이 프로토콜은 변형 된 동맥 해부학 전략에 초점을 맞춘 마우스 신장 이식의 새로운 수술 기술을 제시합니다. 간단하고 안전한 요관-방광 해부학 방법을 포함하는 혈관 봉합 기술도 제시된다. 이러한 변형은 수술 시간을 단축시키고 마우스 신장 이식 절차의 성공률을 향상시킵니다.
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방법 논문
마우스의 신장 이식을위한 수정 된 수술 기술
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이 논문에서
요약
초록
생쥐의 신장 이식은 복잡하고 도전적인 수술 절차입니다. 이 작업의 핵심 단계를 보여주는 간행물은 거의 없습니다. 따라서이 기사에서는 기술을 소개하고이 수술과 관련된 수술주의 사항을 지적합니다. 또한, 종래의 절차와 비교하여 중요한 변형이 입증된다. 첫째, 복부 대동맥의 패치를 절단하고 요관 동맥을 포함한 신장 동맥의 근위 분기가 기증자 신장 en bloc 과 함께 횡단되도록 준비됩니다. 이것은 요관 괴사의 위험을 줄이고 요로 폐색의 발달을 피합니다. 둘째, 혈관 해부학의 새로운 방법이 신장 이식 재관류가 이미 시작된 후 운영자가 해부학의 크기를 유연하게 증가 또는 감소시킬 수 있음을 입증합니다. 이것은 혈관 협착과 복강 내 출혈의 발달을 피합니다. 셋째, 외상을 일으키지 않는 섬세한 공여체 요관과 수용자 방광의 해부학을 가능하게하는 기술이 표시됩니다. 이 프로토콜을 채택하면 수술 시간을 단축하고 수용자의 방광 손상을 줄일 수 있으므로 수용자 마우스의 수술 성공률이 크게 높아질 수 있습니다.
서론
Sakowitz 등은 1973 년에 처음으로 신장 이식의 마우스 모델을 개발한 이래로 1 년 이식 허혈성 손상 및 동종 면역 거부의 메커니즘을 연구하고 동종 이식편 생존을 연장하고 면역 관용을 달성하기위한 새로운 치료법을 개발하는 데 중요한 실험 도구로 입증되었습니다. 그러나 수술 기술은 복잡하고 매우 까다로운 것으로 입증되었으며, 때로는 전신 비 면역 학적 신장 이식 실패로 이어지는 혈관 해부학 적 협착2, 허혈로 인한 신부전 및 이식 된 요관의 후속 괴사로 인한 신부전, 이식 된 요관의 해부학 및 / 또는 수혜자의 소변 방광의 협착으로 인해 요로 유출의 중단으로 이어지는 합병증이 있습니다. 이 모든 것이 생쥐의 신장 이식이 더 이상 개발되지 않아 널리 사용되지 않는 이유입니다. 혈관 및 요로 합병증 없이 효과적이고 장기간 안정한 마우스 신장 이식 모델을 확립하는 것은 신장 면역 매개뿐만 아니라 감염성 질환에 초점을 맞춘 이식 분야의 많은 연구에서 여전히 대체할 수 없는 의미를 갖는다3. 또한, 폐, 심장 및 장 이식 4,5와 같은 뮤린 모델에서의 다른 장기 이식과 비교하여, 마우스 신장 이식
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프로토콜
모든 동물 실험은 과학적 목적으로 사용되는 동물 보호에 관한 유럽 의회의 지침 2010/63/EU의 지침에 따라 수행되었습니다 (동물 윤리 카드 : 식품 의약품 안전부의 니어 작센 부, #33.9-42502-04-11/0492). 멸균 수술 도구 및 소모품 (오토클레이브)을 사용하여 절차를 수행하고 수술 영역을 가능한 한 멸균 상태로 유지하십시오.
참고: C57BL/6J 수컷 마우스는 기증자 및 수혜자(syngeneic transplant model)로 사용되었고, Balb/c 마우스는 신장 동종이식편 수용자(급성 동종이식편 거부 모델9를 연구하기 위한 모델)로 사용되었다. 마우스는 8-12주 사이에 숙성되었고, 이식시 ∼25-30 g의 무게를 측정하고, 표준 조건 하에서 수용하였다. 이 원고에보고 된 데이터는 생쥐 수술 경험이 풍부한 네 명의 외과 의사에 의해 생성되었습니다.
1. 준비 단계
- 수술을 위해서는 마이크로 가위, 마이크로 포셉, 바늘 홀더, 미세 지혈 클램프 및 전기 수술 펜을 포함한 현미경 도구 세트를 사용하십시오. 7/0er, 10/0er 또는 4/0er 나일론 모노필라멘트를 사용하여 봉....
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결과
이식 4주 후, 변형된 기술 뿐만 아니라 종래의 기술 둘 다 천연 수용자 대측성 신장과 비교했을 때 신장 세뇨관 위축의 중간 징후 14,15를 나타내었다(도 1). 신장 세뇨관 위축의 정도는 두 가지 다른 기술 사이에 유의미한 차이가 없음을 보여주었습니다. 매슨 골드너의 삼색 염색 12주 후 신장의14,15개는 이식되지 않은 정상 신장과 비교했을 때 간질성 조직 섬유증의 명백한 징후를 균일하게 나타냈다(도 2).
우리는 이전에이 새로운 매듭없는 기술 (n = 175)의 결과를 조사하고 절차 및 수술 중 및 수술 후 합병증의 기술.......
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토론
마우스에서의 피부 이식 모델은 동종이면역 거부 사건을 연구하기 위해 간단하고 수행하기 쉬운 반면, 심장(16 ) 및 신장 이식(10 ) 후 동종암 관련 염증 변화를 보다 구체적으로 조사하기 위한 수술 기술은 복잡하고 매우 요구되는 것으로 입증되었다. 이식 신장 전문의의 관점에서 볼 때, 효과적이고 장기간 안정적인 마우스 신장 이식 모델의 확립은 많은 기능적 및 면역 학적 연구에서 여전히 대체 할 수없는 중요성을 가지고 있습니다. 또한, 다른 장기 이식과 비교하여, 마우스 신장 이식 모델은 주조직 적합성 항원의 특정 차이에도 불구하고 장기간 생존을 달성할 수 있으며, 이는 거부반응의 장기 개발 또는 동종이암 내성을 확립하기 위한 전제 인자의 동정 둘 다의 장기 개발에서 면역 조절 기작을 연구할 기회를 암시한다3.
앞서 설명한 바와 같이, 생쥐의 신장 이식.......
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감사의 글
우리는 Tiantian Bai 박사 팀이 음성 오버에 도움을 주신 것에 대해 감사 드리며, Mian Pao 양은 의료 일러스트레이션에 도움을 주신 것에 감사드립니다. 이 연구는 국제 협력 (AH에 HO2581 / 4-1)과 중국 국립 과학 재단 (NSFC; FJ에 #81760291)을 촉진하기 위해 독일 연구 재단 (DFG)에 의해 부분적으로 지원되었습니다.
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재료
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| CP Pharma | Tranquisol | ||
| P-Bepanthen 눈 연고 | Haus-Apotheke | PZN | 01578675-Bonn |
| 마이크로 펜치 | FST | 11083-07-Box | |
| 절연 및 산소 공급 장치용 | RUSKINN | INVIV-C57BL | |
| /6J 마우스 | 찰스 강. 독일 | 카탈로그 번호 없음 | - |
| Carprofen | Zoetis | Rimadyl 50 mg/ml | - |
| 카테터-FEP 26G | TERUMO | Surflo-W-Clip | |
| 애플리케이터 집게 스타일 | FST | 18057-14 | - |
| 곡선 집게 | WPI | 14114-G-Cutasept | |
| 피부 소독 | VWR | BODL980365 | - |
| 탈수기 | DIAPATH | Donatello-electrosurgical | |
| 펜 | Bovie | CHANGE-A-TIP-Embedding | |
| 기계 | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-P5-Ethanol | |
| Sinopharm Group Chemical Reagent Co. LtD | 100092683-Frozen | ||
| platform | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-L5 | - |
| 거즈 패드, 면봉 | Lohmann-Rauscher | 13353 | - |
| 유리 슬라이드 | Servicebio | G6004-HE | |
| 염료 용액 세트 | Servicebio | G1003 | - |
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| 봉합사(10-0) | 메드트로닉 | N2540 | - |
| 봉합사(4-0) | 에틸론 | V4940H | - |
| 봉합사(7-0) | 에틸론 | 1647H | - |
| 주사기(0,3mL) | BD | 324826- | |
| 주사기(1mL) | BD | 320801 | - |
| 조직 스프레더 | Zhejiang Kehua Instrument Co., Ltd | KD-P-Upright | |
| 광학 현미경 | Nikon | Nikon Eclipse E100-xylazine | |
| Bayer | Rompun | - | |
| 크실렌 | 시노팜 그룹 화학 시약 Co. LtD | 10023418 | - |
참고문헌
- Skoskiewicz, M., Chase, C., Winn, H. J., Russell, P. S. Kidney transplants between mice of graded immunogenetic diversity. Transplantation Proceedings. 5 (1), 721-725 (1973).
- Jiang, K., et al.
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재인쇄 및 허가
