Oöcyt cryopreservatie wordt erkend door verschillende internationale wetenschappelijke verenigingen als de gouden standaard voor vruchtbaarheidsbehoud bij postpubertale vrouwen. De aangewezen klinische en laboratoriumstrategieën verzekeren maximumeffectiviteit, efficiency, en veiligheid van vruchtbaarheidsbehoudsbehandelingen.
Het behoud van de vruchtbaarheid van vrouwen is cruciaal in een multifunctioneel gezondheidszorgsysteem dat zorgt voor de toekomstige kwaliteit van leven van patiënten. Oöcyt cryopreservatie wordt erkend door verschillende internationale wetenschappelijke verenigingen als de gouden standaard voor vruchtbaarheidsbehoud bij postpubertale vrouwen, voor zowel medische als niet-medische indicaties. De belangrijkste medische indicaties zijn oncologische ziekten, gynaecologische ziekten zoals ernstige endometriose, systemische ziekten die de eierstokreserve in gevaar brengen en genetische aandoeningen met voortijdige menopauze. Dit document beschrijft het gehele klinische en laboratoriumwerk van een behandeling van het vruchtbaarheidsbehoud door aanbevelingen voor objectieve en bewijsmateriaal-gebaseerde begeleiding te beschrijven. Bovendien richt het zich op de effectiviteit van de procedure en beschrijft het de meest geschikte strategieën om de ovariële reserve volledig te benutten en het aantal teruggewonnen oöcyten in de kortst mogelijke tijd te maximaliseren. De evaluatie van de ovariële reserve, de definitie van een ideaal stimulatieprotocol, evenals het ophalen van oöcyten, denudatie en vitrificatieprocedures zijn gedetailleerd, samen met benaderingen om hun effectiviteit, efficiëntie en veiligheid te maximaliseren.
De ontwikkeling en implementatie van een efficiënt cryopreservatieprogramma voor menselijke oöcyten is een belangrijke doorbraak geweest in de reproductieve geneeskunde. Volgens recent bewijs is vitrificatie de meest effectieve strategie om cryopreserve metaphase II (MII) oöcyten te cryopreserve, omdat het resulteert in statistisch hogere overlevingspercentages in vergelijking met langzaam bevriezen, onafhankelijk van de patiëntenpopulatie (onvruchtbare patiënten of oöcytdonatieprogramma)1,2,3. De opmerkelijke verwezenlijkingen van oöcyt vitrification leidden de Praktijkcommissies van de Amerikaanse Maatschappij voor Reproductieve Geneeskunde (ASRM) en de Maatschappij voor Geassisteerde Reproductieve Technologie (SART) om deze techniek uit te spreken om het meest efficiënt voor electieve vruchtbaarheidsbehoud in postpubertal vrouwen, voor zowel medische als niet-medische aanwijzingen4,5,6uit te spreken . Medische indicaties voor vruchtbaarheidsbehoud omvatten (i) kanker en auto-immuunziekten die therapieën7 vereisen, zoals radiotherapie, cytotoxische chemotherapie en endocriene therapie (waarvan het schadelijke effect op de eierstokreserve geassocieerd is met de leeftijd van de moeder, evenals het type en de dosis van de behandeling); ii) eierstokaandoeningen waarvoor herhaalde of radicale chirurgie nodig is (zoals endometriose)8; en iii) genetische aandoeningen (bijv. X-fragile) of voortijdig eierstokfalen. Bovendien is vruchtbaarheidsbehoud een waardevolle optie geworden voor alle vrouwen die hun ouderlijke doelstelling om niet-medische redenen (ook bekend als sociale bevriezing) niet hebben bereikt.
Ongeacht de indicatie voor vruchtbaarheidsbehoud en volgens de belangrijkste internationale richtlijnen voor vruchtbaarheidsbehoud, moeten alle patiënten die bereid zijn hun oöcyten te vitriferen, passende begeleiding krijgen om te worden geïnformeerd over hun realistische kans op succes, de kosten, risico’s en beperkingen van de procedure9,10,11,12,13. Het belangrijkste is dat het duidelijk moet zijn dat het vitrificeren van een cohort MII-oöcyten geen zwangerschap garandeert, maar dat het een grotere kans van slagen biedt voor toekomstige in-vitrofertilisatiebehandeling (IVF), indien nodig14. In dit opzicht is de leeftijd van de vrouw op het moment van oöcyt vitrificatie zeker de belangrijkste beperkende factor15, aangezien gevorderde moederleeftijd (AMA; >35 jaar) de belangrijkste oorzaak is van vrouwelijke onvruchtbaarheid16. Naast een progressieve vermindering van de ovariële reserve, ama wordt geassocieerd met een aantasting van oöcyt competentie als gevolg van defecte fysiologische paden zoals metabolisme, epigenetische regulatie, celcyclus checkpoints, en meiotische segregatie17. Daarom hangt het redelijke aantal eieren tot vitrify voornamelijk af van de leeftijd van de moeder. Bij vrouwen jonger dan 36 jaar zijn ten minste 8-10 MII-oöcyten18 nodig om de kans op succes te maximaliseren. Over het algemeen geldt: hoe hoger het aantal verglaasde oöcyten, hoe groter de kans op succes. Daarom is het aanpassen van ovariële stimulatie op basis van ovariële reservemarkers zoals anti-Mülleriaanse hormoonspiegels (AMH) of antrale follikeltelling (AFC) cruciaal om de ovariële reserve in de kortst mogelijke tijd volledig te benutten.
De veiligheid van de gehele procedure is het andere belangrijke punt bij het inschrijven van patiënten voor vruchtbaarheidsbehoud. Clinici moeten de beste strategieën gebruiken om de risico’s te minimaliseren en (i)ovariële hyperstimulatiesyndroom (OHSS) te voorkomen door veilige benaderingen te gebruiken, zoals het gonadotrofine-releasing hormone (GnRH) antagonistprotocol gevolgd door een GnRH-agonist trigger19 en (ii) het afgelegen, maar mogelijk, risico op peritoneale bloedingen, letsel aan de bekkenstructuren (ureter, darm, appendix, zenuwen) of bekkeninfectie tijdens het ophalen van oöcyten. Ten slotte worden (iii) traditionele stimulatieschema’s geassocieerd met suprafysiologisch serumestradiol en worden daarom niet aanbevolen bij oestrogeengevoelige ziekten zoals borstkanker. Protocollen met aromataseremmers (zoals letrozol of tamoxifen) zijn in deze gevallen geschikter20,21. In de laboratoriumomgeving is het meest wijdverspreide protocol voor oöcyt vitrificatie nog steeds het protocol dat voor het eerst werd beschreven door Kuwayama en collega’s2,23, dat bestaat uit een stapsgewijze procedure waarbij cryoprotectiva (CPA’s) geleidelijk worden toegevoegd. In de eerste fase (evenwicht/uitdroging) worden oöcyten blootgesteld in een CPA-oplossing die 7,5% v/v ethyleenglycol en 7,5% v/v dimethylsulfoxide (DMSO) bevat, terwijl in de tweede fase oöcyten worden verplaatst naar een vitrificatieoplossing met 15% v/v ethyleenglycol en 15% v/v DMSO, plus 0,5 mol/L-sucrose. Na een korte incubatie in het medium vitrificatie kunnen de oöcyten in speciaal ontworpen, open cryodevicen worden geplaatst en uiteindelijk in vloeibare stikstof bij -196 °C worden gedompeld om tot gebruik te worden opgeslagen.
Hier is het gehele klinische en laboratoriumwerk van een vruchtbaarheidsbehoudsbehandeling beschreven door (i) aanbevelingen voor objectieve en evidence-based counseling, (ii) gericht op de kosteneffectiviteit van de procedure, en (iii) het beschrijven van de meest geschikte strategieën om de ovariële reserve volledig te benutten en het aantal teruggewonnen oöcyten in de kortst mogelijke tijd te maximaliseren. De evaluatie van de ovariële reserve, de definitie van een ideaal stimulatieprotocol, evenals het ophalen van oöcyten, denudatie en vitrificatieprocedures zullen worden gedetailleerd, samen met benaderingen om hun effectiviteit, efficiëntie en veiligheid te maximaliseren. Aangezien er andere protocollen of aanpassingen van dit protocol in de literatuur bestaan, zijn de representatieve resultaten en de discussiesecties van dit manuscript alleen van toepassing op deze procedure.
Klinische overwegingen
Hoewel de opkomende strategieën, zoals ovariële weefsel cryopreservatie en in vitro rijping zijn onderzocht, is oöcyt vitrification na COS de gouden standaardtechniek voor vruchtbaarheidsbehoud. In dit scenario moet het aantal teruggewonnen oöcyten en cryopreserved in de kortst mogelijke tijd worden gemaximaliseerd, omdat de meeste kankerpatiënten slechts baat kunnen hebben bij één eierstokcyclus voordat ze met hun kankerbehandeling(en) moeten be…
The authors have nothing to disclose.
Geen
Collection | |||
Equipment | |||
Hot plate | IVF TECH | ||
Lab Markers | Sigma Aldrich | ||
Laminar Flow Hood | IVF TECH | Grade A air flow | |
Stereomicroscope | Leica | Leica M80 | |
Thermometer | |||
Test tube Warmer | |||
Tri-gas incubator | Panasonic | MCO-5M-PE | 02/CO2 |
Vacuum Pump | Cook | K-MAR-5200 | |
Consumables | |||
CSCM (Continuos single culture complete) medium | Fujifilm Irvine Scientific | 90165 | IVF culture medium supplemented with HSA |
Mineral Oil for embryo culture | Fujifilm Irvine Scientific | 9305 | |
Ovum Aspiration Needle (Single lumen) | Cook | K-OSN-1730-B-60 | |
Primaria Dish | Corning | 353803 | Corning Primaria Dish 100×20 mm style standard cell culture dish |
Round- bottom tubes | Falcon | 352001 | Falcon 14ml Round Bottom Polystyrene Test tube with snap cap |
Round- bottom tubes | Falcon | 352003 | Oocyte collection tubes/ Falcon 5ml 12×75 Round Bottom Polipropilene Test tube with snap cap |
Rubber Bulb | Sigma Aldrich | Z111589-12EA | |
Sterile glass Pasteur pipettes | Hunter Scientific | PPB150-100PL | Pipette Pasteur Cotonate, 150mm, MEA e CE |
Denudation | |||
Equipment | |||
CO2 incubator | Eppendorf | Galaxy 14S | |
Flexipet adjustable handle set | Cook | G18674 | Stripper holder |
Gilson Pipetman | Gilson | 66003 | p20 |
k-System Incubator | Coopersurgical | G210Invicell | |
Lab Markers | Sigma Aldrich | ||
Laminar Flow Hood | IVF TECH | Grade A air flow | |
Stereomicroscope | Leica | Leica M80 | |
Consumables | |||
Biopur epTIPS Rack | Eppendorf | 30075331 | Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 µl |
Human Serum Albumin | thermoFisher Scietific | 9988 | |
Hyaluronidase | Fujifilm Irvine Scientific | 90101 | 80 IU/mL of hyaluronidase enzyme in HEPES-buffered HTF |
IVF culture dish (60 x 15mm) | Corning | 353802 | Corning Primaria Falcon Dish 60X15mm TC Primaria standard cell culture dish |
IVF dish 4-well plate with sliding lid | ThermoFisher Scietific | 176740 | Multidishes 4 wells (Nunc) |
IVF One well dish | Falcon | 353653 | Falcon 60 x 15 mm TC treated center-well IVF |
Mineral Oil for embryo culture | Fujifilm Irvine Scientific | 9305 | |
Modified HTF Medium | Fujifilm Irvine Scientific | 90126 | HEPES-Buffered medium |
Rubber Bulb | Sigma Aldrich | Z111589-12EA | 1 mL for pasteur pipettes |
Sterile glass Pasteur pipettes | Hunter Scientific | PPB150-100PL | Pipette Pasteur Cotonate, 150 mm, MEA e CE |
stripping pipette tips (140 µm) | Cook | K-FPIP-1140-10BS-6 | PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING |
stripping pipette tips (130 µm ) | Cook | K-FPIP-1130-10BS-7 | PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING |
stripping pipette tips (170 µm) | Cook | K-FPIP-1170-10BS-5 | PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING |
Vitrification | |||
Equipment | |||
Electronic Timer | |||
Flexipet adjustable handle set | Cook | G18674 | Stripper holder |
Gilson Pipetman | Gilson | F123601 | p200 |
Lab Markers | Sigma Aldrich | ||
Laminar Flow Hood | IVF TECH | Grade A air flow | |
Stainless Container for Cooling Rack | Kitazato | Liquid nitrogen container for vitrification | |
Stereomicroscope | Leica | Leica M80 | |
Consumables | |||
Biopur epTIPS Rack | Eppendorf | 30075331 | Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 µL |
Human Serum Albumin | Fujifilm Irvine Scientific | 9988 | |
IVF culture dish (60 x 15 mm) | Corning | 353802 | Corning Primaria Falcon Dish 60 x 15 mm TC Primaria standard cell culture dish |
IVF dish 6-well | Oosafe | OOPW-SW02 | OOSAFE 6 WELL DISH WITH STRAW HOLDER |
Modified HTF Medium | Fujifilm Irvine Scientific | 90126 | HEPES-Buffered medium |
stripping pipette tips (170 µm) | Cook | K-FPIP-1170-10BS-5 | PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING |
Vitrification Freeze kit | Fujifilm Irvine Scientific | 90133-so | 2 Vials of ES (Equilibration Solution, 2 x 1 mL) and 2 Vials of VS (Vitrification Solution, 2 x 1 mL) |
Vitrifit | Coopersurgical Origio | 42782001A | VitriFit Box |
Warming | |||
Equipment | |||
Electronic Timer | |||
Flexipet adjustable handle set | Cook | G18674 | Stripper holder |
Gilson Pipetman | Gilson | F123601 | p200 |
k-System Incubator | Coopersurgical | G210Invicell | |
Lab Markers | Sigma Aldrich | ||
Laminar Flow Hood | IVF TECH | Grade A air flow | |
Stainless Container for Cooling Rack | Kitazato | Liquid nitrogen container for vitrification | |
Stereomicroscope | Leica | Leica M80 | |
Consumables | |||
Biopur epTIPS Rack | Eppendorf | 30075331 | Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 µL |
CSCM (Continuos single culture complete) medium | Fujifilm Irvine Scientific | 90165 | IVF culture medium supplemented with HSA |
IVF culture dish (60 x 15 mm) | Corning | 353802 | Corning Primaria Falcon Dish 60X15mm TC Primaria standard cell culture dish |
IVF dish 4-well plate with sliding lid | ThermoFisher Scietific | 176740 | Multidishes 4 wells (Nunc) |
IVF dish 6-well | Oosafe | OOPW-SW02 | OOSAFE® 6 WELL DISH WITH STRAW HOLDER |
Mineral Oil for embryo culture | Fujifilm Irvine Scientific | 9305 | |
SAtripping pipette tips (300µm) | Cook | K-FPIP-1300-10BS-5 | PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING |
Vitrification Thaw kit | Fujifilm Irvine Scientific | 90137-so | 4 Vials of TS (Thawing Solution, 4 x 2 mL) + 1 Vial of DS (Dilution Solution, 1 x 2 mL) +1 Vial of WS (Washing Solution, 1 x 2 mL) |