Summary

Une méthode d’inoculation efficace pour Phytophthora capsici sur les plantes de poivre noir

Published: September 16, 2022
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Summary

Piquer la tête basale de la plante de poivre noir est une méthode brève et rapide pour l’endommager. Ici, nous avons fourni des étapes détaillées avec une vidéo pour infecter les plantes de poivre noir.

Abstract

Piper nigrum L. (poivre noir) est une vigne ligneuse typique qui est une culture d’épices économiquement importante à travers le monde. La production de poivre noir est considérablement affectée par la pourriture des racines causée par Phytophthora capsici, qui a sérieusement influencé le développement de l’industrie en tant que problème de « point d’étranglement ». Cependant, le mécanisme génétique moléculaire de résistance au poivre noir n’est pas clair, ce qui entraîne des progrès lents dans le développement de nouvelles variétés de poivre noir. Une inoculation efficace et un système d’échantillonnage précis de Phytophthora capsici sur les plants de poivre noir sont essentiels pour étudier cette interaction plante-pathogène. L’objectif principal de cette étude est de démontrer une méthodologie détaillée où la tête basale du poivre noir est inoculée avec Phytophthora capsici, tout en fournissant une référence pour l’inoculation des plants de vigne ligneux. La tête basale de la plante de poivre noir a été piquée pour l’endommager, et des granulés de mycélium ont recouvert les trois trous pour retenir l’humidité afin que l’agent pathogène puisse bien infecter la plante. Cette méthode offre un meilleur moyen de résoudre l’instabilité causée par les méthodes d’inoculation traditionnelles, y compris le trempage du sol ou le trempage des racines. Il fournit également un moyen prometteur d’étudier le mode d’action entre les plantes et d’autres agents pathogènes des plantes transmis par le sol dans la sélection de précision agricole.

Introduction

Le poivre noir (Piper nigrum L.) est un grimpeur ligneux et l’une des cultures d’épices les plus importantes. Il est connu sous le nom de « roi des épices »1 et est cultivé dans plus de 40 pays et régions d’Asie, d’Afrique et d’Amérique latine. La pourriture des racines de Phytophthora est la maladie la plus dévastatrice du poivre noir et est causée par l’oomycète Phytophthora capsici. Cet agent pathogène infecte également les cucurbitacées, les aubergines, les piments et les tomates 2,3. Avec le poivre noir, une culture entière peut parfois être décimée par cette maladie. L’expansion des zones de plantation de poivre est limitée en raison de l’indisponibilité des variétés résistantes, ce qui a considérablement entravé le développement de l’industrie chinoise du poivre noir. Une inoculation efficace et un système d’échantillonnage précis de Phytophthora capsici sur les plants de poivre noir sont essentiels pour étudier cette interaction plante-pathogène.

L’identification et le dépistage de la résistance dans les ressources en matériel génétique sont la condition fondamentale pour la recherche sur la pathogénicité de l’agent pathogène et la sélection et l’utilisation de variétés résistantes. Une approche largement utilisée consiste à utiliser une variété de méthodes d’identification basées sur les espèces végétales et les groupes d’agents pathogènes. Les méthodes d’identification actuelles comprennent l’identification de la population, l’identification individuelle, l’identification des organes, l’identification des tissus, l’identification cellulaire, l’identification biochimique et l’identification moléculaire, qui ont été développées au cours des dernières années 4,5. Il y a eu du succès dans ces domaines, mais il y a aussi beaucoup de problèmes. Quelle que soit la méthode choisie, les exigences de base de l’identification de la résistance des plantes sont cohérentes, y compris des objectifs clairs, des résultats fiables et des méthodes simples, rapides et faciles à normaliser. Ce principe doit également être suivi dans l’identification de la résistance au poivre noir.

Dans des conditions de terrain naturel, l’identification de la résistance aux maladies peut être influencée par de nombreux facteurs environnementaux. Par conséquent, il a été proposé d’utiliser en laboratoire des feuilles détachées et des racines irriguées pour identifier la résistance aux maladies. Les jeunes feuilles de plantes saines ont été inoculées in vitro en laboratoire, et la surface des feuilles malades a été mesurée en inoculant l’agent pathogène afin d’identifier la résistance aux maladies des plantes6. Cependant, l’inoculation in vitro des feuilles ne peut être utilisée que pour l’identification générale de la résistance et non pour les études d’interaction moléculaire. Malgré cela, le statut de résistance à la maladie se présente souvent dans l’inoculation racinaire irriguée, ce qui entraîne une incertitude dans l’étude de suivi de la sélection moléculaire pour la résistance aux maladies. Par conséquent, des méthodes de détection intérieure rapides et simples sont essentielles. Cette étude vise à fournir une méthode d’identification de la résistance en laboratoire.

Protocol

1. Préparation des plants de coupe de poivre noir pour l’infection Prenez une coupe à cinq nœuds, d’environ 40 cm de long avec un diamètre de 0,5 cm, à partir d’une branche orthotrope saine et en croissance vigoureuse de poivre noir à l’aide d’un couteau à taille désinfecté ou de sécateurs. Taillez les trois nœuds inférieurs des branches plagiotropes, les deux nœuds supérieurs restants avec environ 10 feuilles intactes. Préparer le substrat d’enracinement co…

Representative Results

La figure 1 montre les symptômes des feuilles de poivre noir après l’inoculation de P. capsici . La figure 2 montre les symptômes des tiges de poivre noir après l’inoculation de P. capsici . L’agent pathogène a infecté le poivre noir à la tige basale; les symptômes, y compris le jaunissement des feuilles, l’apparition du flétrissement, le brunissement du xylème et le noircissement progressif des vaisseaux. <strong class="xfig…

Discussion

Dans cette étude, la tête basale a été piquée pour endommager et fournir un système d’inoculation efficace dans la plante de poivre noir. Des pastilles mycéliennes ont ensuite recouvert les trois trous pour retenir l’humidité et permettre à l’agent pathogène de bien infecter la plante. Après l’inoculation, les feuilles sont devenues jaunes et sont tombées et les plantes inoculées sont mortes. Aucune lésion ne s’est développée dans les usines de contrôle. La plupart des gènes exprimés différe…

Acknowledgements

Ce travail a été soutenu financièrement par le National Key R&D Program of China (2020YFD1001200), le China Agriculture Research System (CARS-11), le fonds de recherche spécifique de The Innovation Platform for Academicians of Hainan Province (YSPTZX202154), la Natural Science Foundation of Hainan Province of China (321RC652) et la Natural Science Foundation of China (No. 31601626).

Materials

Agar powder Solarbio A8190
Clean bench Haier
Dextrose Xilong Scientific 15700501
High temperature sterilizing oven Zaelway
Petri dish plates Biosharp BS-90-D

References

  1. Gordo, S. M., et al. High-throughput sequencing of black pepper root transcriptome. BMC Plant Biology. 12 (1), (2012).
  2. Leonian, L. H. Stem and fruit blight of Peppers caused by Phytophthora capsici sp. Nov. Phytopathology. 12 (9), 401-408 (1922).
  3. Ding, X., et al. Priming maize resistance by its neighbors: Activating 1,4-benzoxazine-3-ones synthesis and defense gene expression to alleviate leaf disease. Frontiers in Plant Science. 6, 830 (2015).
  4. Fonseca, C. E. L., Vianda, D. R., Hansen, J. L., Pell, A. N. Associations among forage quality traits, vigor, and disease resistance in alfalfa. Crop Science. 39 (5), 1271-1276 (1999).
  5. Altier, N. A., Thies, J. A. Identification of resistance to Pythium seedling disease in Alfalfa using a culture plate method. Plant Disease. 79 (4), 341-345 (1995).
  6. Pratt, R. G., Rowe, D. E. Evaluation of simplified leaf inoculation procedures for identification of quantitative resistance to Sclerotinia trifoliorum in Alfalfa seedling. Plant Disease. 82 (10), 1161-1164 (1998).
  7. Hao, C., et al. De novo transcriptome sequencing of black pepper (Piper nigrum L.) and an analysis of genes involved in phenylpropanoid metabolism in response to Phytophthora capsici. BMC Genomics. 17 (1), 1-14 (2016).
  8. Dong, C., et al. Field inoculation and classification of maize ear rot caused by Fusarium verticillioides. Bio-protocol. 8 (23), 3099 (2018).
  9. English, J. T., Laday, M., Bakonyi, J., Schoelz, J. E., Érsek, T. Phenotypic and molecular characterization of species hybrids derived from induced fusion of zoospores of Phytophthora capsica and Phytophthora nicotianae. Mycological Research. 103 (8), 1003-1008 (1999).
  10. Chatterjee, S., et al. Antioxidant activity of some phenolic constituents from green pepper (Piper nigrum L.) and fresh nutmeg mace (Myristica fragrans). Food Chemistry. 101 (2), 515-523 (2007).
  11. Pfender, W. F. Production of sporangia and release of zoospores by Phytophthora megasperma in soil. Phytopathology. 67 (5), 657-663 (1977).
  12. Nagila, A., Schutte, B. J., Sanogo, S., Idowu, O. J. Chile pepper sensitivity to mustard seed meal applied after crop emergence. HortScience. 56 (2), 1-7 (2021).
  13. Lamour, K. H., Stam, R., Jupe, J., Huitema, E. The oomycete broad-host-range pathogen Phytophthora capsica. Molecular Plant Pathology. 13 (4), 329-337 (2012).
  14. Hardham, A., Gubler, F. Polarity of attachment of zoospores of a root pathogen and pre-alignment of the emerging germ tube. Cell Biology International Reports. 14 (11), 947-956 (1990).
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Cite This Article
Su, Y., Fan, R., Hu, L., Wu, B., Hao, C. An Effective Inoculation Method for Phytophthora capsici on Black Pepper Plants. J. Vis. Exp. (187), e63002, doi:10.3791/63002 (2022).

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