여기에서, 우리는 향상된 화학탁증 분석 프로토콜을 제시합니다. 이 프로토콜의 목표는 전통적인 세균 화학 요법 방법의 단계와 비용을 줄이고 식물 미생물 상호 작용을 이해하는 데 중요한 자원역할을하는 것입니다.
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이 논문에서
요약
초록
화학 요법 식별은 뿌리 권 성장 촉진 박테리아의 연구 및 응용 프로그램에 매우 중요합니다. 간단한 단계를 통해 멸균 유리 슬라이드에서 뿌리 부속성 성장 촉진 박테리아의 화학적 움직임을 유도할 수 있는 화학 물질을 신속하게 식별하는 간단한 방법을 확립했습니다. 박테리아 용액(OD600 = 0.5) 및 멸균 화학 요법 수성 용액은 1cm 간격으로 유리 슬라이드에 드롭와이즈를 첨가하였다. 항분 루프는 화학 요법 수성 용액을 세균 용액에 연결하는 데 사용되었습니다. 슬라이드는 깨끗한 벤치에서 20 분 동안 실온에서 보관되었습니다. 마지막으로, 항암제 수성 용액은 세균계 수분 및 현미경 관찰을 위해 수집되었다. 이 연구에서는 실험 결과의 여러 비교를 통해, 방법은 전통적인 세균성 화학 요법 방법의 여러 단점을 극복. 이 방법은 플레이트 계수의 오류를 줄이고 실험 주기를 단축시켰다. 화학 물질의 식별을 위해,이 새로운 방법은 기존의 방법에 비해 2-3 일을 절약 할 수 있습니다. 추가적으로, 이 방법은 어떤 연구원든지 체계적으로 1-2 일 안에 세균성 화학 요법 실험을 완료하는 것을 허용합니다. 프로토콜은 식물 세균 상호 작용을 이해하기 위한 귀중한 자원으로 간주될 수 있습니다.
서론
화학 요법은 뿌리에 식물 성장 촉진 뿌리 균 (PGPR)의 식민지화에 중요 하고 식물-미생물 상호 작용을 이해 1. 식물 뿌리 에서 저분자 화합물 (화학 요법제)의 클래스는 뿌리 부각에 PGPR의 화학 운동을 유도2. 말산, 구연산 및 뿌리 의 다른 성분은 바실러스 균주의 화학 을 자극3. 예를 들어, 옥수수 뿌리에서 포도당, 구연산 및 fumaric 산은 뿌리 표면에 박테리아를 모집4. D-갈라콘토제는 뿌리 에서 유래되어 바실러스 벨레젠시스 SQR95의 화학요법을 유도한다. 유기 산, fumarate를 포함 하 여, 기이 한 산, 그리고 간결, 화학 요법및 카자누스 카잔에서 다양 한 PGPR의 식민지에 영향을 - 제아는 교차 크롭 시스템 6 수 있습니다. 쌀 뿌리에서 올레아놀산은 변속, 변형 FP357에 대한 화학 작용의 역할을 한다. 다른 식물 이출 (히스티딘 포함, 아르기닌, 및 아스파르타트) 박테리아의 화학 반응에 중요 한 역....
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프로토콜
1. 재료 및 장비
참고: 바실러스 알티투디니스 LZP02 (CP075052)는 이 연구를 위해 중국 북동부의 쌀 의 뿌리부로부터 분리되었다12,13.
- 문화 B. 알티투디니스 LZP02 에서 루리아-베르타니 (LB) 매체 (펩톤, 10 g L-1; NaCl, L-1 및 효모 추출물 8g, L-1 5g) 10시간. 4°C에서 2분 동안 9,569 x g 에서 원심분리로 세포를 수집하고 -80°C에서 15% 글리세롤로 보관합니다.
참고: 이 실험을 위해, 쌀 씨앗 (Oryza sativa Longgeng 46) 농업 과학의 헤이룽장 아카데미의 쌀 연구소에 의해 제공 되었다.
2. 루트 이출의 컬렉션
- 성장 챔버에 쌀 씨를 무작위로 분배합니다.
참고: 쌀 씨앗은 30분 동안 30% H2O2로 살균되었고 하룻밤 사이에 물에 담....
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결과
총 584 및 937 알려진 대사 산물은 각각 양성 및 음의 이온 지수에서 검출되었다. 이전 연구에 따르면 화학 요법은 일반적으로 유기산, 아미노산 및 탄수화물17,18입니다.
본 연구에서는, 쌀 뿌리줄기에서 LC-MS 연구에서 16종류의 화학요법제가 후속 실험(표 1)을 위해 선택되었다. 수영 플레이트 방법을 사용하여, 우리는 rhizospheric B. altitudinis LZP02의 유치에 대한 뿌리에 의해 분비 된 저분자 화합물을 선별. 상이한 화학요법제의 강점을 비교하기 위해, 상기 대조군에 대한 평균 치료균의 비율을 나타내는 화학사지수(RCI)가 도입되었다19. RCI가 높을수록 화학 요법에 대한 강한 반응을 나타냅니다. 그 결과, 100 μM 구연산(RCI = 2.34) 및.......
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토론
증가 연구는 식물 박테리아 상호 작용이 주로 뿌리 에서 발생 하 고 루트 exudates20,21,22,23,24에 의해 영향을 나타냅니다. 식물 뿌리 이출은 페놀산, 유기산 및 아미노산뿐만 아니라 더 복잡한 이차 화합물25,26,27을 포함한 다양한 원발성 대사 산물을 포함한다. 각 박테리아에 대 한, 특정 물질 은 뿌리 줄기 권에서 모집 효과 발산 하는 것으로 나타났습니다. 이 연구 분야에서, 문학에서 보고 된 화학 요법 방법의 많은 매우 분석 의존. 다양한 접근 방식에 .......
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공개 사항
저자는 공개 할 것이 없습니다.
감사의 글
이 작품은 중국 국립자연과학재단(31870493, 중국 헤이룽장의 주요 연구개발 프로젝트(GA21B007), 중국 헤이룽장성 대학의 기초연구료(제1호 135409103)가 지원했다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 2,5-디하이드록시벤조산 | , 베이징, 이노켐, 사이언스, & 기술 : C., Ltd. | 490-79-9 | |
| 아세토니트릴 | CNW Technologies | 75-05-8 | |
| 암모늄 아세테이트 | CNW Technologies | 631-61-8 | |
| 카페인 산 | Beijing InnoChem Science & 기술 : C., Ltd. | 331-39-5 | |
| 원심분리기 | Thermo Fisher Scientific | Heraeus Fresco17 | |
| 구연산 | Beijing InnoChem Science & 기술 : C., Ltd. | 77-92-9 | |
| 클린 벤치 | Shanghai Boxun Industrial Co., Ltd. | BJ-CD | |
| 페룰산 | 베이징 이노켐 사이언스 & 기술 : C., Ltd. | 1135-24-6 | |
| 포름산 | CNW Technologies | 64-18-6 | |
| 과당 | 베이징 InnoChem 과학 및 기술 : C., Ltd. | 57-48-7 | |
| Galactose | Beijing InnoChem 과학 및 기술 : C., Ltd. | 59-23-4 | |
| 글리신 | 베이징 이노켐 과학 & 기술 : C., Ltd. | 56-40-6 | |
| 그라인딩 밀 | 상하이 Jingxin Industrial Development Co., Ltd. | JXFSTPRP-24 | |
| 히스티딘 | 베이징 이노켐 과학 & 기술 : C., Ltd. | 71-00-1 | |
| 내부 표준 : 2-클로로 -L- 페닐알라닌 | 상하이 Hengbai Biotech C., Ltd. | 103616-89-3 | |
| Leucine | Beijing InnoChem 과학 및 기술 : C., Ltd. | 61-90-5 | |
| 말산 | 베이징 이노켐 과학 & 기술 : C., Ltd. | 6915-15-7 | |
| Mannose | 베이징 InnoChem 과학 & 기술 : C., Ltd. | 3458-28-4 | |
| 질량 분석기 | Thermo Fisher Scientific | Q Exactive Focus | |
| 메탄올 | CNW Technologies | 67-56-1 | |
| 광학 현미경 | Olympus | BX43 | |
| 페닐알라닌 | Beijing InnoChem Science & 기술 : C., Ltd. | 63-91-2 | |
| 프롤린 | 베이징 이노켐 과학 & 기술 : C., Ltd. | 147-85-3 | |
| 저울 | Sartorius | BSA124S-CW | |
| Serine | Beijing InnoChem Science & 기술 : C., Ltd. | 56-45-1 | |
| 트레오닌 | 베이징 이노켐 과학 & 기술 : C., Ltd. | 72-19-5 | |
| UHPLC | 애질런 | 1290 UHPLC | |
| 초음파 기기 | Shenzhen Leidebang Electronics Co., Ltd. | PS-60AL | |
| 발린 | 베이징 이노켐 과학 & 기술 : C., Ltd. | 7004-03-7 |
참고문헌
- Belas, R. Biofilms, flagella, and mechanosensing of surfaces by bacteria. Trends in Microbiology. 22 (9), 517-527 (2014).
- Haichar, Z., Santaella, C., Heulin, T., Achouak, W. Root exudates mediated interactions belowground. Soil Biology and Biochemistry. 77....
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