이 논문은 I/R 개발 및 치료를 더 잘 이해하기 위해 척추 바늘 사용자 지정 후크를 사용하여 3 일 간의 병아리 배아에서 허혈 재관류 (I/R) 모델링을 설명합니다. 이 모델은 간단하고 빠르며 저렴합니다.
심근 경색, 뇌졸중 및 말초 혈관 질환과 같은 허혈 및 재관류 (I /R) 장애는 질병과 사망의 주요 원인 중 일부입니다. 많은 시험관 및 생체 내 모델은 현재 질병 또는 손상된 조직에서 I/R 메커니즘을 연구할 수 있습니다. 그러나, 현재까지 , Ovo I/R 모델에서 보고 되었습니다., I/R 메커니즘및 빠른 약물 스크리닝의 더 나은 이해를 허용 할 것 이다. 이 논문은 I/R 개발 및 치료 메커니즘을 이해하기 위해 3일 병아리 배아에서 척추 바늘 사용자 지정 후크를 사용하여 I/R 모델링을 설명합니다. 우리의 모형은 DNA, RNA 및 단백질 수준에 이상을 조사하기 위하여 이용될 수 있습니다. 이 방법은 간단하고 빠르며 저렴합니다. 현재 모델은 독립적으로 또는 기존 시험관 내 및 생체 내 I/R 모델과 함께 사용할 수 있습니다.
허혈 -재관 류 조직 부상은 심장 마비, 허혈성 뇌졸중, 외상 및 말초 혈관 질환을 포함한 여러 병리학에 연결되었습니다1,2,3,4,5. 이것은 주로 질병 진행의 포괄적인 이해의 부족 및 효과적인 연구 모형의 부족 때문입니다. 허혈성 상해는 조직의 특정 지역에 혈액 공급이 끊어질 때 생깁니다. 그 결과, 허혈성 조직은 결국 괴사, 속도는 조직에 따라 달라 집니다. 따라서 혈액 공급을 복원하면 손상을 완화하는 데 도움이 될 수 있습니다. 그러나, 어떤 경우에는, 그 재관류는 혼자 허혈보다 더 많은 조직 손상을 일으키는 것이 관찰되었습니다6,7,8. 따라서, 허혈-재퍼퓨전의 분자 및 세포 메커니즘을 이해하는 것은 효과적인 치료 적 개입을 개발하는 데 필요하다. 현재 I/R 부상에 대한 효과적인 치료법은 알려져 있지 않습니다. 이러한 차이로 인해 시험관 내부터 생체 내 모델에 이르는 새로운 실험 모델이 생성되어 기존 문제를 해결했습니다9,10,11,12,13.
병아리 배아 (갈루스 갈루스 국내)는 접근의 용이성, 윤리적 수용성, 상대적으로 큰 크기 (다른 배아에 비해), 저렴한 비용 및 급속한 성장14 때문에 연구에 널리 사용됩니다. 우리는 개발의 72 h에서 병아리 배아를 사용하여 척추 바늘의 도움으로 올바른 비텔린 동맥을 가리고 방출하여 오보 I / R에서 병아리 배아를 만들었습니다. 우리는 후크 I / R 허혈 재관전 모델 (그림 1)을 명명했습니다. 이 연구에서 활용되는 모델은 I/R 손상15,16,17과 자주 연관되는 산화 및 염증 경로를 포함한 모든 다운스트림 프로세스를 정확하게 시뮬레이션할 수 있습니다.
허혈 재퍼퓨전 연구의 목표는 세포 사멸을 방지하고 회복을 촉진하는 치료 전략을 만드는 것입니다29,30. I/R 연구에서 현재의 제약을 극복하기 위해 Hook I/R 병아리 배아 모델을 설계하여 신뢰할 수 있고 재현 가능한 I/R 모델을 생성했습니다. 우리의 지식에, 우리의 것은 이제까지 일상적인 I/R 실험을 위한 3 일 병아리 태아에서 만든 첫번째 I/R 모형입니다…
The authors have nothing to disclose.
우리는 비디오 그래피와 편집 중에 그의 중요한 입력에 대한 하리 샨카르에 대한 감사를 표현하고 싶습니다, 음성 해설에 대한 씨 Baqer 후세인, 비디오 촬영을위한 씨 아슈가르 리즈비, 비디오 촬영을위한 씨 모하마드 하이더, 씨 모하마드 덴마크 시디키 실험 하는 동안 도움을.
(-80°C) freezer | Haier, China | – | |
1.5mL Centrifuge tube | TARSONS, India | 500010X | |
100mm Petri dish (sterile) | Tarsons, India | 460050 | |
18G Needle (18G×1.5 (1.25×38mm) | Ramsons, India | 13990 | |
1mL Syringe | DISPO VAN | – | |
26G Needle (26G×1/2 (10.45x13mm) | DISPO VAN, india | 30722D | |
37°C egg incubator with adjustable percentage humidity | Gentek, India | GL-100 | |
37°C laboratory incubator | SCIENCE TECH, India | CB 101-14 | |
3-Methyladenine (3-MA) | Sigma Aldrich, USA | M9281 | |
3mL Pasture Pipette | TARSONS, India | 940050 | |
50mL Beaker | TARSONS, India | – | |
5mL Syringe | DISPO VAN, India | IP53 | |
70% ethanol | Merck Millipore, United States | 64-17-5 | |
Adhesive tape/Cello tape | Sunrise, India | – | |
Ambra1 primers | Applied Biosystems, Foster city, USA | Hs00387943_m1 | |
Anti-mouse IgG | Cell Signaling Technology, USA | 7076S | |
Anti-Rabbit IgG | Jackson Immuno Research Laboratories, USA | 711-035-152 | |
Atg7 | R&D Systems, USA | MAB6608 | |
Atg7 primers | Applied Biosystems, Foster city, USA | Hs00893766_m1 | |
Autoclave Bag | Tarsons, India | 550022 | |
Autoclave Machine | Local made, Lucknow, India | – | |
Beclin-1 | Proteintech, USA | 66665-1-Ig | |
Beta Actin | ImmunoTag, USA | ITT07018 | |
Bovine Serum Albumin | Himedia, Mumbai, India | TC194 | |
Calcium Chloride | Himedia, Mumbai, India | GRM534 | |
Catalase | ImmunoTag, USA | ITT5155 | |
Cleaning wipes | Kimberly-Clark, India | 370080 | |
Cleaved Caspase3 | ImmunoTag, USA | ITT07022 | |
di-Sodium hydrogen phosphate heptahydrate | Himedia, Mumbai, India | GRM39611 | |
Doppler blood flowmeter | Moors instrument, United Kingdom | moorVMS-LDF1 | |
Egg rack | – | – | |
Egg rack | – | – | |
GAPDH | ImmunoTag, USA | M1000110 | |
GAPDH primers | Applied Biosystems, Foster city, USA | Hs02758991_g1 | |
Glycine | Himedia, Mumbai, India | MB013 | |
Kidney tray | HOSPITO | – | |
LC3A/B | Cell Signaling Technology, USA | 4108S | |
Methanol | Rankem laboratories, Mumbai, India | M0252 | |
Micromanipulator | Narishige, Japan | M-152 | |
N-acetyl-L-cysteine (NAC) | Sigma Aldrich, USA | A7250 | |
Naringenin | Sigma Aldrich, USA | 67604-48-2 | |
NF-kβ | Thermo Fisher Scientific, USA | 51-0500 | |
NLRP3 | ImmunoTag, USA | ITT07438 | |
Nose plier | Local made, Lucknow, India | – | |
Ocular forceps | Stoelting, Germany | 52106-40 | |
Ocular iris | Tufft Surgical Instruments, Jaipur, India | Hard Age Vannas Micro Scissors Angled 8CM / 3 1/8" | |
OHP marker pen | Camlin, India | – | |
ORP-150 | ImmunoTag, USA | ITT08329 | |
Pointed sharp edge scissor | Stoelting, Germany | 52132-11 | |
Potassium Chloride | Himedia, Mumbai, India | MB043 | |
Potassium phosphate monobasic anhydrous | Himedia, Mumbai, India | MB050 | |
Protease Inhibitor | Abcam, United States | Ab65621 | |
SOD-1 | ImmunoTag, USA | ITT4364 | |
Sodium Chloride | Fisher Scientific, Mumbai, India | 27605 | |
Sodium dodecyl sulphate | Himedia, Mumbai, India | GRM886 | |
Spinal needle 25GA; 3.50 IN (90.51 X 90mm) | Ramson, India | GS-2029 | |
Stereo Zoom surgical microscope | Olympus, Japan | SZ2-STU3 | |
Syringe discarder | BIOHAZARD | 882210 | |
Toothed forceps | Stoelting, Germany | 52102-30 | |
Tris Base | G Biosciences, United States | RC1217 | |
Tris Hydrochloric Acid | Himedia, Mumbai, India | MB030 | |
Tween 20 | G Biosciences, United States | RC1227 | |
White Leghorn Chicken 0-day eggs | – | – | |
Z-Val-Ala-Asp(OMe)-FMK | MP Biomedicals, LLC, USA | FK009 |