Method Article

생쥐의 심근경색 유도를 위한 수정된 간단한 방법

DOI:

10.3791/63042

⸱

December 3rd, 2021

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Cardiology, The First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College, 2Department of Cardiology, Ren Ji Hospital, School of Medicine, Shanghai Jiao Tong University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

적절한 마취 하에 쥐의 심장은 늑간 공간을 통해 외부화되었고, 대부분의 실험실에서 쉽게 구할 수 있는 재료를 사용하여 좌측 전방 하행 동맥(LAD)을 결찰하여 심근경색을 성공적으로 유도했습니다.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

심근경색(MI)은 주요 사망 원인 중 하나입니다. MI 모델은 MI 후 리모델링의 병리 메커니즘을 조사하고 새로운 치료제를 평가하는 데 널리 사용됩니다. MI를 유도하기 위해 다양한 방법(예: 이소프로테레놀 치료, 냉동 손상, 관상 동맥 결찰술 등)이 사용되었습니다. 이소프로테레놀 치료 및 냉동 손상과 비교했을 때, 관상동맥 결찰술은 MI 후 허혈 반응 및 만성 리모델링을 더 잘 반영할 수 있습니다. 그러나 생쥐의 관상동맥 결찰술을 위한 전통적인 방법은 기술적으로 어렵습니다. 현재 연구는 쉽게 구할 수 있는 재료를 사용하여 마우스에서 MI를 유도하는 간단하고 효율적인 프로세스를 설명합니다. 쥐의 흉부 피부는 안정된 마취 하에 절개되었다. 심장은 대흉근(pectoralis major)과 소흉근(pectoralis minor)을 둔하게 분리한 후 늑간 공간을 통해 즉시 외부화되었습니다. 좌측 전방 하행 분지(LAD)는 원점에서 3mm 떨어진 6-0 봉합사로 결찰되었습니다. LAD 결찰 후 2,3,5-트리페닐테트라졸륨 클로라이드(TTC)로 염색한 결과 MI의 성공적인 유도 및 MI 후 흉터 크기의 시간적 변화를 나타냈습니다. 한편, 생존 분석 결과, MI 후 7일 이내에 주로 심장 파열로 인한 명백한 사망률이 나타났다. 또한, MI 후 심장 초음파 평가는 수축 기능 장애 및 심실 리모델링의 성공적인 유도를 보여주었습니다. 일단 숙달되면 쉽게 구할 수 있는 재료를 사용하여 2-3분 이내에 마우스에서 MI 모델을 설정할 수 있습니다.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

심근경색(MI)은 전 세계적으로 사망 및 장애의 중요한 원인중 하나입니다 1,2,3,4,5. 시기적절한 재관류에도 불구하고 현재 MI 후 심장 리모델링을 치료할 수 있는 효과적인 치료법이 부족합니다. 이에 따라 MI 6,7,8에 대한 기계론적 탐색 및 치료 개발에 상당한 노력이 기울여졌습니다. 참고로, MI 모델의 구축은 이러한 목적을 달성하기 위한 전제 조건입니다.

몇몇 방법들(예를 들어, 이소프로테레놀 치료, 냉동 손상, 관상동맥 결찰술 등)이 작은 동물에서 MI 모델을 유도하기 위해 제안되었다. 이소프로테레놀 치료는 MI 유도를 위한 간단한 방법이지만, 표적 부위의 경색을 유도할 수 없다9. 냉동손상은 직접적인 허혈보다는 얼음 결정의 생성과 ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

동물 실험과 관련된 실험은 상하이 자오퉁 대학교 의과대학 런지 병원 실험실 동물 복지 윤리위원회(R52021-0506)의 필요한 모든 승인을 받아 수행됩니다. 8-10주 사이의 암컷 및 수컷 C57BL/6J 마우스가 연구에 사용되었습니다.

1. 간이 마취 장비 준비(선택 사항)

알림: 이것은 선택적 수술 전 설정이며 섹션 2에 언급된 대로 적정 가능한 마취로 대체할 수 있습니다. 이 설정을 동물 절차에 적용하기 전에 기관 동물 윤리 위원회와 수의사와 상의해야 합니다.

  1. 15mL 원심 분리 튜브를 사용하여 개구부에서 약 3cm 떨어진 튜브의 장축에 수직으로 절단합니다.
    알림: 밸브가 성공적으로 삽입될 수 있도록 절단이 튜브 루멘의 원형 둘레의 절반보다 큰지 확인하십시오.
  2. 절단부와 튜브 개구부 사이의 원심분리기 튜브 벽에 구멍(직경, 2mm)을 뚫습니다.
  3. 플라스틱 시트에서 적절한 크기의 밸브 조각을 자르고 튜브 벽의 절단부에 밸브를 삽입합니다.
    알림: 밸브는 삽입 깊이를 변경하여 이소플루란의 방출 속도를 제어하는 데 사용할 수 있습니다.
  4. 흄 후드 내부에서 튜브 바닥을 잘라 열고 산소 공급....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

실험 프로토콜과 몇 가지 중요한 단계는 그림 1에 나와 있습니다. 단순화된 마취 장비는 마취를 유도했습니다. 그림 2A에서 볼 수 있듯이 유도된 마취는 규칙적인 호흡 속도(테스트된 마우스에서 90-107회 호흡/분으로 다양함)에 반영된 바와 같이 안정적이었습니다. 관상동맥 결찰술 후 TTC 염색 분석은 심근경색의 성공적인 유도 및 MI 후 흉터 크기의 시간적 변화를 나타냈습니다(그림 2B). 한편, 생존 분석 결과는 수컷 및 암컷 C57BL/6J 마우스에서 MI 후 7일 이내에 명백한 사망률을 보여주었습니다(그림 2C,D). 심실 파열(수컷 생쥐 56%, 암컷 생쥐 40%)은 MI 후 사망의 흔한 원인이었다. 또한, MI 후 심장 초음파 평가는 수축 기능 장애 및 심실 리모델링의 성공적인.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

본 보고서는 Gao16에 의해보고 된 방법에서 수정 된 쉽게 구할 수있는 재료를 가진 마우스에서 MI 유도를위한 쉬운 프로토콜을 설명했습니다. Murine MI 모델은 MI 이후 기능 장애 및 리모델링을 위한 기계론적 탐색 및 약물 스크리닝에 없어서는 안 될 필수 요소입니다12. MI 유도를 위한 기존 기술 중 관상동맥 결찰술이 가장 일반적으로 시행되는 방법입니다. 관상동맥결찰술은 심근경색의 허혈적 특성을 충실히 재현하여 임상시나리오18,19와 유사한 흉터 치유 및 리모델링 반응을 유도한다. 그러나 관상동맥 결찰술에 대한 기존 프로토콜은 삽관, 인공호흡 및 흉부의 넓은 개방을 포함하며, 이는 기술적으로 어렵고 시간이 많이 걸립니다. 지난 몇 년 동안 관상동맥 결찰술에 대한 다양한 프로토콜이 보고되었으며 MI의 확립을 어느 정도 강화했습니다<.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

저자는 공개할 것이 없습니다.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

이 연구는 중국 국립 자연 과학 재단 (81930007, 81625002, 81800307, 81470389, 81500221, 81770238), 상하이 우수 학술 지도자 프로그램 (18XD1402400), 상하이시 과학 기술위원회 (201409005200), 상하이 푸장 인재 프로그램 (2020PJD030) 및 중국 박사후 과학 재단 (2020M671161, BX20190216)의 보조금으로 지원되었습니다.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
2,3,5-Triphenyltetrazolium chlorideSIGMAT8877-25GTTC 염색
4-0 실크 봉합YUANKANG4-0수술 기구
히라야마HVE-50살균
Qinghai Pharmaceutical FACTORY Co., Ltd.수술 후 통증을 줄이기H10940181
원심분리 튜브Biological Hope1850-K15ML
제모 크림ZIKER BIOTECHNOLOGYZK-L2701실험실 동물용 제모제
겸자RWDF12028수술 기구
가스 필터ZHAOXINSA-493작업자 보호
IsofluraneRWD20071302마취에 사용
광원베이징 PDVLG-150B작동 램프
마이크로 모기 지혈FST13011-12수술 기구
바늘BINXIONG42180104수술 기구
바늘 및 6-0 실크 봉합JIAHESC086수술 기구
바늘 홀더ShangHaiJZJ32030수술 기구
바늘 홀더ShangHaiJZJ32010수술 기구
포비돈-요오드 면봉SingleLadyGB26368-2010피부 소독
가위CNSTRONGJYJ1030수술 기구
멸균 아이 크림Shenyang Xingqi Pharmaceutical Co., Ltd.H10940177 각막 건조를 예방:
작은 동물을 위한 초고해상도 초음파 영상 시스템VisualSonicsVevo 2100심초음파 분석
사 고형 부프레노르핀 용 사 합니다, ,

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Fu, Y., et al. A simple and efficient method for in vivo cardiac-specific gene manipulation by intramyocardial injection in mice. Journal of Visualized Experiments. (134), e57074(2018).
  2. Pell, S., Fayerweather, W. E.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Myocardial InfarctionCoronary Artery LigationMouse MI ModelVentricular RemodelingTTC StainingPost MI RemodelingContractile DysfunctionEchocardiographic AssessmentCardiac RuptureIntramyocardial Injection

Related Articles