重度卵巣機能障害患者における不妊治療の保存
Summary
重度の卵巣機能障害患者に対する卵巣卵胞の薬物を含まないインビトロ活性化(IVA)の検査手順の詳細を提示する。この方法は、卵巣過剰刺激当たりの取得可能な卵母細胞の数を増加させ、それらの患者の生殖能力の保存に利益をもたらす可能性がある。
Abstract
卵巣機能は、加齢の間、および核型異常、自己免疫疾患、化学および放射線療法、ならびに卵巣手術を含むいくつかの病態生理学的状態において徐々に低下する。重度の卵巣機能不全を有する未婚女性では、不妊治療の保存は将来の妊娠にとって重要である。卵母細胞凍結保存は出生時の保存のための確立された方法であるが、これらの患者は卵巣過剰刺激後でさえ限られた数の卵母細胞を保存することができ、将来の妊娠を保証するのに十分な卵母細胞を確保するために反復刺激につながった。この問題を解決するために、我々は最近、卵巣卵胞の初期段階を刺激して前根嚢胞段階に発達することを可能にする薬物を含まないインビトロ活性化(IVA)手順を開発しました。これらの前骨葉包は、性腺刺激のユニークなプロトコルに応答することができ、その結果、凍結保存のための卵巣刺激当たりの取得卵母細胞の数が増加する。薬物を含まないIVAは、外科的アプローチおよび卵巣刺激から構成される。腹腔鏡手術を受けた患者から片方または両方の卵巣から皮質の一部を取り除いた。卵巣皮質組織は、カバのシグナル伝達経路を破壊し、初期段階の卵胞の発達を刺激するために小さな立方体に切断された。これらの立方体は、両方の卵管のセロサの下だけでなく、残りの卵巣に正交性に移植された。我々はすでに薬物を含まないIVAの外科的処置及びその後の卵巣刺激のプロトコルを公表しているが、ここでは、薬物を含まないIVAに必要な実験室法の詳細を提示する。
Introduction
卵巣機能は、加齢の間に徐々に低下し、いくつかの病態生理学的状態は、核型異常、自己免疫疾患、化学および放射線療法、および卵巣手術を含む。不妊治療の保存は、重度の卵巣機能不全を持つ未婚女性が将来の妊娠の可能性を維持するための最良の選択肢の1つです。不妊治療の保存のために、現在、主にオンコ不妊治療分野で2つの方法が利用可能です。卵母細胞凍結保存は、不妊治療の保存のための確立された手順であり、多くの成功した症例が報告されている1,2.一方、卵巣組織凍結保存は、がん患者における不妊治療の保存のためにも確立されたが、まだ実験戦略3、4である。どちらの方法でも、妊娠のためには複数の数の成熟卵母細胞が必要である。一般に、早期卵巣不全(POI)を有する患者は、40歳より前に月経前に、卵巣予備軍が低い中年女性は、成熟卵母細胞5、6、7を生み出すために卵巣刺激に対して貧しい卵巣応答(POR)を示した。さらに、低い数の角根を有する若年患者も、卵巣刺激7に対してPORを示した。これらの患者は、適切な卵巣過剰刺激の後でさえ、取得可能な卵母細胞の数が非常に限られており、したがって、妊娠のための卵母細胞の十分な数を確保するために複数の高価な手順を必要とする。
卵母細胞の寄付に続いて、夫の精子と胚移植(ET)を伴う体外受精(IVF)は、自分の卵母細胞8、9、10を得るのに困難を有するこれらのPOIおよびPOR患者にとって唯一の選択肢である。しかし、卵母細胞の寄付は、倫理的な問題だけでなく、自己免疫および妊娠合併症11、12、13、14によって複雑化しています。これらの問題を解決するために、患者自身の卵母細胞を用いた不妊治療の確立が望まれている。POI患者に対して、我々は、正常な卵胞の成長と成熟卵子の生成を可能にするインビトロ活性化(IVA)アプローチを開発し、多くの妊娠および出産をリードする15。IVAでは、腹腔鏡手術の下で卵巣を除去した後に卵巣コルテックスを断片化し、Akt-刺激薬による卵胞を活性化し、第2回腹腔鏡手術15の下で卵管のセロシの下に作られた人工パウチにヘテロトーブリ移植を行うために2日間培養した。この手順は、卵巣皮質断片化後の原始、一次および二次卵胞の成長を促進し、カバのシグナル伝達破壊を促進する16、続いてAktシグナル伝達刺激装置17を有する2日間培養を行った。
重篤なPOI症例とは対照的に、卵巣予備軍の減少を有するPOR患者は複数の二次卵胞を有する。カバのシグナル伝達破壊だけでも二次卵胞の成長を促進するのに有効であるため、我々は最近、Akt刺激薬の治療なしに皮質断片化および直交性移植を含む薬物のないIVA処置を使用してPOR患者のための成功した妊娠および出産を実証した。薬物を含まないIVAは、卵巣卵胞の初期段階を刺激して、1回の手術後に前骨胞期に発達し、IVF胚移植15,18に対して取得卵母細胞の数を増加させた。薬物を含まないIVAアプローチは、培養中の潜在的な卵胞喪失を回避する1)によって当社の元のIVAと比較していくつかの利点を有し、2)第2の手術の侵襲性とコストを最小限に抑え、3)短期手術後の安静所のみを含む、および4)正体移植による自発的な妊娠の可能性。我々は最近、薬物を含まないIVA19の外科的処置と手術後の卵巣刺激の詳細なプロトコルを示すビデオ記事を公開した20.ここでは、薬物を含まないIVAに必要なラボメソッドの詳細を紹介します。
Protocol
Representative Results
Discussion
本稿では、薬物を含まないIVAの詳細な実験プロトコルを示した。薬物を含まないIVAは、卵巣予備軍を減少させて二次卵胞の成長を促進するPOR患者に対する不妊治療の新しいアプローチであり、卵巣刺激後により成熟した卵母細胞を生み出し、妊娠20に成功した。卵巣予備軍の減少を有する15人のPOR患者において、このアプローチは1つの自発的な妊娠を達成し、体外受精胚移?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
薬を含まないIVA処置を支援してくれた伊華達司、栗本佐知子、高橋和子、吉沢由紀、嵐正生、藤田健太郎、九藤恵奈、栗本由佳、若槻真由子氏に感謝します。また、英語のナレーションを挿入してくれたレベッカ・トルーマンとグレゴリー・トルーマンに感謝します。本研究は、日本学術振興会(JSPS)、科学研究B(19H03801)、チャレンジング探索研究(18K19624)によって支援されました。
Materials
| 4.5 onz specimen container | FALCON | 354013 | Other products may also be suitable |
| 60mm dish | FALCON | 351007 | Other products may also be suitable |
| 50 x 50 cm sterile drape | HOGY Medical | SR-823 | Any type of sterile produsts may also be suitable |
| Disposable pippete | FALCON | 357575 | Other products may also be suitable |
| Fine scissors, Curved | WPI | #14224-G | Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products |
| Hot plate | TOKAI HIT | TPiE-SP | Use at operation room to maintain the temperature of dishes containing ovarian tissue before transplantation |
| Human Serum Albumin Solution | Irvine Scientific | 9988 | Medium for handling ovarian tissue |
| IVA cannule | KITAZATO | 446030 IVA-6030E | Specific cannula for tissue autografting |
| KAI medical Disposable scalpel | WPI | #5 10-A | Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products |
| Micro scissors, Curved | WPI | #503364 | Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products |
| Modified HTF Medium-HEPES | Irvine Scientific | 90126 | Medium for handling ovarian tissue |
| Sterile gauze | Osaki Medical | 15004 | Any type of sterile produsts may also be suitable |
| Swiss Tweezers, Curved Tips | KAI | #504505 | Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products |
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