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Micropatterning Transmission Electron Microscopy Griglie per dirigere il posizionamento delle cellule all'interno dei flussi di lavoro della tomografia crioelettronica a cellule intere
JoVE 신문
생화학
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JoVE 신문 생화학
Micropatterning Transmission Electron Microscopy Grids to Direct Cell Positioning within Whole-Cell Cryo-Electron Tomography Workflows
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Micropatterning Transmission Electron Microscopy Griglie per dirigere il posizionamento delle cellule all'interno dei flussi di lavoro della tomografia crioelettronica a cellule intere

DOI:
10.3791/62992-v

•

09:53 min

•

September 13, 2021

•

, , ,
1Department of Biochemistry,University of Wisconsin, Madison, 2Cryo-Electron Microscopy Research Center, Department of Biochemistry,University of Wisconsin, Madison, 3Midwest Center for Cryo-Electron Tomography, Department of Biochemistry,University of Wisconsin, Madison, 4Department of Chemistry,University of Wisconsin, Madison, 5Morgridge Institute for Research

Chapters

  • 00:04Introduction
  • 01:25Preparation of Grids for Patterning and Application of the Anti-fouling Layer
  • 02:50Applying PLPP Gel
  • 03:33Micropatterning
  • 06:11Deposition of Extracellular Matrix (ECM) Proteins
  • 06:54Results: Micropatterning to Direct Cell Positioning within Whole-cell Cryo-electron Tomography
  • 09:17Conclusion

Summary

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L'obiettivo di questo protocollo è quello di dirigere l'adesione e la crescita cellulare verso aree mirate di griglie per la crio-microscopia elettronica. Ciò si ottiene applicando uno strato antivegetativo che viene ablato in modelli specificati dall'utente seguito dalla deposizione di proteine della matrice extracellulare nelle aree modellate prima della semina cellulare.

Tags

MicropatterningTransmission Electron MicroscopyCryo-electron TomographyCell PositioningWhole-cell Cryo-electron TomographyEM GridsPoly-L-lysinePEG-SVAHEPESCell CultureCryo-CLEMCryo-FIB Milling

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