Nous décrivons ici une méthode simple et reproductible qui peut induire un infarctus du myocarde ou une lésion d’ischémie-reperfusion myocardique chez la souris par ligature de précision de l’artère coronaire descendante antérieure gauche par micromanipulation.
L’infarctus aigu du myocarde est une maladie cardiovasculaire fréquente avec une mortalité élevée. La lésion de reperfusion myocardique peut contrecarrer les effets bénéfiques de la refusion cardiaque et induire une lésion myocardique secondaire. Un modèle simple et reproductible d’infarctus du myocarde et d’ischémie-reperfusion myocardique est un bon outil pour les chercheurs. Ici, une méthode personnalisable pour créer un modèle d’infarctus du myocarde (IM) et MIRI par ligature de précision de l’artère coronaire descendante antérieure gauche (LAD) par micromanipulation est décrite. Le positionnement précis et reproductible de la ligature du LAD permet d’obtenir des résultats cohérents pour les lésions cardiaques. Les modifications apportées au segment ST peuvent aider à identifier la précision du modèle. Le taux sérique de troponine T cardiaque (cTnT) est utilisé pour évaluer la lésion myocardique, l’échographie cardiaque est utilisée pour évaluer la fonction systolique myocardique et la coloration au chlorure d’Evans-Blue/triphényltétrazolium est utilisée pour mesurer la taille de l’infarctus. En général, ce protocole réduit la durée de la procédure, assure une taille d’infarctus contrôlable et améliore la survie des souris.
L’infarctus aigu du myocarde (IAM) est une maladie cardiovasculaire courante dans le monde et entraîne une mortalité élevée1. Les progrès technologiques rendent la revascularisation précoce et efficace disponible pour les patients atteints d’IAM. Après ces traitements, chez certains patients, une lésion d’ischémie-reperfusion myocardique (IRMI) peut survenir2. Ainsi, il est d’une grande importance de comprendre les mécanismes d’action et comment améliorer l’IM/MIRI. Les souris sont largement utilisées comme modèles en raison de leur faible coût, de leur temps de reproduction rapide et de leur facilité à effectuer des modifications génétiques3. Les chercheurs ont développé différentes méthodes pour modéliser MIRI et MI chez l’animal 4,5,6,7,8,9. Cette stratégie favorise la recherche, mais les différents critères et méthodes utilisés compliquent l’interprétation des résultats entre les équipes de recherche.
Chez la souris, l’infarctus du myocarde a été induit par l’isoprotérénol10, la cryolésion 11,12 ou la cautérisation 13. L’infarctus du myocarde peut être facilement induit par l’isoprotérénol, mais le processus physiopathologique est différent de celui de l’infarctus du myocarde clinique. L’infarctus du myocarde induit par la cryolésion a une faible consistance, provoque des lésions myocardiques excessives autour de l’artère coronaire descendante antérieure gauche (LAD) et peut facilement induire une arythmie. L’infarctus du myocarde induit par la cautérisation est très différent du processus naturel de l’infarctus du myocarde, et la réaction inflammatoire dans la zone brûlante est plus intense ; De plus, l’approche chirurgicale présente des difficultés techniques. De plus, certains laboratoires14 développent un modèle d’IM chez les miniporcs en utilisant la méthode de blocage par ballonnet ou d’embolisation ou de thrombose par technique interventionnelle. Toutes ces méthodes peuvent provoquer directement une occlusion de l’artère coronaire, mais le fait de nécessiter des appareils de coronarographie et, surtout, les artères coronaires trop fines de la souris ne rend pas ces opérations pratiques. Pour MIRI, les différences entre les différents modèles étaient assez modestes, comme l’utilisation de respirateurs / micromanipulation ou non 5,6.
Ici, une méthode simple et fiable qui peut induire l’IM et le modèle MIRI, adapté des méthodesprécédemment publiées 4,5,6,7,8,9,15, est décrit. Cette méthode permet de simuler des processus physiopathologiques par blocage direct du LAD par ligature. De plus, en soulageant la ligature, ce modèle peut également simuler une lésion de reperfusion. Dans ce protocole, un microscope à dissection est utilisé pour la visualisation LAD. Ensuite, le chercheur peut facilement identifier le DAL. Par la suite, une ligature précise du LAD conduit à une occlusion sanguine et à une ischémie ventriculaire reproductibles et prévisibles. De plus, les modifications de l’électrocardiographie (ECG) peuvent être utilisées pour confirmer l’ischémie et la reperfusion en plus des changements de couleur du LAD observés au microscope. Cette stratégie permet de raccourcir la durée de la procédure, de réduire le risque de complications chirurgicales et de réduire le nombre de souris expérimentales nécessaires. Les méthodes de dosage de la troponine-T, d’échographie cardiaque et de coloration au chlorure de triphényltétrazolium (TTC) sont également décrites. Dans l’ensemble, ce protocole est utile pour les études du mécanisme MI/MIR, ainsi que pour la découverte de médicaments.
Au cours des dernières années, la création de modèles pour l’IM et l’IRMI dans la recherche clinique et scientifique s’est développée rapidement20,21. Cependant, il reste encore quelques questions, telles que les mécanismes d’action et la façon d’améliorer l’IM/MIRI, qui doivent être résolues. Ici, un protocole modifié pour l’établissement d’un modèle murin de l’IM et de l’IRMI est décrit. Plusieurs points clés doivent être ex…
The authors have nothing to disclose.
Ce travail a été soutenu par la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (82070317, 81700390 à Jibin Lin, 8210021880 à Bingjie Lv et 82000428 à Boyuan Wang) et le National Key R&D Program of China (2017YFA0208000 à Shaolin He).
0.9 % sodium chloride solution | Kelun Industry Group,China | – | |
4% paraformaldehyde fixing solution | Servicebio,China | G1101 | – |
4-0 silk suture | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products,China | C412 | – |
8-0 suture | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products,China | H801 | – |
Buprenorphine | IsoReag,China | IR-11190 | – |
Camera | Canon,Japan | EOS 80D | – |
Depilatory cream | Veet,French | – | |
Elecsys Troponin T hs STAT | Roche,Germany | – | |
Electrochemical luminescence immunoanalyzer | Roche,Germany | Elecsys 2010 | – |
Evans blue | Sigma,America | E2129 | – |
Eye scissors | Shanghai Medical Instruments,China | JC2303 | – |
Haemostatic forceps | Shanghai Medical Instruments,China | J31020 | – |
High frequency in vivo imaging systems | Visualsonics,Canada | Vevo2100 | – |
Ibuprofen | PerFeMiKer,China | CLS-12921 | – |
Intravenous catheter | Introcan,Germany | 4254090B | – |
Ketamine | Sigma-Aldrich,America | K2753 | – |
Medical alcohol | Huichang ,China | – | |
Microneedle holders | Shanghai Medical Instruments,China | WA2040 | – |
Microscopic shears | Shanghai Medical Instruments,China | WA1040 | – |
Microsurgical forceps | Shanghai Medical Instruments,China | WA3020 | – |
Mouse electrocardiograph | Techman,China | BL-420F | – |
Needle holders | Shanghai Medical Instruments,China | JC3202 | – |
operating floor | Chico,China | ZK-HJPT | – |
PE-10 tube | Huamei,China | – | |
Pentobarbital | Merck,America | 1030001 | – |
Rodent Ventilator | Shanghai Alcott Biotech,China | ALC-V8S-P | – |
Stereo microscope | Aomei Industry,China | SZM0745-STL3-T3 | – |
Surgical thermostatic heating pad | Globalebio, China | GE0-20W | – |
Triphenyltetrazolium chloride | Servicebio,China | G1017 | – |
Xylazine | Huamaike Biochemicals and Life Science Research Prouducts,China | 323004 | – |