Summary
Djurmodeller för svår akut bukspottkörtelinflammation möjliggör studier av patofysiologiska förändringar i det inledande skedet, vilket underlättar observation av utvecklingen av inflammatoriska händelser. Här tillhandahåller vi ett protokoll för induktion av allvarliga akut galla bukspottkörtelinflammation genom bakåtsträvande infusion av natrium taurocholate i bukspottskörteln trumman av bedövda C57BL/6 möss.
Abstract
Gallans akuta pankreatit induktion genom natrium taurocholate infusion har använts i stor utsträckning av det vetenskapliga samfundet på grund av representation av mänskliga kliniska tillstånd och reproduktion av inflammatoriska händelser som motsvarar uppkomsten av klinisk galla bukspottkörtelinflammation. Svårighetsgraden av bukspottkörtelskador kan bedömas genom att mäta koncentrationen, hastigheten och volymen av den infunderade gallsyran. Denna studie ger en uppdaterad checklista över de material och metoder som används i protokollet reproduktion och visar de viktigaste resultaten från denna akut pankreatit (AP) modell. De flesta av de tidigare publikationerna har begränsat sig till att reproducera denna modell hos råttor. Vi har tillämpat denna metod på möss, vilket ger ytterligare fördelar (dvs. tillgången till en arsenal av reagenser och antikroppar för dessa djur tillsammans med möjligheten att arbeta med genetiskt modifierade stammar av möss) som kan vara relevanta för studien. För akut pankreatit induktion hos möss presenterar vi ett systematiskt protokoll, med en definierad dos av 2,5% natrium taurocholate vid en infusionshastighet 10 μL/min i 3 min i C57BL/6 möss som når sin maximala svårighetsgrad inom 12 h från induktion och belyser resultat med resultat som validerar metoden. Med övning och teknik är den totala uppskattade tiden, från induktion av anestesi till slutförandet av infusionen, 25 min per djur.
Introduction
Hos människor är närvaron av gallsten den vanligaste orsaken till pankreatit på grund av obstruktion av den terminala delen av choledochal, avbryta flödet av bukspottskörteln sekret och orsaka en intensiv inflammatorisk process i bukspottkörteln, med en ökning av koncentrationen av matsmältningsenzymer i serumet och inflammatoriska mediatorer1,2.
Två olika teorier har föreslagits för att förklara utvecklingen av akut pankreatit (AP). Teorin om "gemensamma kanaler" tyder på att stenarna som finns i gallblåsan hindrar distala gemensamma gallgångssystemet, vilket gör det möjligt gallutsöndring att flöda bakåt i bukspottskörteln trumman. Den andra teorin ("trumman obstruktion" teorin) föreslår att obstruktion av bukspottskörteln trumman av överskott gallsten orsakar en blockering i flödet av bukspottskörteln utsöndring till tolvfingertarmen, orsakar duktal hypertoni3. Även om mekanismerna som leder till akut gallkörtelkreatit inte är helt förstådda, är resultatet en intensiv inflammatorisk process. Matsmältningsenzymutbrott och bukspottkörtelns självrötning leder till histopatologiska förändringar, en ökning av inflammatoriska cytokiner (IL-1β, IL-6, TNF-α) i ascitisk vätska och serum och en ökning av akutfasproteiner4,5,6.
Svår akut bukspottkörtelinflammation är ett tillstånd som förtjänar klinisk uppmärksamhet på grund av medverkan av flera organ och en hög dödlighetsrisk. Djurmodeller för reproduktion av akut pankreatit (AP) är viktiga eftersom dessa förklarar sjukdomens patofysiologiska mekanismer och hjälper till att övervaka utvecklingen av inflammatoriska händelser, med början från de första stadierna av sjukdomen. Detta är vanligtvis inte möjligt på klinikerna2,7. Dessutom är tillgång till bukspottskörteln vävnader lätt i prekliniska studier, vilket gynnar klargörandet av förändringar kopplade till kliniska villkor8 tillsammans med möjligheten att arbeta med isogenic arter, eliminera oönskade variabler och spegla klinisk likhet med de resultat som observerats i människans tillstånd9.
Gall- och icke-gallmodeller för induktion av akut pankreatit hos råttor och mössarter har ofta studerats i den vetenskapliga litteraturen. Icke-galliska induktionsmetoder inkluderar administrering av supramaximala stimulerande doser av cholecystokinin secretagogue eller dess analoga cerulein10; administrering av nästan dödliga doser av L-arginin; eller administrering av en kolin-bristfällig kost kompletterad med etionin11. Även om dessa metoder är lätta att reproducera och resultera i bukspottskörteln inflammation, replikerar de inte de mekanismer som i teorin utlöser AP (dvs reflux av gallsekreation i bukspottskörteln trumman). Tekniken som adresserar gallmodellen är baserad på den bakåtsträvande infusionen av gallsyror i bukspottskörtelkanalen och kräver välutbildade forskare för att utföra detta protokoll. Flera studier har publicerats med denna metod på råttor (uppenbarligen av tekniska skäl eftersom dessa experiment involverar kirurgiska ingrepp)12,13. Metoden hos möss kan dock erbjuda mer intressanta resultat i studien av inflammation3,14,15. I denna studie kommer vi att visa en checklista över de steg som ska följas för reproduktion av svår akut bukspottkörtelinflammation genom infusion av natriumtaurokolat i C57BL/6 sövda möss.
För arbeten som innefattar behov av experiment med antikroppar och analys av gen- och proteinuttrycket är användningen av möss att föredra på grund av den större arsenalen av material för dessa djur och möjligheten att arbeta med bland annat isogena och knockoutarter som kan användas relevanta för studier16. Möss C57BL/6 är en inavlad stam av möss som ursprungligen utvecklades för studier av antitumöraktivitet och immunologi. Denna stam föredras alltmer av forskare för att vara isogen, vilket möjliggör en större reproducerbarhet av resultat, vilket kan innebära användning av ett mindre antal djur i ett experiment och mindre variationer av resultat mellan samma grupp17,18.
(2010)14 publicerade ett protokoll för AP-induktion hos möss genom natriumtaurokolatinfusion. Här uppdaterar vi denna modell med en högre natriumtaurokolatkoncentration (2, 5%) hos C57BL/6 möss, med en definierad volym och infusionshastighet (figur 1). Den maximala svårighetsgraden uppnås inom 12 timmar från induktion hos möss. Höjningen av koncentrationen av IL-6 både i serumet och i peritonealhålan är korrelerad med utvecklingen av AP. Med övning är den totala uppskattade tiden från induktion av anestesi till slutförandet av infusionen 25 min per djur. Det är viktigt att en utbildad forskare utför detta experiment. För att säkerställa att lösningen injiceras ordentligt i den gemensamma gallgången, utför flera pilotutbildningar med metylenblått istället för natriumtaurokolit.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Detta protokoll godkändes av etikkommittén för användning av djur vid USP Medicine School, Num. Project: 1343/2019-CEUA: FMUSP. För detta protokoll användes C57BL/6 möss, i åldern 6 veckor, som väger 20 ± 2 g (n = 9/grupp).
1. Laparotomi
- Bedöva djur med xylazin (10 mg/kg) och ketaminlösning (80 mg/kg), subkutant (0,1 ml/10 g kroppsvikt) med en 1 ml spruta och 13x0,45 mm nål 26 G 1/2. Kontrollera om det finns tillräckligt med anestesidjup genom att nypa ihop toen. Kontrollera kroppstemperaturen med uppvärmda kuddar. Se till att alla kirurgiska material är sterila.
- Rengör bukområdet med 5% povidone-jodlösning och använd en trimmer för att ta bort hår mellan bröstet och underlivet (ca 2 cm2). Rengör operationsområdet med 70% alkohol.
- Immobilisera djuret på operationsbrädan med kirurgisk tejp. Använd sax för att skära 5 mm av huden horisontellt, på övre delen av buken och 1 cm under xiphoidprocessen. Upprepa snittet på bukhinnan. Detta resulterar i en laparotomi med minimal exponering av håligheten.
2. Lokalisera och exponera bukspottkörteln
- Med hjälp av en upprullningsdon, dra levern mot musens huvud, ~ 1 cm från tarmarna.
- Lokalisera den region i bukspottkörteln som ska injiceras med natriumtaurokolat (bukspottkörtelhuvud). Leta reda på tolvfingertarmen med hänvisning till levern under levern, på höger sida (till vänster när musen ses). Tolvfingertarmen är den första delen av tunntarmen och är ansluten till den sista delen av magen.
- Med hjälp av tång lyfter du levern mot djurhuvudet och drar försiktigt tunntarmen. Fixa tunntarmens två laterala ändar med en 6-0 polypropylen sutur för att bättre se den distala delen av den gemensamma gallgången.
3. Allvarlig akut pankreatitinduktion
- Ockludera tillfälligt den proximala gemensamma gallgången med en microvessel-klämma för att förhindra att bakåtsträvande infusion läcker ut i levern. Den gemensamma gallgången kan ses på leversidan av tolvfingertarmen och dess korsning med tolvfingertarmen kommer att se vit ut. Exponera organet ut ur bukhålan.
- Punktera periampullary-regionen (vitaktig del av tunntarmens vägg) för att komma åt den gemensamma gallgången med en 0,4 mm nål ansluten till ett 0,54 mm polyetenrör.
- Gör en tillfällig ocklusion av den distala gemensamma gallgången med 8-0 för att förhindra att natriumtaurokolatlösningen läcker ut i tolvfingertarmen.
- Starta infusionspumpen och programmera en 2,5% natriumtaurokolatlösning (utspädd i 0, 9% saltlösning) infusion med en konstant hastighet av 10 μL/10 g kroppsvikt i 3 min.
- Efter infusionen, ta bort mikrovesselklämman, den tillfälliga 8-0 sutur och injektionsnålen från gallkörskanalen för att rekonstituera gallans fysiologiska flöde.
- I slutet suturera buken med 6-0 nonabsorbent monofilament polypropylen sutur. Tiden mellan laparotomin och änds suturen bör vara högst 30 min (se figur 1).
- Efter operationen, hus djuren i polyetenlådor fodrade med träspån och vatten och mat ad libitum.
- Behandla kontrollmöss på samma sätt som de experimentella mössen men se till att infusatet endast består av saltlösning. Utför det kirurgiska ingreppet och infusionen av saltlösning (10 ml/min, i 3 min) i en kontrollgrupp (SHAM) för att eliminera den inflammatoriska bias som orsakas av kirurgi och cannulation.
- Använd tramadol 12,5 mg/kg subkutant var 8:e timme, med början efter efter kirurgisk återhämtning.
4. Analysmetoder
- Vid 12 h efter AP-induktion bedövar du djuren med xylazin (10 mg/kg) och ketamin (80 mg/kg) för att samla in cirka 250 μL blod via orbitalplexus.
- Håll försiktigt huden på baksidan, främja en liten utskjutning av ögongloben och placera den med ögat vänt uppåt.
- Ingjut en droppe ögonsalva som innehåller lokalbedövning i djurets öga.
- Placera kapillärrörets ände i ögats mediala hörn och för in det försiktigt under ögongloben, med en vinkel på ~30°-45°. Rotera kapillärröret tills blodflödet börjar. Kom ihåg att det inte är nödvändigt att använda våld för proceduren.
- När kollektionen är över, se till att homeostasen hålls stängda genom lätt komprimering med gasväven. Kassera kapillärröret i vassbehållaren19.
- Centrifugera serumet (700 x g, 15 min) och lagra supernatanten för amylas och IL-6 dosering (steg 4,7 och 4,8).
- Avliva möss genom CO2 kvävning.
- Använd en 27 G nål för att injicera 4 ml iskall 1x PBS i peritonealhålan. Tened bukhuden och se till att nålen trycks långsamt i bukhinnan för att inte punktera några organ. Efter injektionen masserar du försiktigt bukhinnan i 10 s för att ta bort celler som klibbas fast vid bukhinnan.
- Använd sax och pincett, gör ett litet snitt (0,5 cm) på den inre huden och muskulaturen för att exponera bukhålan. Sätt in en glödlampa pipetten i bukhinnan och samla vätskan. Var försiktig så att du inte aspirera fettvävnad eller andra organ.
- Samla så mycket vätska som möjligt och deponera den insamlade cellupphängningen i rör som hålls på is. Kassera glödlampans pipetter i vassbehållaren20. Centrifugera peritonealvätskan (250 x g, 5 min) och fyll supernatanten för IL-6 dosering (steg 4.9).
- Samla bukspottkörtelregionen intill tolvfingertarmen (<5mm).
- Bearbeta bukspottkörteln genom att fixera i 10% formalin och införliva den i paraffin.
- Färga bilderna med hematoxylin och eosin för histopatologiska analyser under ljusmikroskopi. Använd Schmidts protokoll21 (bukspottskörteln ödem, acinar cell, skada /nekros, bukspottskörteln inflammation) för att bedöma omfattningen av AP.
- Mät amylas (U/dL) med kommersiellt tillgängliga satser enligt tillverkarens rekommendationer.
- Mät IL-6 by Luminex-analyser med kommersiella satser enligt tillverkarens rekommendationer.
- Förvara serumet och peritonealvätskan som erhålls i steg 4.1 och 4.4 i en frys vid -80 °C vid behov.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Pankreatit svårighetsgraden poängsattes mellan 0-3 enligt Schmidts skala21 där noll motsvarar frånvaron, 1 motsvarar en mild närvaro (<25%), 2 motsvarar en måttlig närvaro (mellan 25 och 50%) och 3 motsvarar en intensiv närvaro (> 50%) (tabell 1). De mätningar som utfördes var plasma amylas aktivitet, bukspottskörteln ödem, acinar cell, skada/nekros, bukspottskörteln inflammation (genom histologi analys av H&E-färgade sektioner) och IL-6 cytokin koncentration i serum och PerC vätska. Efter 12 h svår AP visade APTA-gruppen en ökning av serum amylaskoncentrationen (6194 ± 336,7 U/dL), jämfört med sham gruppen (3845 ± 135,7 U/dL). Samtidigt visade APTA-gruppen ökad IL-6 cytokinkoncentration i serumet och PerC-vätskan (figur 2). Figur 3 visar en representativ hematoxylin-eosin färgning av sham och APTA grupp.
Figur 1: Schematics av svår akut pankreatit induktion av 2,5% natrium taurocholate i C57BL/6 möss. B) Gemensam gallgång. C) Bukspottskörtelkanal. D) Portalven. E) Microvessel-klipp; F) Punkteringsställe (nål fäst vid ett polyetenrör och anslutet till infusionspumpen). G) Tillfällig nålfixering i den gemensamma gallgången. Klicka här för att se en större version av den här figuren.
Figur 2: Representativa resultat efter 12 h svår akut pankreatit. (A) Djurets serum amylaskoncentration (U/dL). B) IL-6 cytokinkoncentration i serum och PerC-vätska. Skillnader mellan grupper bedömdes genom oparad t-testanalys * p <0,05 om APTA ≠ bluff (n=9/ grupp). Klicka här för att se en större version av den här figuren.
| Mellansides ödem | Inflammatorisk infiltration | Parenkyma nekros | Parenkyma blödning | |
| BLUFF | 1±0* | 0.0 | 0.0 | 0.0 |
| APTA | 3±0* | 3±0 | 3±0 | 3±0 |
| *P<0,05 om SHAM≠APTA. |
Tabell 1: Histologiska förändringar i bukspottskörteln vävnad efter 12 h svår AP. Bukspottkörteln bearbetades och analyserades enligt Schmidts skala21. Resultaten uttrycktes som medelvärde ± SEM och skillnader mellan grupper bedömdes genom studentteletestet. * p <0,05 om APTA ≠ SHAM; (n=9/grupp).
Figur 3: Representativematoxylin-eosin färgning i bukspottskörteln vävnad efter 12 h svår AP. Histologiska förändringar i (A) SHAM och (B) APTA bukspottskörteln vävnad (Hematoxylin-Eosin färgning- 40x förstoring). Klicka här för att se en större version av den här figuren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Metoden för att inducera akut pankreatit genom retrograd natriumtaurokolatinfusion har redan visats hos råttor22,23,24. Tre liknande verk, publicerade 2008, 2010 och 2015, fungerade som referens för protokollet3,14,15. I detta arbete listar vi alla kritiska steg för att reproducera denna metod i C57BL / 6 möss och några möjligheter att validera den.
Ett kritiskt steg i detta test är att blockera gallgången i hilumnivå med ett mikrovesselklämma (steg 3.1) för att undvika natriumtaurokolalatreflux i levern. Detta steg kräver mycket uppmärksamhet, eftersom portalvenen ligger bredvid kanalen (bild 1D), så var försiktig så att man inte blockerar den tillsammans. Nålen ska endast sättas in i den mest distala kanaldelen. Om det förs djupt in i kanalen kan det orsaka en bristning med syran som svämmar över till glandular parenkym och/eller till andra kanaler14. Kontrollera att polyetenröret har luft inuti för att förhindra att den gemensamma gallgången hindras.
Denna modell kräver ett snitt i mus buken. Att föra in kanylen genom bukspottskörteln kanalöppningen kräver erfarenhet men det kan uppnås med träning15,25. Det är viktigt att betona att svårighetsgraden av pankreatit i denna modell är proportionellt beroende av koncentrationen, infusionens volym, infusionstrycket och tidpunkten för AP-induktion. Således måste en konstant infusionsmaskin med kontrollerad volym och tryck användas.
För denna studie standardiserade vi en koncentration på 2,5%, med en infusionshastighet på 10 μL/min, för 3 min och konstant tryck. Vid 12 h av AP observerades ökade inflammatoriska parametrar och nekros av bukspottskörteln vävnader, med djur dör inom 16 h efter AP induktion.
Även om de främsta orsakerna till AP är alkoholkonsumtion eller gallstenar, är dessa modeller inte experimentellt reproducerbara26. För närvarande innebär det mest använda protokollet för AP-induktion hos möss 7 intraperitoneala injektioner av cerulein (50 μg/kg kroppsvikt) med 1 h intervall27. Cerulein har också använts för att inducera en mild eller måttlig akut bukspottkörtelinflammation. Variabiliteten i denna modell begränsar dess användning vid studier av de destruktiva effekterna av sjukdomen, som ger klinisk sjuklighet och dödlighet10. Modeller som utlöser hög dödlighet på kort tid är relevanta för studien av svår AP (necrotizing), eftersom de kan utvärdera effektiviteten av nya läkemedel eller interventioner. Bland dessa modeller är hemorragisk AP induktion hos unga kvinnliga gnagare (mellan 4 och 6 veckor) av en kolin-bristfällig diet28 och L-arginin (t.ex. 3 x 3 g/kg eller 2 x 4 g/kg) baserat akut pankreatit induktion hos möss men korrekt dosering av L-arginin för att inducera AP bör testas av varje laboratorium och i varje mus stam29. År 2015 visade en studie att en intra-duktal taurocholate infusion följt av distala gemensamma gallgång ligatur leder till en allvarlig, nekrotisk modell av pankreatit hos möss3. Denna modell är dock inte användbar för att testa läkemedelseffektivitet och interventioner på grund av dess irreversibelt tillstånd.
Resultaten som finns i denna studie korrelerar med ny litteratur såsom förhöjning av serum amylas koncentration och IL-6 associeras med sjukdomsprogression. Det är möjligt att mätningen av proteiner som TNF-α, IL-1β och myeloperoxidas i framtiden kommer att vara en klinisk prognosparameter för svår akut bukspottkörtelinflammation30,31,32.
Sammanfattningsvis resulterar det protokoll som används i denna studie för att inducera AP hos möss genom infusion av natriumtaurokolit direkt i den gemensamma gallgången till allvarlig akut bukspottkörtelinflammation med nekros av bukspottskörtelvävnad som kan observeras även vid 12 h efter induktion med höjd av IL-6 cytokin i serumet och peritonealvätskan och med hög dödlighet (100% dödlighet i 16 timmar, data som inte visas).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har inget att avslöja.
Acknowledgments
Författarna tack vare Post Graduation Program i Medical Clinic of University of São Paulo; Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) och University of São Paulo Medical School (FMUSP).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.4 mm needle | INTRAG MEDICAL TECH | 90183210 | 30G |
| 0.54 mm polyethylene tube | Tygon | 730010 | - |
| Styrofoam block | - | - | - |
| masking tape for mounting the mouse | Missner | 1236 | - |
| Infusion pump scheduled to 10µL / min. | Havard aparatus-Peristaltic Pump Series | MA1 55-7766 | Model 66 Small Peristaltic |
| Scissors and forceps | |||
| Antiseptic providine iodine | Pfizer | 12086OR | antisepsis |
| 70% ethanol | SIGMA | 459836 | Mix 700 mL 100% ethanol with 300 mL dH2O |
| Razor blade | Lord | bdk9a1ghk6 | For trichotomy |
| Sodium taurocholate | Sigma-Aldrich | 86339- 1G | CAS NUMBER- 345909-26-4 |
| microvessel clip | Medicon Surgical | 56.87.35 | Approximator, opening 4.0 mm, closing pressure 30 - 40 g |
| 6-0 prolene | Bioline | 5162 | Suture line |
| Ketamin NP (cloridrato de dextrocetamina) 50mg/mL | Cristália | ||
| Xilazine 2% | Syntec | ||
| Sterile saline solution (0.9% (wt/vol) saline) | Farmace | 105851 | |
| Methyl Blue | Sigma-Aldrich Chemicals | M5528 | |
| MILLIPLEX MAP Mouse Cytokine/Chemokine Magnetic Bead Panel - Immunology Multiplex Assay | MERCK | MCYTOMAG-70K | Simultaneously analyze multiple cytokine and chemokine biomarkers with Bead-Based Multiplex Assays using the Luminex technology, in mouse serum, plasma and cell culture samples. |
| Amylase Assay | Labtest | 11 | |
| Desmarres retractor 13-mm width |
ROBOZ | RS-6672 |
References
- Li, X., et al. Significantly different clinical features between hypertriglyceridemia and biliary acute pancreatitis: A retrospective study of 730 patients from a tertiary center. BMC Gastroenterology. 18 (1), 1-8 (2018).
- Rechreche, H., Abbes, A., Iovanna, J. L. Induction of antioxidant mechanisms in lung during experimental pancreatitis in rats. Indian Journal of Experimental Biology. 58 (5), 297-305 (2020).
- T, L., et al. Intraductal infusion of taurocholate followed by distal common bile duct ligation leads to a severe necrotic model of pancreatitis in mice. Pancreas. 44 (3), (2015).
- Botoi, G., Andercou, A. Interleukin 17-prognostic marker of severe acute pancreatitis. Chirurgia. 104 (4), 431-438 (2009).
- Li, D., Li, J., Wang, L., Zhang, Q. Association between IL-1beta, IL-8, and IL-10 polymorphisms and risk of acute pancreatitis. Genetics and Molecular Research. 14 (2), 6635-6641 (2015).
- Feng, C., et al. Effect of peritoneal lavage with ulinastatin on the expression of NF-kappaB and TNF-alpha in multiple organs of rats with severe acute pancreatitis. Experimental and Therapeutic Medicine. 10 (6), 2029-2034 (2015).
- Fang, D. Z., et al. Effects of sildenafil on inflammatory injury of the lung in sodium taurocholate-induced severe acute pancreatitis rats. International Immunopharmacology. 80, (2020).
- Ceranowicz, P., Cieszkowski, J., Warzecha, Z., Dembinski, A.
- Wan, M. H., et al. Review of experimental animal models of biliary acute pancreatitis and recent advances in basic research. HPB (Oxford). 14 (2), 73-81 (2012).
- Mayerle, J., Sendler, M., Lerch, M. M. Secretagogue (Caerulein) induced pancreatitis in rodents. Pancreapedia: The Exocrine Pancreas Knowledge Base. (1), (2013).
- Wang, N., et al. Resveratrol protects against L-arginine-induced acute necrotizing pancreatitis in mice by enhancing SIRT1-mediated deacetylation of p53 and heat shock factor 1. International Journal of Molecular Medicine. 40 (2), 427-437 (2017).
- Ma, Z. H., et al. Effect of resveratrol on peritoneal macrophages in rats with severe acute pancreatitis. Inflammation Research. 54 (12), 522-527 (2005).
- Souza, L. J., et al. Anti-inflammatory effects of peritoneal lavage in acute pancreatitis. Pancreas. 39 (8), 1180-1184 (2010).
- Perides, G., Acker, G. J. v, Laukkarinen, J. M., Steer, M. L. Experimental acute biliary pancreatitis induced by retrograde infusion of bile acids into the mouse pancreatic duct. Nature Protocols. 5 (2), 335-341 (2010).
- Wittel, U. A., et al. Taurocholate-induced pancreatitis: a model of severe necrotizing pancreatitis in mice. Pancreas. 36 (2), 9-21 (2008).
- Tao, L., Reese, T. A. Making mouse models that reflect human immune responses. Trends Immunology. 38 (3), 181-193 (2017).
- Vandamme, T. F. Use of rodents as models of human diseases. Journal of Pharmacy and Bioallied Science. 6 (1), 2-9 (2014).
- Song, H. K., Hwang, D. Y. Use of C57BL/6N mice on the variety of immunological researches. Laboratory Animal Research. 33 (2), 119-123 (2017).
- Bogdanske, J. J., Stelle, S. H. -V., Riley, M. V., Schiffman, B. M. Suturing Principles and Techniques in Laboratory Animal Surgery. 1st edition. (1), CRC Press. (2010).
- Ray, A., Dittel, B. N. Isolation of mouse peritoneal cavity cells. Journal of Visualized Experiments. (35), e1488 (2010).
- Schmidt, J., et al. A better model of acute pancreatitis for evaluating therapy. Annals of Surgery. 215 (1), 44-56 (1992).
- Liu, D. L., et al. Resveratrol improves the therapeutic efficacy of bone marrow-derived mesenchymal stem cells in rats with severe acute pancreatitis. International Immunopharmacology. 80, 106128 (2020).
- Yang, X. F., et al. Chaiqin chengqi decoction alleviates severe acute pancreatitis associated acute kidney injury by inhibiting endoplasmic reticulum stress and subsequent apoptosis. Biomedicine & Pharmacotherapy. 125 (12), 110024 (2020).
- Yang, X. F., et al. Chaiqin chengqi decoction alleviates severe acute pancreatitis associated acute kidney injury by inhibiting endoplasmic reticulum stress and subsequent apoptosis. Biomedicine & Pharmacotherapy. 125, 110024 (2020).
- Venglovecz, V., Z, R., Hegyi, P. The effects of bile acids on pancreatic ductal cells. Pancreapedia: The Exocrine Pancreas Knowledge Base. (1), (2019).
- Roberts, S. E., Akbari, A., Thorne, K., Atkinson, M., Evans, P. A. The incidence of acute pancreatitis: impact of social deprivation, alcohol consumption, seasonal and demographic factors. Alimentary Pharmacology and Therapeutics. 38 (5), 539-548 (2013).
- Lerch, M. M., Gorelick, F. S. Models of acute and chronic pancreatitis. Gastroenterology. 144 (6), 1180-1193 (2013).
- Nakamura, K., Fukatsu, K., Sasayama, A., Yamaji, T. An immune-modulating formula comprising whey peptides and fermented milk improves inflammation-related remote organ injuries in diet-induced acute pancreatitis in mice. Biosci Microbiota Food Health. 37 (1), 1-8 (2018).
- Kui, B., et al. New insights into the methodolgy of L-Arginine-induced acute pancreatitis. PLoS One. 10 (2), 011758 (2015).
- Xue, J., et al. Alternatively activated macrophages promote pancreatic fibrosis in chronic pancreatitis. Nature Communication. 6, 7158 (2015).
- Lesina, M., Wormann, S. M., Neuhofer, P., Song, L., Algul, H. Interleukin-6 in inflammatory and malignant diseases of the pancreas. Seminars in Immunology. 26 (1), 80-87 (2014).
- Rao, S. A., Kunte, A. R. Interleukin-6: An early predictive marker for severity of acute pancreatitis. Indian Journal of Critical Care Medicine. 21 (7), 424-428 (2017).
