원발성 섬모 운동장애의 일선 진단을 위한 고속 비디오 현미경 분석

요약

고속 비디오 현미경 분석은 비교적 수행하기 쉽고 빠르며 비용 효율적이며 숙련 된 손에는 원발성 섬모 운동 장애의 첫 번째 라인 진단을위한 상당히 신뢰할 수있는 도구로, 진단 및 중증 폐 질환 치료와 관련된 모든 센터에서 사용할 수 있어야합니다.

초록

원발성 섬모 운동 장애 (PCD)는 상염색체 열성 특성에서 주로 유전되는 선천성 장애입니다. 이 장애는 섬모의 움직임에 장애를 일으켜 점액 정리 (MCC)의 심각한 손상을 일으 킵니다. 진단되지 않았거나 너무 늦게 진단되면 기관지 확장증이 발생하고 나중에 폐에 심각한 손상을 입힐 수 있습니다. PCD를 진단하는 대부분의 방법은 시간이 많이 걸리고 이를 확립하기 위해 광범위한 경제적 자원이 필요합니다. 고속 비디오 현미경 분석 (HSVMA)은 체외에서 섬모를 때리는 살아있는 호흡기 세포를 시각화하고 분석하는 유일한 진단 도구입니다. 그것은 빠르고, 비용 효율적이며, 숙련 된 손에는 PCD의 진단 도구로 매우 신뢰할 수 있습니다. 또한, 투과 전자 현미경 (TEM)과 같은 고전적인 진단 조치는 형태 학적 변화가 없기 때문에 일부 돌연변이에는 적용되지 않습니다.

이 논문은 호흡기 상피 세포를 수집하는 과정, 표본의 추가 준비 및 HSVMA의 과정을 설명합니다. 우리는 또한 클리닉이 HSVMA를 수행 할 장비를 보유하지 않은 경우 저장 및 조사 장소로 이송하기 위해 영양 배지에 보관하여 브러시 된 세포를 무사히 유지하고 때리는 방법을 설명합니다. 또한 TEM으로 진단 할 수없는 다인 팔 중쇄 11 유전자 (DNAH11)에 돌연변이가있는 환자의 병리학 적 박동 패턴을 가진 비디오가 표시됩니다. 상기도의 감염으로 인한 결정적이지 않은 HSVMA의 결과뿐만 아니라 적혈구의 중첩으로 실패한 칫솔질. 이 기사를 통해 폐학 환자 및 희귀 폐 질환을 다루는 모든 부서가 PCD에 대한 일상적인 진단의 일환으로 HSVMA를 수행하거나 HSVMA 수행 전문 센터로 표본을 보내도록 권장하고자합니다.

서론

원발성 섬모 운동 장애 (PCD)는 드물게 유전 적 유전 질환으로 섬모를 때리는 운동에 장애를 일으 킵니다. 진단되지 않으면 MCC의 심각한 손상으로 인해 나중 심각한 폐 손상을 일으 킵니다. 과거에는 유병률이 1 : 4,000에서 50,000 사이로 추정되었습니다. 꾸준히 진단이 개선되고 상태에 대한 인식이 높아짐에 따라 PCD의 보급에 대한 업데이트는 PCD가 훨씬 더 일반적이며 아마도 ^{1,2 대신 1} : 4,000에서 20,000의 범위 일 수 있음을 시사합니다. 그러나 PCD 환자는 여전히 과소 진단되거나 너무 늦게 진단됩니다 ^1,3. 따라서 선천성 시투스 내성 및 / 또는 이종 택시 또는 주산기 비루, 신생아 호흡 곤란, 코 막힘 및 수유 장애가있는 유아는 PCD의 용의자가되어야합니다. 후기에는 만성 중이염, 재발 성 폐렴, 비부비동염 및 MCC 장애로 인한 만성적이고 전형적인 습식 기침이 기관지 확장증 및 폐 기능 장애와 함께 성인기까지 계속되는 PCD의 특징적인 증상입니다².

PC....

프로토콜

윤리 선언문:

이 연구는 지역 윤리위원회 (69 / 2017)의 승인을 받았으며 헬싱키 선언에 따라 수행되었습니다.

1. 호흡기 상피 세포의 수집 및 수송

1. 솔 질
   1. 칫솔질하기 전에 환자에게 아목시실린-클라불란산을 경구 투여하여 섬모 기능을 방해하는 생물막을 박멸하십시오. 항생제가 절차 2 일 전에 종료되었는지 확인하십시오.
   2. 닦은 상피 세포 스트립에 점액 물질이 오버레이되는 것을 줄이려면 환자에게 코를 완전히 날려 버리도록 요청하십시오. 부모들에게 어린 자녀들이 코를 불 수 있도록 도와달라고 부탁한다.
   3. 칫솔질의 경우 0.6mm 크기의 치간 브러시를 사용하십시오 ( 재료 표 참조). 환자의 머리를 한 손으로 고정시키고 다른 한 손으로 양쪽 콧구멍의 열등한 터비네이트를 닦아 충분한 상피 세포 스트립을 수집하십시오.
      참고 : 치간 브러시를 열등한 잔디 아래에 깊이 삽입 할 때 약간의 저항이 일반적으로 발생합니다. 비강 칫솔질은 약 2 초 동안 빠른 회전과 따기로 수행됩니다. 길고 강렬한 칫솔질은 심한 상피 손상과 연속적인 상피 융기를 유발할 수 있습니다.
   ....

결과

비디오 1 및 비디오 2는 CBF 및 CBP가 정상 범위에 있는 정상 제어를 보여줍니다(그림 1 참조). 비디오 3, 비디오 4, 비디오 5 및 비디오 6은 DNAH11 유전자에서 동형접합성 돌연변이를 갖는 PCD 환자의 두 사례를 나타낸다(c.2341G > A; p. Glu781Lys)³. 이 대표적인 영상은 DNAH11 유전자의 돌연변이 표현형이 형태학적 변화 ^3,4,5의 부재로 인해 TEM에 의해 진단될 수 없기 때문에 주목할 만하기 때문에

토론

여기서, HSVMA를 이용한 PCD에 대한 진단 프로세스는 일차 진단에 비추어 설명되고 논의된다. 비교적 쉽게 수립할 수 있고, 비용 효율적이며(¹¹), 숙련된 손(¹²)에서 신뢰할 수 있는 방법임에도 불구하고, HSVMA는 함정이 없는 진단 수단이 아니다. 비정상적인 CBF 및 CBP는 이차 감염으로 인해 기관지 호흡기 상피(¹⁵)의 염증을 유발할 수 있으며, 같은 이유로 흡연자는 비정상적인 박동 빈도(^16,17)를 가질 수 있다. 또한, 낭포성 섬유증은 PCD의 진단을 확립하기 전에 배제되어야한다. 환자 샘플의 분석이 PCD와 호환되는 것으로 판단되기 전에 독립적으로 수집 된 두 개의 샘플로 비정상적인 결과를 확인해야하며 새로운 칫솔질과 CBF 및 CBP의 재분석이 필요합니다. 이것은 특히 어린.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Amoxiciline-clavulanic acid	Orion Oyj		40 mg/kg을 2회 용량/일로 나누고, 성인용 875/125 mg 1정 x2/일
카메라 소프트웨어	Hamamatsu		HCI 이미지
보존 및 운송을 위한	콜드 팩	미
분 간섭 현미경	Carl Zeiss		반전, 세포 관찰 현미경
Digitial High 스피드 비디오 카메라	Hamamatsu		Orca Flash 4.0, 디지털 카메라 유형 C11440
Dulbecco´ s Modified Eagle Medium	Thermo Fisher	10565018	기저 세포 배양 배지
Eppendorf 튜브	Eppendorf	30120086	1.5 mL 튜브
유리 바닥 마이크로웰 접시	현미경 검사용	MatTek	P35G-1.5-14-C
가열 장치	Carl Zeiss/PeCon	810-450001	Carl Zeiss 배양 엘리먼트 PeCon TempModule S1 온도 제어
치간 브러시 0.6 mm	Doft	872267	재사용 가능한 핸들과 캡이 있는 긴 와이어에 달린 치간 브러시 지퍼백에 Objective
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