005).
- Fujita, M., Wei, E. P., Povlishock, J. T. Intensity- and interval-specific repetitive traumatic brain injury can evoke both axonal and microvascular damage. Journal of Neurotrauma. 29, 2172-2180 (2012).
- Angoa-Perez, M., et al. Animal models of sports-related head injury: bridging the gap between preclinical research and clinical reality. Journal of Neurochemistry. 129, 916-931 (2014).
- Prins, M. L., Hales, A., Reger, M., Giza, C. C., Hovda, D. A. Repeat traumatic brain injury in the juvenile rat is associated with increased axonal injury and cognitive impairments. Developmental Neuroscience. 32, 510-518 (2010).
- Viano, D. C., Hamberger, A., Bolouri, H., Saljo, A. Concussion in professional football: animal model of brain injury–part 15. Neurosurgery. 64, 1162-1173 (2009).
- Kane, M. J., et al. A mouse model of human repetitive mild traumatic brain injury. Journal of Neuroscience Methods. 203, 41-49 (2012).
- Meehan, W. P., Zhang, J., Mannix, R., Whalen, M. J. Increasing Recovery Time Between Injuries Improves Cognitive Outcome After Repetitive Mild Concussive Brain Injuries in Mice. Neurosurgery. 71 (4), 885-892 (2012).
- Durduran, T., Yodh, A. G. Diffuse correlation spectroscopy for non-invasive, micro-vascular cerebral blood flow measurement. NeuroImage. 85, 51-63 (2014).
- Sathialingam, E., et al. Small separation diffuse correlation spectroscopy for measurement of cerebral blood flow in rodents. Biomedical Optics Express. 9 (11), 5719 (2018).
- Lee, S. Y., et al. Noninvasive optical assessment of resting-state cerebral blood flow in children with sickle cell disease. Neurophotonics. 6 (03), 1 (2019).
- Wang, H., Liu, Q., Tu, Y. Interpretation of partial least-squares regression models with VARIMAX rotation. Partial Least Squares. 48 (1), 207-219 (2005).
- Eriksson, L., Byrne, T., Johansson, E., Trygg, J., Vikström, C. Multi- and Megavariate Data Analysis Basic Principles and Applications. Umetrics Academy. , (2013).
- Conzen, P. F., et al. Systemic and regional hemodynamics of isoflurane and sevoflurane in rats. Anesthesia and Analgesia. 74 (1), 79-88 (1992).
- Durduran, T., Choe, R., Baker, W. B., Yodh, A. G. Diffuse optics for tissue monitoring and tomography. Reports on Progress in Physics. 73 (7), 076701 (2010).
- Lee, S. Y., et al. Small separation frequency-domain near-infrared spectroscopy for the recovery of tissue optical properties at millimeter depths. Biomedical Optics Express. 10 (10), 5362-5377 (2019).
- . plsRglm: Partial Least Squares Regression for Generalized Linear Models Available from: https://CRAN.R-project.org/package=pplsRglm (2019)
- White, B. R., Bauer, A. Q., Snyder, A. Z., Schlaggar, B. L., Lee, J. M., Culver, J. P. Imaging of functional connectivity in the mouse brain. PLoS One. 6, 16322 (2011).
- Buckley, E. M., Parthasarathy, A. B., Grant, P. E., Yodh, A. G., Franceschini, M. A. Diffuse correlation spectroscopy for measurement of cerebral blood flow: future prospects. Neurophotonics. 1 (1), 011009 (2014).
- Rowan, O., et al. Cerebrovascular reactivity measured in awake mice using diffuse correlation spectroscopy. Neurophotonics. 8 (1), (2021).
- Tate, J., Ward, G. Interferences in immunoassay. The Clinical Biochemist. Reviews. 25 (2), 105-120 (2004).
- Staples, E., Ingram, R. J. M., Atherton, J. C., Robinson, K. Optimising the quantification of cytokines present at low concentrations in small human mucosal tissue samples using Luminex assays. Journal of Immunological Methods. 394 (1-2), 1-9 (2013).
- Gierut, J. J., et al. Network-level effects of kinase inhibitors modulate TNF-α-induced apoptosis in the intestinal epithelium. Science Signaling. 8 (407), 129 (2015).
