Summary

Los jerbos mongoles como modelo animal de curación de heridas

Published: January 06, 2023
doi:

Summary

Este artículo describe un nuevo modelo animal desarrollado para estudiar la anatomía e histología de la córnea y sus procesos de curación. Este nuevo modelo animal utiliza el jerbo mongol, que tiene una córnea con muchas similitudes con la córnea humana.

Abstract

Los estudios de cicatrización de heridas corneales se han realizado durante mucho tiempo y han ayudado a reducir el sufrimiento y desarrollar tratamientos que contribuyen a mejorar la salud ocular de los pacientes. Históricamente, la curación corneal se ha estudiado en roedores como ratones y ratas, pero estos modelos podrían no imitar completamente los trastornos humanos. Sin embargo, la información sobre otros roedores como el jerbo mongol (Meriones unguiculatus) es escasa en la investigación corneal.

Aquí, describimos una técnica para desarrollar un nuevo modelo animal para estudiar la curación corneal después de la queratectomía fotorrefractiva. Debido a la limitada literatura disponible sobre la córnea de M. unguiculatus, también describimos un análisis histológico de la córnea normal. Estas técnicas de investigación también se pueden emplear en el estudio de enfermedades oculares debido a la similitud entre las córneas de los jerbos mongoles y los humanos en términos de genética, anatomía y fisiología.

Introduction

Algunos de los aspectos más importantes de la cicatrización de heridas corneales, que son preocupaciones clave para la cirugía del segmento anterior, son la integridad de la arquitectura epitelial, el mantenimiento de la transparencia del estroma corneal y, finalmente, el resultado en términos de las propiedades refractivas de la córnea1.

La córnea es el tejido transparente más externo en la parte frontal del globo ocular y, por lo tanto, es susceptible a traumatismos, infecciones y quemaduras; El deterioro de la cicatrización de estas heridas puede comprometer la salud visual2.

En la actualidad, se dispone de varios modelos animales para estudiar la curación corneal, y algunos de ellos son mejores que otros, dependiendo de la especie y del tipo de mecanismo a estudiar1. Hay algunos registros de investigaciones previas sobre la retina de jerbos2. Sin embargo, hasta el momento, no hay literatura publicada sobre los procesos de cicatrización en la córnea de estos roedores.

Aquí, presentamos Meriones unguiculatus (jerbo mongol) como un modelo animal de cicatrización de heridas en la córnea. Se describen los procedimientos para obtener la cicatrización corneal después de la queratectomía fotorrefractiva, que nos permiten estudiar los diferentes tipos de procesos de cicatrización corneal, comprender la cicatrización de heridas en términos de las fases dinámicas del tejido vivo y, finalmente, planificar tratamientos futuros apropiados3. La queratectomía fototerapéutica es una técnica altamente reproducible con la posibilidad de controlar con precisión parámetros como la profundidad y el diámetro de la lesión corneal4. Además, esta técnica no requiere procedimientos con instrumentos quirúrgicos o soluciones químicas (por ejemplo, solución salina, formalina, alcohol, etc.) que puedan agregar variables específicas de los instrumentos o del operador que realiza el procedimiento5.

Tres jerbos machos de 6 meses de edad de tamaños y pesos similares (aproximadamente 90 g) se utilizaron para el experimento presentado en este artículo. Los procedimientos solo se realizaron en los ojos derechos. Un jerbo (denominado jerbo 1 o control) no se sometió a queratectomía fototerapéutica y se enucleó para evaluar todas las estructuras oculares normales. La queratectomía fototerapéutica consiste en la administración controlada de luz ultravioleta generada por láser excimer a la córnea y fue desarrollada para realizar cirugía refractiva6. Se ha utilizado en otros roedores, como ratones7. Los otros dos jerbos fueron sometidos a queratectomía fototerapéutica. Uno de ellos fue enucleado a las 24 h (denominado jerbo 2) y el otro a las 96 h después de la cirugía (denominado jerbo 3).

Para realizar este experimento, se filmó un jerbo seleccionado al azar para cada condición a estudiar, pero este experimento se realizó previamente con 16 jerbos en total para cada condición. Por razones de edición, se decidió usar un jerbo seleccionado al azar para cada condición (tres jerbos en total) como ejemplo.

El objetivo principal de esta investigación es explorar el mejor modelo animal disponible. Sin embargo, es importante señalar que no todas las especies tienen características oculares similares a las del ojo humano8. Este artículo describe la metodología utilizada para estudiar la córnea de Meriones unguiculatus y el procedimiento realizado para generar la lesión corneal, que nos permite estudiar el proceso de cicatrización.

Protocol

Todos los procedimientos de investigación fueron aprobados por la “Comisión Institucional para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio” de la Universidad Católica de Córdoba y siguieron la Guía del Consejo Nacional de Investigaciones para el cuidado y uso de animales de laboratorio. Estos procedimientos también fueron aprobados por las autoridades de la Facultad de Ciencias de la Salud de la Universidad Católica de Córdoba y el Instituto de la Visión Cerro. 1. Manejo de jerb…

Representative Results

En el presente estudio, toda la estructura corneal fue analizada minuciosamente utilizando técnicas histológicas y estudios complementarios del segmento anterior, como la tomografía de coherencia óptica. El análisis de imagen mediante tomografía de coherencia óptica de las estructuras del segmento anterior muestra un epitelio y estroma normales (Figura 1), con espesores corneales centrales y periféricos de 160 μm y 106 μm ± 2 μm, respectivamente. Otras publicaciones también han …

Discussion

La fisiología de la cicatrización de heridas corneales es un equilibrio entre la regeneración de tejidos y el mantenimiento de la homeostasis. La cicatrización excesiva de heridas puede provocar fibrosis y cicatrización, lo que en última instancia puede resultar en la pérdida de la función del órgano. Con la rápida evolución de los procedimientos quirúrgicos corneales, la importancia de comprender la cicatrización de heridas corneales y los eventos fisiológicos y patológicos involucrados no puede ser sobre…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Queremos agradecer al ingeniero Rodrigo de la Fuente por su inestimable ayuda y apoyo técnico. También agradecemos a María Eugenia Corbela por la narración y a Priscilla Hazrún por la edición de las figuras. Hugo Luján nos permitió utilizar las instalaciones del Centro de Investigación y Desarrollo en Inmunología y Enfermedades Infecciosas (CIDIE).

Materials

Anesthesia Tododrogas
Eppendorf tubes Tododrogas
Excimer Laser Technolas 2022445
Fluorescein Poen
Forceps Ofcor 3339
Formaldehyde Tododrogas
Gloves Tododrogas
Ketamine  Sigma-Aldrich
Optical coherence tomography Optovue 659007
Proparacaine Poen
Scisors Ofcor 3336
Sterile drapes Soporte hospitalario
Sterile gauzes Soporte hospitalario
Syringes and needles Tododrogas
Xylazine  Sigma-Aldrich 

References

  1. Kuo, I. C. Corneal wound healing. Current Opinion in Ophthalmology. 15 (4), 311-315 (2004).
  2. Agrawal, V. B., Tsai, R. J. Corneal epithelial wound healing. Indian Journal of Ophthalmology. 51 (1), 5-15 (2003).
  3. Lu, L., Reinach, P. S., Kao, W. W. Corneal epithelial wound healing. Experimental Biology and Medicine. 226 (7), 653-664 (2001).
  4. Rathi, V. M., Vyas, S. P., Sangwan, V. S. Phototherapeutic keratectomy. Indian Journal of Ophthalmology. 60 (1), 5-14 (2012).
  5. Baumeister, M., Bühren, J., Ohrloff, C., Kohnen, T. Corneal re-epithelialization following phototherapeutic keratectomy for recurrent corneal erosion as in vivo model of epithelial wound healing. Ophthalmologica. 223 (6), 414-418 (2009).
  6. Fagerholm, P. Phototherapeutic keratectomy: 12 years of experience. Acta Ophthalmologica Scandinavica. 81 (1), 19-32 (2003).
  7. Mohan, R. R., Stapleton, W. M., Sinha, S., Netto, M. V., Wilson, S. E. A novel method for generating corneal haze in anterior stroma of the mouse eye with the excimer laser. Experimental Eye Research. 86 (2), 235-240 (2008).
  8. Shah, D., Aakalu, V. K. Murine corneal epithelial wound modeling. Methods in Molecular Biology. 2193, 175-181 (2021).
  9. Zorio, D. A. R., et al. De novo sequencing and initial annotation of the Mongolian gerbil (Meriones unguiculatus) genome. Genomics. 111 (3), 441-449 (2019).
  10. Kalha, S., Kuony, A., Michon, F. Corneal epithelial abrasion with ocular burr as a model for cornea wound. Journal of Visualized Experiments. (137), e58071 (2018).
  11. Yang, S., et al. The electroretinogram of Mongolian gerbil (Meriones unguiculatus.): Comparison to mouse. Neuroscience Letters. 589, 7-12 (2015).
  12. Baker, A. G., Emerson, V. F. Grating acuity of the Mongolian gerbil (Meriones unguiculatus). Behavioural Brain Research. 8 (2), 195-209 (1983).
  13. Govardovskii, V. I., Röhlich, P., Szél, A., Khokhlova, T. V. Cones in the retina of the Mongolian gerbil, Meriones unguiculatus: An immunocytochemical and electrophysiological study. Vision Research. 32 (1), 19-27 (1992).
  14. Zanandréa, L. I., Oliveira, G. M., Abreu, A. S., Pereira, F. E. Ocular lesions in gerbils (Meriones unguiculatus) infected with low larval burden of Toxocara canis: Observations using indirect binocular ophthalmoscopy. Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical. 41 (6), 570-574 (2008).
  15. Cheng, S., et al. Enhancement of de novo sequencing, assembly and annotation of the Mongolian gerbil genome with transcriptome sequencing and assembly from several different tissues. BMC Genomics. 20 (1), 903 (2019).
  16. Henriksson, J. T., McDermott, A. M., Bergmanson, J. P. Dimensions and morphology of the cornea in three strains of mice. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 50 (8), 3648-3654 (2009).
  17. Panagiotopoulos, M., Gan, L., Fagerholm, P. Stroma remodelling during healing of corneal surface irregularities induced by PTK. Acta Ophthalmologica Scandinavica. 85 (4), 387-394 (2007).
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Cite This Article
Osaba, M., Gonzalez Castellanos, J. C., Sambuelli, G. M., Reviglio, V. E. Mongolian Gerbils as an Animal Model of Wound Healing. J. Vis. Exp. (191), e63323, doi:10.3791/63323 (2023).

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