Массивное понтиновское кровоизлияние путем двойной инъекции аутологичной крови
Summary
Мы представляем протокол для установления модели массивного понтийного кровоизлияния у крысы с помощью двойной инъекции аутологичной крови.
Abstract
Мы предоставляем протокол для установления модели массивного понтийного кровоизлияния у крысы. Крысы весом около 250 граммов были использованы в этом исследовании. Сто микролитров аутологичной крови брали из хвостовой вены и стереотаксически вводили в понс. Процесс инъекции разделили на 2 этапа: сначала 10 мкл крови вводили в определенное место, переднезадневое положение (АП) -9,0 мм; боковой (Лат) 0 мм; вертикальная (Верт) -9,2 мм, с последующим вторым введением остаточной крови, расположенной при АП -9,0 мм; Лат 0 мм; Верт -9,0 мм с 20-минутным интервалом. Для оценки неврологической функции использовались тест на балансир, тест на размещение конечностей и модифицированный нейрооценка Voestch. Магнитно-резонансная томография (МРТ) использовалась для оценки объема кровоизлияния in vivo. Симптомы этой модели соответствовали пациентам с массивным понтийным кровоизлиянием.
Introduction
Внутримозговое кровоизлияние составляет пятую часть пациентов с инсультом. Прогноз внутримозгового кровоизлияния зависит от скорости, объема и локализации кровотечения1,2. По сравнению с кровоизлиянием в передний мозг, кровоизлияние в ствол мозга имеет более высокую смертность и заболеваемость3. Около 40% кровоизлияний в ствол мозга происходит в понс4. Этиология и патофизиология понтинного кровоизлияния совершенно различны и менее изучены, чем кровоизлияние в передний мозг5.
Существует два вида понтийных кровоизлияния на животных моделях. Одной из них является модель спонтанного кровоизлияния, индуцированная инфузией бактериальной коллагеназы в понс6,7,8. Самым большим преимуществом этой модели является то, что кровотечение является спонтанным. Однако коллагеназа может вызвать только небольшой объем понтинового кровоизлияния. Кроме того, коллагеназа может вызвать другие травмы головного мозга. Другая модель индуцируется стереотаксической инъекцией аутологичной крови в понс9. Преимущество этой модели в том, что ее легко освоить с высоким показателем успешности. Теоретически, исследователи могли бы вводить любой объем крови в любое место понсов. Однако из-за обратной утечки через игольчатый путь объем инъекций ограничен. В последнее время был предложен метод двойной инъекции для уменьшения обратной утечки9. Этот метод вводит аутологистную кровь дважды с 20-минутным интервалом между инъекциями. Метод двойной инъекции применяется для индуцирования легкого (30 мкл) и умеренного (60 мкл) понтинового кровоизлияния, но не массивного понтинового кровоизлияния. В клинике большинство пациентов с понтийным кровоизлиянием с плохим прогнозом имеют массивное кровоизлияние (более 10 мл).
В предыдущем исследовании мы предоставили протокол для установления модели ишемического инсульта понтина у крыс10. В этом исследовании мы модифицируем существующий метод двойной инъекции и предоставляем подробный протокол, чтобы вызвать массивное понтийное кровоизлияние у крысы путем двойной инъекции 100 мкл аутологичной крови в двух разных местах в понс.
Protocol
Representative Results
Discussion
В настоящем исследовании мы предоставили протокол для создания модели крыс с массивным понтийным кровоизлиянием. Данная модель может быть использована для исследования патофизиологического механизма и прогноза массивного понтинового кровоизлияния.
На протяжении все…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Это исследование было финансово поддержано Национальным научным фондом Китая (81471181 и 81870933) и Программой открытия лабораторий Медицинского университета Гуанчжоу (0506308) для Y Jiang, а также Национальным научным фондом Китая (81701471) и Научной программой Муниципальной комиссии по здравоохранению Гуанчжоу (20191A011083) для Ц цз цю и Национальным научным фондом Китая (81501009) для L Wu.
Materials
| 100ml Saline solution | Guangdong yixiang | 191222201 C1 | Preparing heparin diluent |
| 100μl Microinjector | Shanghai Gaoge | Injection of autologous blood | |
| 1ml Syringe | Jiangsu Zhiyu | 20191014 | Withdraw autologous blood from the tail vein |
| 75% Alcohol | Shandong Lierkang | Disinfection of rat tail | |
| Adhesive tape | Shanghai Jinzhong | Surgicl instruments | |
| Animal anesthesia system | RWD | R510-31S-6 | Inducing and maintaining anesthesia |
| Balance beam | Jiangsu Saiangsi | For neurological deficit scores | |
| Blades | Shanghai Feiying | 74-C | For gross anatomy |
| Bone cement | Shanghai Xinshiji | 20180306 | Surgicl instruments |
| Brain tank | Shenzhen LEIYEA | For gross anatomy | |
| Butorphanol tartrate | Jiangsu Hengrui | For pain management | |
| Electric cranial drill | Nanjing Darwin biotechnology | 20180090018 | Making a burr hole on the skull |
| EP tube | Nantong Surui | Transfer autologous blood | |
| Erythromycin eye cream | Yunnan pharmacy | Eyes protection | |
| HE dye liquor | Solarbio | G1120 | For HE staining |
| Heating pad | Dangerous Jungle | JR01 | Keeping warm |
| Heparin sodium injection | Chengdu Haitong Pharmacal Company | 190701 | Preparing heparin diluent |
| IndoPhors | Guoyao of China | Sterilization | |
| Isoflurane | RWD | 20080701 | Inducing and maintaining anesthesia |
| Light dark box | Jiangsu Saiangsi | For neurological deficit scores | |
| Micro-injection pump | Baoding Leifu | TFD03-01-C | Injection of autologous blood |
| MRI system | Philips | Confirmation of infarction in vivo | |
| Needle holder | Shanghai Jinzhong | J32020 | Surgicl instruments |
| Penicilin | Guoyao of China | Infection Prevention | |
| Q-tips | Jiangxi Songhe | Surgicl instruments | |
| Scalp heedle | Jiangxi Hongda | 20200313 | Withdraw autologous blood from the tail vein |
| Scalpel | Shanghai Kaiyuan | 170902 | Surgicl instruments |
| Shearing scissors | Shanghai Jinzhong | Y00040 | Surgicl instruments |
| Stereotaxic apparatus | RWD | 900-00001-00 | for surgical positioning |
| Surgical towel | Xinxiang Huakangweicai | 20070601 | Surgicl instruments |
| Suture needle | Shanghai Jinzhong | Surgicl instruments | |
| Suture scissors | Shanghai Jinzhong | J25041 | Surgicl instruments |
| Tissue holding forcepts | Shanghai Jinzhong | J31080 | Surgicl instruments |
References
- Charidimou, A., et al. Brain hemorrhage recurrence, small vessel disease type, and cerebral microbleeds: A meta-analysis. Neurology. 89 (8), 820-829 (2017).
- Tao, C., et al. A novel brainstem hemorrhage model by autologous blood infusion in Rat: White Matter Injury, Magnetic Resonance Imaging, and Neurobehavioral features. Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 25 (5), 1102-1109 (2016).
- Ichimura, S., et al. Surgical treatment for primary brainstem hemorrhage to improve postoperative functional outcomes. World Neurosurgery. 120, 1289-1294 (2018).
- Behrouz, R. Prognostic factors in pontine haemorrhage: A systematic review. European Stroke Journal. 3 (2), 101-109 (2018).
- Guo, X., et al. Brainstem iron overload and injury in a rat model of brainstem hemorrhage. Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 29 (8), 104956 (2020).
- Chung, Y., Haines, S. J. Experimental brain stem surgery. Neurosurgery Clinics of North America. 4 (3), 405-414 (1993).
- Lekic, T., Tang, J., Zhang, J. H. A rat model of pontine hemorrhage. Acta Neurochirurgica Supplement. 105, 135-137 (2008).
- Lekic, T., et al. Evaluation of the hematoma consequences, neurobehavioral profiles, and histopathology in a rat model of pontine hemorrhage. Journal of Neurosurgery. 118 (2), 465-477 (2013).
- Shrestha, B. K., et al. Rat brainstem hemorrhage model: Key points to success in modeling. World Neurosurgery. 117, 106-116 (2018).
- Luo, M., Tang, X., Zhu, J., Qiu, Z., Jiang, Y. Establishment of acute pontine infarction in rats by electrical stimulation. Journal of Visualized Experiments. (162), (2020).
- Wu, L., et al. Keep warm and get success: The role of postischemic temperature in the mouse middle cerebral artery occlusion model. Brain Research Bulletin. 101, 12-17 (2014).
