使用线性压花器在老鼠身上进行胃旁路的规程

Summary

Roux-en-Y胃旁路（RYGB）是治疗肥胖症和糖尿病的。然而，RYGB疗效背后的机制尚未完全了解，而且由于技术困难导致动物模型的高死亡率，研究受到限制。本文提供了如何在成功率高的老鼠身上执行 RYGB 的说明。

Abstract

Roux-en-Y胃旁路（RYGB）通常用于治疗严重肥胖症和2型糖尿病。然而，减肥和代谢变化的机制没有得到很好的理解。多种因素被认为起着一定的作用，包括热量摄入减少、营养吸收减少、饱腹增加、促进饱腹激素的释放、胆汁酸代谢的改变和肠道微生物群的改变。

大鼠RYGB模型提供了一个理想的框架来研究这些机制。先前对小鼠模型的工作死亡率很高，从17%到52%不等，限制了它们的采用。Rat 模型展示了更多的生理储备，以手术刺激，并在技术上更容易采用，因为他们允许使用手术订书机。然而，手术订书机的一个挑战是，它们经常留下一个大胃袋，在人类中不能代表RYGB。

在这个协议中，我们提出了一个RYGB协议，在老鼠，导致一个小胃袋使用手术订书机。利用两个订书机火灾，去除大鼠的森林病变，我们得到一个较小的胃袋类似于一个典型的人类RYGB。手术停滞也会导致比尖锐的分裂更好的止血。此外，大鼠的森林瘤不包含任何腺体，其去除不应改变RYGB的生理。

与假组相比，RYGB 组群的体重减轻和代谢变化显著，14 周的葡萄糖耐受性显著降低。此外，该协议在 RYGB 之后的存活率为 88.9%。本协议中描述的技能无需以往的显微外科经验即可获得。一旦掌握，这个程序将提供一个可重复的工具，研究RYGB的机制和效果。

Introduction

肥胖症和2型糖尿病已成为世界流行的^1。虽然医疗减肥可以改善糖尿病患者，但患有严重糖尿病的患者从减肥手术中受益最大。减肥手术已被证明是安全和有效的减肥和改善或治愈2型糖尿病^2，3，即使在那些长期疾病^4。代谢减肥程序，如目前的黄金标准Roux-en-Y胃旁路（RYGB）手术，诱导葡萄糖平衡的快速和持续改善，同时也减少了糖尿病药物^5，6，7的需求。

RYGB后，葡萄糖平衡改善发生迅速，独立于减肥^8。提出了两个主要理论来解释代谢手术后发生的与糖尿病缓解相关的代谢变化。首先，后遗症假说假设，在旁路后，未消化的营养物质浓度升高到达基座肠道，增强了GLP-1等激素的释放。另一方面，前体假说表明，绕过近肠可以减少抗胰蛋白激素的分泌。这两种效果都可能导致葡萄糖代谢^{的早期改善9。}

动物模型有可能成为研究这些机制的有力工具。然而，利用鼠标或大鼠模型的一个主要障碍是执行这些程序的技术困难。大多数研究都依赖于老鼠模型^{10，11，12。}老鼠模型一直很难，因为老鼠的胃太小，不能使用订书机设备^11，死亡率是令人无法接受的高，从17到52%13。在大鼠中，由于胃血管在分裂胃^12、14之前的复杂结结^，一些协议在技术上仍然难以执行。其他模型使用订书机划分胃部，但留下一个大袋子不符合后RYGB人体解剖^学11。在此模型中，我们提供了关于如何在鼠模型中使用线性订书机执行 RYGB 的详细说明，从而产生更符合人体解剖学的胃袋。总的来说，这个程序与优良的存活率和代谢结果有关。

Protocol

动物使用协议已获得艾伯塔大学健康科学动物护理和使用委员会（AUP00003000）的批准。有关显示 RYGB 解剖学的图表，请参阅图 1。 1. Roux- en – y 胃旁路 动物和操作设置的准备 手术前一周，为大鼠提供口服补液疗法和液体饮食，以及固体饮食和水，使其适应这种新饮食。 手术前12-18小时只能取水的快鼠。 确保大鼠在凸起的电线?…

Representative Results

动物和住房36只雄性威星大鼠成对饲养，从6周大开始喂养60%的无菌啮齿动物高脂肪饮食（图2）。在16周大的时候，他们接受了RYGB或假手术。术后第一周后，大鼠恢复高脂肪饮食。一半的老鼠在术后2周被安乐死，另一半在术后14周被安乐死。 死亡率总的来说，33只（91.7%）大鼠存活到计划的研究终点。所有接受早期安乐死的…

Discussion

RYGB 涉及创建一个小胃袋（小于 30 mL），以及创建胆小板肢体和 Roux 肢体（图 1）。在人类中，胆小板肢体通常为30至50厘米，从胃残余物、肝脏和胰腺中输送分泌物。Roux肢体的长度通常为75至150厘米，是摄入食物的主要通道。常见的通道是剩余的小肠，两肢连接的地方，是大部分消化和吸收发生的地方，因为胰腺酶和胆汁与摄入的食物^混合17。

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Materials

2-0 Silk Sutures	Ethicon	K533
3-0 Vicryl Sutures	Ethicon	J219H
4% Isoflurane	N/A	N/A
5% Dextrose and 0.9% Sodium Chloride Solution – 1000 mL	Baxter	2B1064
50 mL Conical Centrifuge Tubes	Fisher Scientific	14-432-22
6-0 Prolene Sutures	Ethicon	8805H
Anesthetic Machine	N/A	N/A
Animal Hair Shaver	N/A	N/A
Betadine Solution	N/A	N/A
Castrojievo Needle Holder with lock 14 cm (smooth curved)	World Precision Instruments	503258
ECHELON FLEX Articulating Endoscopic Linear Cutter	Ethicon	EC45A
Economy Tweezers #4	World Precision Instruments	501978
ENDOPATH ETS Articulating Linear Cutter 45mm Reloads	Ethicon	6R45B
Far Infrared Warming Pad Controller with warming pad (15.2 cm W x 20.3 cm L), pad temperature probe, and 10 disposable, non-sterile sleeve protectors	Kent Scientific	RT-0515
Large Rat Elizabethan Collar	Kent Scientific	EC404VL-10
Liquid Diet Feeding Tube (150 mL)	Bio-Serv	9007
Liquid Diet Feeding Tube Holder (short adjustable)	Bio-Serv	9015
Micro Mosquito Forceps	World Precision Instruments	500452
Micro Scissors	World Precision Instruments	503365
Mouse Diet, High Fat Fat Calories (60%), Soft Pellets	Bio-Serv	S3282
No. 11 Blade and Scalpel Handle	N/A	N/A
OPMI Vario Surgical Microscope	ZEISS	S88
Raised Floor Grid	Tecniplast	GM500150 Raised Floor Grid
Rodent Liquid Diet, Lieber-DeCarli '82, Control, 4 Liters/Bag	Bio-Serv	F1259
Sodium Chloride Irrigation 0.9% Solution – 500 mL	Baxter	JF7633
Sterile Cotton Swabs	N/A	N/A
Sterile Drape	N/A	N/A
Sterile Towel	N/A	N/A
Thermal Cautery Unit	World Precision Instruments	501293