Summary

Imagerie par tomographie par émission de positons pour la mesure in Vivo de la teneur en myéline dans le modèle rat de lysolecithine de la sclérose en plaques

Published: February 28, 2021
doi:

Summary

Ce protocole a pour but de surveiller les changements in vivo de myéline (démyélinisation et remylination) par imagerie par tomographie par émission de positons (TEP) dans un modèle animal de sclérose en plaques.

Abstract

La sclérose en plaques (SEP) est une maladie neuro-inflammatoire dont la dégénérescence et la démyélinisation axonales et neuronales se développent dans le système nerveux central, ce qui entraîne des dysfonctions motrices, une déficience psychique et une déficience cognitive pendant la progression de la SP. La tomographie par émission de positons (TEP) est une technique d’imagerie capable de quantifier les altérations cellulaires et moléculaires in vivo.

Les radiotraceurs ayant une affinité avec la myéline intacte peuvent être utilisés pour l’imagerie in vivo des changements de contenu de myéline au fil du temps. Il est possible de détecter soit une augmentation ou une diminution de la teneur en myéline, ce qui signifie que cette technique d’imagerie peut détecter les processus de démyélinisation et de remylination du système nerveux central. Dans ce protocole, nous démontrons comment utiliser l’imagerie TEP pour détecter les changements de myéline dans le modèle de rat lysolecithine, qui est un modèle de lésion de démyélinisation focale (induite par injection stéréotaxique) (c.-à-d., un modèle de maladie de sclérose en plaques). 11 ans et plus La formation image de PET de C-PIB a été exécutée à la ligne de base, et 1 semaine et 4 semaines après injection stéréotaxique de lysolecithine 1% dans le striatum droit (4 μL) et le callosum de corpus (3 μL) du cerveau de rat, permettant la quantification de la démyélinisation focale (emplacement d’injection après 1 semaine) et du processus de remyelination (site d’injection à 4 semaines).

L’imagerie TEP myéline est un outil intéressant pour surveiller les changements in vivo dans la teneur en myéline qui pourraient être utiles pour surveiller la démyélinisation de la progression de la maladie et la réponse thérapeutique.

Introduction

La sclérose en plaques (SEP) est une maladie neuro-inflammatoire qui affecte le système nerveux central, caractérisée par une inflammation, une démyélinisation et une perte axonale1. Le pronostic de cette maladie est variable même avec des avances dans le traitement, et c’est l’une des causes les plus communes des déficits neurologiques chez les jeunes1. Le diagnostic de SP est basé sur les critères de la manifestation clinique et de la visualisation des lésions caractéristiques par imagerie par résonance magnétique (IRM)2,3.

La tomographie par émission de positons (TEP) peut être un outil utile pour la surveillance in vivo de la progression de la SP et des effets thérapeutiques. Le radiotraceur B composé de Pittsburgh (PIB) étiqueté avec du carbone-11(11C-PIB) est largement utilisé pour quantifier les plaques β-amyloïdes; cependant, au cours de la dernière décennie, il a été étudié pour quantifier le contenu de myéline et montrer la démyélinisation dynamique et la remyélinisation4,5,6.

Différents traceurs de PET amyloïdes(11C-PIB, 18F-florbetaben,18F-florbetapir, 18F-flutemetamol) peuvent être utilisés pour quantifier la myéline et fournir des informations importantes sur la progression de la maladie et la réponse thérapeutique, permettant l’identification des processus de démyélinisation et de remylination, sans interférence de neuroinflammation, qui peuvent se produire avec des images conventionnelles de résonance magnétique (IRM)7. La formation image amyloïde de PET a montré l’absorption diminuée de traceur dans les patients actifs de SEP comparés aux patients non actifs qui pourraient être expliqués par des dommages tôt de matière blanche dans les patients actifs8. L’absorption inférieure de traceur amyloïde a été également associée au déclin cognitif dans une étude de suivi, montrant que cette technique est un outil valable pour étudier la pathophysiologie de la maladie et les résultats cliniques9.

Le modèle de rat de lysolecithine (LPC) est un modèle chimique induit de sclérose en plaques, où la toxine injectée, LPC, induit une réponse élevée des macrophages qui a comme conséquence l’inflammation accrue et, par conséquent, la démyélinisation10,11. La démyélinisation est rapidement inversée, en environ 4 semaines, ce qui en fait un bon modèle pour évaluer les processus de démyélinisation et de remylination chez les rongeurs. Ce modèle a déjà été évalué à l’aide de l’imagerie TEP, avec de bons résultats et une corrélation avec les essais post mortem12.

Ici nous présentons le protocole pour l’imagerie de PET de myéline avec 11C-PIB dans le modèle de rat de lysolecithine, montrant cette technique d’imagerie pour être un outil utile pour la mesure in vivo de la teneur en myéline.

Protocol

Toutes les procédures ont été menées conformément aux directives du Conseil national pour le contrôle de l’expérimentation animale (CONCEA, Brésil) et ont été approuvées par le Comité d’éthique pour la recherche animale de la Faculté de médecine de l’Université de Sao Paulo (CEUA-FMUSP, Brésil – numéro de protocole: 25/15). NOTE : Dans ce protocole, nous montrons comment induire un modèle de rat de lysolecithine de la sclérose en plaques et comment acquérir et analys…

Representative Results

La figure 1 montre 11images TEP C-PIB illustrées avec des changements de myéline au fil du temps. Dans l’analyse de base, aucune différence ne peut être observée dans la teneur en myéline (c.-à-d. qu’aucune démyélinisation n’est présente). Dans l’image de point de temps d’une semaine, il est possible de voir la lésion démyélinée focale (dans l’hémisphère droit) comme indiqué par la flèche blanche. Les images sont présentées dans les 3 plans anatomiq…

Discussion

Le plus grand avantage d’utiliser le modèle de lysolecithine pour étudier la sclérose en plaques est le calendrier rapide pour la démyélinisation (environ 1 semaine) et la réélinisation (environ 4 semaines) àse produire 14. Ce modèle peut également être induit chez les souris15, cependant, l’induction chez les rats est plus avantageux pour l’imagerie TEP in vivo en raison de la plus grande taille du cerveau de rat par rapport aux souris.

<p cla…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

β cube (Molecubes NV, Belgique) a été soutenu par la São Paulo Research Foundation, FAPESP – Brésil (#2018/15167-1). LES a une bourse d’études de doctorat de FAPESP – Brésil (#2019/15654-2).

Materials

Analytical Balance Marte AUWZZOD max: 220 g- min: 1 mg
Anestesia vaporizer Nanitech 15800
Beta-cube Molecubes
Bulldog clamp Stoelting 5212043P
clorexidine Rioquimica 0.5%/100 mL
Cotton swabs johnson e johnson
Dose calibrator Capintech
Drill Kinzo powertools 352901 Model Q0M-DC3C
Eppendorf tube Eppendorf 30125150 1.5 mL
Eye lubricant ADVFARMA 30049099  vaseline 15 g (pharmaceutical purity)
Fine forceps Stoelting 52102-38P
Gloves Descarpack 212101  6.5 size
Heating pad Softhear
Injection Syringe Hamilton 80314 10µ, 32ga, model 701
Insuline syringe BD 328328 1 mL insulin syringes with needle
Isoflurane Cristália 410525 100 mL , concentration 1 mL/1 mL
Ketoprofen or other analgesic Sanofi 100 mg/2 mL
lidocaine Hipolabor 1.1343.0102.001-5 2%/20mL
L-α-Lysophosphatidylcholine from egg yolk Sigma-aldrich L-4129 25 mg – ≥99%, Type I, powder
Needle holder Stoelting 5212290P
Oxygen White Martins 7782-44-7 Compressed gas
PMOD software PMOD technologies Version 4.1 module fuse it
Rat anesthesia mask KOPF Model 906
Saline Farmace 0543325/ 14-8 0.9% sodium chloride for injection, 10 mL
Scapel blades Stoelting 52173-10
Scapel handles Stoelting 52171P
Scissor Stoelting 52136-50P
Semi-analytical Balance Quimis BK-3000 max:3,100 g; min:0.2 g
shaver Mega profissional AT200 model
Stereotactic Apparatus KOPF Nodel 900
Universal holder with needle support KOPF Model 1772-F1 Hamilton support for 5 and 10 µL

References

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Cite This Article
de Paula Faria, D., Real, C. C., Estessi de Souza, L., Teles Garcez, A., Navarro Marques, F. L., Buchpiguel, C. A. Positron Emission Tomography Imaging for In Vivo Measuring of Myelin Content in the Lysolecithin Rat Model of Multiple Sclerosis. J. Vis. Exp. (168), e62094, doi:10.3791/62094 (2021).

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