췌장액은 인간 췌장암에 대한 바이오마커의 귀중한 공급원입니다. 여기서는 수술 중 수집 절차 방법을 설명합니다. 쥐 모델에서 이 절차를 채택하는 문제를 극복하기 위해 대체 샘플인 종양 간질액을 제안하고 여기에서 분리를 위한 두 가지 프로토콜을 설명합니다.
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방법 논문
췌장 선암의 종양 미세 환경을 조사하기위한 근위액 분리
* These authors contributed equally
이 논문에서
요약
초록
췌장 선암종 (PDAC)은 암 관련 사망의 네 번째 주요 원인이며 곧 두 번째가 될 것입니다. 수술 전 감별 진단 및 환자 프로파일 링을 돕기 위해 특정 췌장 병리와 관련된 변수가 시급히 필요합니다. 췌장액은 상대적으로 탐험되지 않은 체액으로, 종양 부위와 가깝기 때문에 주변 조직의 변화를 반영합니다. 여기에서는 수술 중 수집 절차에 대해 자세히 설명합니다. 불행히도 췌장액 수집을 PDAC의 쥐 모델로 번역하여 기계 론적 연구를 수행하는 것은 기술적으로 매우 어렵습니다. 종양 간질 액 (TIF)은 종양 및 기질 세포를 목욕시키는 혈액 및 혈장 외부의 세포 외액입니다. 췌장액과 유사하게, 혈장에서 희석된 것으로 밝혀진 분자를 수집하고 농축하는 특성 때문에 TIF는 미세환경 변화의 지표 및 질병 관련 바이오마커의 귀중한 공급원으로 활용될 수 있습니다. TIF는 쉽게 접근할 수 없기 때문에, 그 분리를 위해 다양한 기술이 제안되었다. 여기서는 분리를 위한 간단하고 기술적으로 까다로운 두 가지 방법인 조직 원심분리와 조직 용출에 대해 설명합니다.
서론
췌장 관 선암 (PDAC)은 가장 공격적인 종양 중 하나이며 곧 두 번째 주요 사망 원인이 될 것입니다 1,2,3. 면역 억제 미세 환경과 면역 요법 프로토콜4에 대한 무반응으로 잘 알려져 있습니다. 현재 외과적 절제술은 여전히 PDAC의 유일한 치료 옵션이지만 조기 재발 및 수술 후 합병증의 빈도가 높습니다. 고급 단계까지 특정 증상이 없으면 조기 진단이 불가능하여 질병의 종말에 기여합니다. 또한, PDAC와 다른 양성 췌장 병리 사이의 증상의 중복은 현재의 진단 전략으로 신속하고 신뢰할 수있는 진단의 달성을 방해 할 수 있습니다. 특정 췌장 병리와 관련된 변수의 식별은 수술 의사 결정 과정을 용이하게하고 환자 프로파일 링을 개선 할 수 있습니다.
바이오마커 발견에서 유망한 결과는 혈액 5,6,7, 소변8, 타액 9 및 췌장액
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프로토콜
등록 된 모든 환자에 대해 말초 혈액과 췌장액은 기관의 윤리위원회가 승인 한 프로토콜에 따라 수술시 수집되었습니다. 모든 환자는 생물학적 표본 및 임상 데이터 수집을 포함하여 사전 동의서에 서명 한 후 연구에 등록되었습니다. 이 연구는 기관의 윤리위원회 (프로토콜 번호 ICH-595, 2009 년 5 월 승인 발행)의 승인을 받았습니다. 마우스와 그 관리와 관련된 절차는 EU 및 기관 지침 (프로토콜 ID 121 / 2016-PR)을 준수했습니다.
1. 췌장액의 분리
참고: 췌장액의 회수는 전문 췌장 외과 의사에 의한 췌장 절제술(예: 췌장 십이지장 절제술, 전체 췌장 절제술, 원위 췌장 절제술)의 공개 절차의 맥락에서 실행됩니다.
- 환자 선택
- 개방 췌장 절제술로 예정된 환자를 절차를 고려하십시오.
- 주 췌관 크기가 췌장액 회수를 허용하기에 충분하다고 판단되는 경우 포함을 확인하십시오. 주 췌관 직경의 최소 한계는 조영제 강화 CT 영상에서 2mm로 간주됩니다.
- 췌장액 검색 계획에 도움이 되는 조영제 CT 영상에서 췌관의 수술 전 연구
- 췌장 목 수준에서 글 랜드 내의 주 췌장 덕트를 3 차원 적으....
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결과
우리는 췌장염 (n = 2), 유두-팽대 종양 (n = 4), 신경 내분비 종양 (n = 2), 관 내 유두 점액 성 신 생물 (IPMN; n = 1) 12를 포함한 PDAC (n = 31) 및 기타 양성 췌장 질환 (비 PDAC, n = 9) 환자로부터 췌장액을 얻기 위해 위에서 설명한 절차를 따랐다. 그런 다음 췌장액 샘플을 핵자기 공명(1H-NMR)12을 사용하여 대사체 분석을 수행했습니다. 거대분자(예: 지단백질, 지질 등)의 광범위한 NMR 신호를 필터링하여 1D Carr-Purcell-Meiboom-Gill(CPMG) 스펙트럼(그림 3A)에서 볼 수 있듯이 작은 분자량 대사산물을 자세히 이해할 수 있었습니다. 감독 OPLS-DA 분석은 췌장액에서 검출 된 대사 프로파일이 교차 검증에 의해 얻어진 82.4 %의 정확도로 PDAC와 비 PDA.......
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토론
이 연구에서 우리는 대부분 탐험되지 않은 유체 생검 인 췌장액을 수술 중 수집하는 기술을 설명했습니다. 우리는 최근에 췌장액이 질병12의 대사 마커의 원천으로 이용 될 수 있음을 보여주었습니다. 혈액 5,6,7, 소변8 및 타액9와 같은 다른 액체 생검에 대한 대사체 분석은 PDAC와 건강한 피험자 또는 췌장염을 구별하는 데 유망한 결과를 보여주었습니다. 그러나 췌장액은 췌장 유관 세포에 의해 직접 분비되며 종양 부위와 가깝기 때문에 질병의 초기 단계에서도 주변 조직의 변화에 대한보다 신뢰할 수있는 지표가 될 수 있습니다. 사실, 췌장액의 H-NMR 스펙트럼 데이터는 PDAC 환자와 다른 양성 췌장 질환 사이의 차별을 달성한 반면, 혈장.......
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공개 사항
저자는 공개 할 것이 없습니다.
감사의 글
기술 지원에 대해 Roberta Migliore에게 감사드립니다. 이러한 결과로 이어지는 연구는 IG2016-ID.18443 프로젝트 – P.I. Marchesi Federica에 따라 Associazione Italiana per la ricerca sul cancro (AIRC)로부터 자금을 지원 받았습니다. 자금 제공자는 연구 설계, 데이터 수집 및 분석, 출판 결정 또는 원고 준비에 아무런 역할도 하지 않았습니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 1 mL 주사기 | BD Biosciences | 309659 | |
| 1.5 mL Eppendorf tube | Greiner BioOne | GR616201 | |
| 20 µ m 나일론 셀 스트레이너 | pluriSelect | 43-50020-03 | |
| 25G 바늘 | BD Biosciences | 305122 | |
| 3 mL K2EDTA vacutainer | BD Biosciences | 366473 | |
| 3 mL 주사기 | BD Biosciences | 309656 | |
| 50 mL 팔콘 튜브 | 코닝 | 352098 | |
| 클램프 | Medicon | 06.20.12 | |
| 일회용 메스 | Medicom | 9000-10 | |
| 소 태아 혈청 | Microtech | MG10432 | |
| 플랫 팁 겸자 | Medicon | 06.00.10 | |
| 페니실린-스트렙토마이신 | Lonza | ECB3001D | |
| 인산염 완충 식염수(PBS) | Sigma-Aldrich | D8537 | |
| 프로테아제 억제제 칵테일 Roche | |||
| RPMI 매체 | Euroclone | ECB9006L | |
| 가위 | Medicon | 02.04.09 | |
| Trypsin/EDTA 1x | Lonza | BE17-161F | |
| 울트라글루타민 100x | Lonza | BE17-605E/U1 |
참고문헌
- Costello, E., Greenhalf, W., Neoptolemos, J. P. New biomarkers and targets in pancreatic cancer and their application to treatment. Nature Reviews Gastroenterology & Hepatology. 9 (8), 435-444 (2012).
- Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer sta....
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