Dieses Papier beschreibt die Ischämie-Reperfusion (I / R) -Modellierung in einem 3-tägigen Kükenembryo unter Verwendung eines angepassten Spinalnadelhakens, um die I / R-Entwicklung und -Behandlung besser zu verstehen. Dieses Modell ist einfach, schnell und kostengünstig.
Ischämie und Reperfusionsstörungen (I / R) wie Myokardinfarkt, Schlaganfall und periphere Gefäßerkrankungen sind einige der Hauptursachen für Krankheit und Tod. Derzeit stehen viele in vitro und in vivo Modelle zur Verfügung, um den I/R-Mechanismus in Krankheiten oder geschädigtem Gewebe zu untersuchen. Bisher wurde jedoch kein in ovo I / R-Modell berichtet, das ein besseres Verständnis der I / R-Mechanismen und ein schnelleres Drogenscreening ermöglichen würde. Dieses Papier beschreibt die I / R-Modellierung unter Verwendung eines an die Wirbelsäulennadel angepassten Hakens in einem 3-tägigen Kükenembryo, um die I / R-Entwicklungs- und Behandlungsmechanismen zu verstehen. Unser Modell kann verwendet werden, um Anomalien auf DNA-, RNA- und Proteinebene zu untersuchen. Diese Methode ist einfach, schnell und kostengünstig. Das aktuelle Modell kann unabhängig oder in Verbindung mit bestehenden in vitro und in vivo I/R-Modellen verwendet werden.
Ischämie-Reperfusion Gewebeverletzung wurde mit einer Reihe von Pathologien in Verbindung gebracht, darunter Herzinfarkte, ischämischer Schlaganfall, Trauma und periphere Gefäßerkrankungen1,2,3,4,5. Dies ist in erster Linie auf das Fehlen eines umfassenden Verständnisses des Krankheitsverlaufs und das Fehlen eines effektiven Forschungsmodells zurückzuführen. Eine ischämische Verletzung tritt auf, wenn die Blutversorgung eines bestimmten Bereichs des Gewebes unterbrochen wird. Infolgedessen nekrotisiert ischämisches Gewebe schließlich, obwohl die Rate je nach Gewebe variiert. Daher kann die Wiederherstellung der Blutversorgung dazu beitragen, den Schaden zu mildern. Es wurde jedoch in einigen Fällen beobachtet, dass die Reperfusion mehr Gewebeschäden verursacht als Ischämie allein6,7,8. Daher ist das Verständnis der molekularen und zellulären Mechanismen der Ischämie-Reperfusion erforderlich, um eine wirksame therapeutische Intervention zu entwickeln. Derzeit ist keine wirksame Behandlung von I/R-Verletzungen bekannt. Diese Diskrepanz hat zur Schaffung neuer experimenteller Modelle geführt, die von In-vitro– bis zu In-vivo-Modellen reichen, um das bestehende Problem anzugehen9,10,11,12,13.
Kükenembryonen (Gallus gallus domesticus) werden aufgrund ihrer leichten Zugänglichkeit, ethischen Akzeptanz, relativ großen Größe (im Vergleich zu anderen Embryonen), niedrigen Kosten und schnellen Wachstums häufig in der Forschung eingesetzt14. Wir verwendeten einen Kükenembryo nach 72 h Entwicklungszeit, um eine In-Ovo-I / R zu erzeugen, indem wir die rechte Vitellinarterie mit Hilfe einer Spinalnadel verschlossen und freisetzten. Wir nannten es das Hook-I/R-Ischämie-Reperfusionsmodell (Abbildung 1). Das in dieser Studie verwendete Modell ist in der Lage, alle nachgeschalteten Prozesse genau zu simulieren, einschließlich oxidativer und entzündlicher Signalwege, die häufig mit I/R-Schäden in Verbindung gebracht werden15,16,17.
Ziel der Ischämie-Reperfusionsforschung ist es, therapeutische Strategien zu entwickeln, die den Zelltod verhindern und die Genesung fördern29,30. Um die aktuellen Einschränkungen in der I/R-Forschung zu überwinden, haben wir ein Hook I/R-Kükenembryomodell entwickelt, um ein zuverlässiges und reproduzierbares I/R-Modell zu erstellen. Unseres Wissens nach ist unser Modell das erste I / R-Modell, das jemals in einem 3-tägigen Kükenembryo für routinemäßig…
The authors have nothing to disclose.
Wir möchten Hari Shankar für seine kritischen Beiträge während der Videografie und des Schnitts, Herrn Baqer Hussain für voice-over, Herrn Asghar Rizvi für den Videoschnitt, Herrn Mohammad Haider für Videodrehs, Herrn Mohammad Danish Siddiqui für die Unterstützung während der Experimente danken.
(-80°C) freezer | Haier, China | – | |
1.5mL Centrifuge tube | TARSONS, India | 500010X | |
100mm Petri dish (sterile) | Tarsons, India | 460050 | |
18G Needle (18G×1.5 (1.25×38mm) | Ramsons, India | 13990 | |
1mL Syringe | DISPO VAN | – | |
26G Needle (26G×1/2 (10.45x13mm) | DISPO VAN, india | 30722D | |
37°C egg incubator with adjustable percentage humidity | Gentek, India | GL-100 | |
37°C laboratory incubator | SCIENCE TECH, India | CB 101-14 | |
3-Methyladenine (3-MA) | Sigma Aldrich, USA | M9281 | |
3mL Pasture Pipette | TARSONS, India | 940050 | |
50mL Beaker | TARSONS, India | – | |
5mL Syringe | DISPO VAN, India | IP53 | |
70% ethanol | Merck Millipore, United States | 64-17-5 | |
Adhesive tape/Cello tape | Sunrise, India | – | |
Ambra1 primers | Applied Biosystems, Foster city, USA | Hs00387943_m1 | |
Anti-mouse IgG | Cell Signaling Technology, USA | 7076S | |
Anti-Rabbit IgG | Jackson Immuno Research Laboratories, USA | 711-035-152 | |
Atg7 | R&D Systems, USA | MAB6608 | |
Atg7 primers | Applied Biosystems, Foster city, USA | Hs00893766_m1 | |
Autoclave Bag | Tarsons, India | 550022 | |
Autoclave Machine | Local made, Lucknow, India | – | |
Beclin-1 | Proteintech, USA | 66665-1-Ig | |
Beta Actin | ImmunoTag, USA | ITT07018 | |
Bovine Serum Albumin | Himedia, Mumbai, India | TC194 | |
Calcium Chloride | Himedia, Mumbai, India | GRM534 | |
Catalase | ImmunoTag, USA | ITT5155 | |
Cleaning wipes | Kimberly-Clark, India | 370080 | |
Cleaved Caspase3 | ImmunoTag, USA | ITT07022 | |
di-Sodium hydrogen phosphate heptahydrate | Himedia, Mumbai, India | GRM39611 | |
Doppler blood flowmeter | Moors instrument, United Kingdom | moorVMS-LDF1 | |
Egg rack | – | – | |
Egg rack | – | – | |
GAPDH | ImmunoTag, USA | M1000110 | |
GAPDH primers | Applied Biosystems, Foster city, USA | Hs02758991_g1 | |
Glycine | Himedia, Mumbai, India | MB013 | |
Kidney tray | HOSPITO | – | |
LC3A/B | Cell Signaling Technology, USA | 4108S | |
Methanol | Rankem laboratories, Mumbai, India | M0252 | |
Micromanipulator | Narishige, Japan | M-152 | |
N-acetyl-L-cysteine (NAC) | Sigma Aldrich, USA | A7250 | |
Naringenin | Sigma Aldrich, USA | 67604-48-2 | |
NF-kβ | Thermo Fisher Scientific, USA | 51-0500 | |
NLRP3 | ImmunoTag, USA | ITT07438 | |
Nose plier | Local made, Lucknow, India | – | |
Ocular forceps | Stoelting, Germany | 52106-40 | |
Ocular iris | Tufft Surgical Instruments, Jaipur, India | Hard Age Vannas Micro Scissors Angled 8CM / 3 1/8" | |
OHP marker pen | Camlin, India | – | |
ORP-150 | ImmunoTag, USA | ITT08329 | |
Pointed sharp edge scissor | Stoelting, Germany | 52132-11 | |
Potassium Chloride | Himedia, Mumbai, India | MB043 | |
Potassium phosphate monobasic anhydrous | Himedia, Mumbai, India | MB050 | |
Protease Inhibitor | Abcam, United States | Ab65621 | |
SOD-1 | ImmunoTag, USA | ITT4364 | |
Sodium Chloride | Fisher Scientific, Mumbai, India | 27605 | |
Sodium dodecyl sulphate | Himedia, Mumbai, India | GRM886 | |
Spinal needle 25GA; 3.50 IN (90.51 X 90mm) | Ramson, India | GS-2029 | |
Stereo Zoom surgical microscope | Olympus, Japan | SZ2-STU3 | |
Syringe discarder | BIOHAZARD | 882210 | |
Toothed forceps | Stoelting, Germany | 52102-30 | |
Tris Base | G Biosciences, United States | RC1217 | |
Tris Hydrochloric Acid | Himedia, Mumbai, India | MB030 | |
Tween 20 | G Biosciences, United States | RC1227 | |
White Leghorn Chicken 0-day eggs | – | – | |
Z-Val-Ala-Asp(OMe)-FMK | MP Biomedicals, LLC, USA | FK009 |