Denne protokol beskriver værktøjer til håndtering af siliciumplanære intrakortiske mikroelektroder under behandlinger for overflademodifikation via gasaflejring og vandige opløsningsreaktioner. Samlingen af de komponenter, der bruges til at håndtere enhederne under hele proceduren, forklares detaljeret.
Intrakortiske mikroelektroder har et stort terapeutisk potentiale. Men de udfordres med betydelig præstationsreduktion efter beskedne implantationsvarigheder. En væsentlig bidragyder til det observerede fald er skaden på det neurale vævs proksimale til implantatet og efterfølgende neuroinflammatorisk respons. Bestræbelser på at forbedre enhedens levetid omfatter kemiske modifikationer eller belægningsapplikationer på enhedens overflade for at forbedre vævsresponsen. Udvikling af sådanne overfladebehandlinger afsluttes typisk ved hjælp af ikke-funktionelle “dummy” sonder, der mangler de elektriske komponenter, der kræves til den tilsigtede anvendelse. Oversættelse til funktionelle enheder kræver yderligere overvejelse i betragtning af skrøbeligheden af intrakortiske mikroelektrode arrays. Håndteringsværktøjer letter i høj grad overfladebehandlinger til samlede enheder, især til ændringer, der kræver lange proceduremæssige tider. De håndteringsværktøjer, der er beskrevet her, anvendes til overfladebehandlinger, der påføres via gasfaseaflejring og eksponering for vandig opløsning. Karakterisering af belægningen udføres ved hjælp af ellipsometri og røntgenfotoelektronspektroskopi. En sammenligning af optagelser af elektrisk impedansspektroskopi før og efter belægningsproceduren på funktionelle enheder bekræftede enhedens integritet efter ændring. De beskrevne værktøjer kan let tilpasses til alternative elektrodeanordninger og behandlingsmetoder, der opretholder kemisk kompatibilitet.
Neuroprostetiske enheder sigter mod at genoprette nedsatte eller fraværende sensoriske og motoriske evner i en bred vifte af patientpopulationer, herunder dem med rygmarvsskade, amyotrofisk lateral sklerose (ALS), cerebral parese og amputationer 1,2,3. Intrakortiske mikroelektroder (IME’er) kan etablere en kommunikationsvej mellem kortikale neuroner og de enheder, der bruges til at kontrollere neuroprostetik. En klar fordel ved intrakortiske mikroelektroder er deres evne til at registrere neurale signaler ved den høje rumlige og tidsmæssige opløsning, hvilket foretrækkes til efterfølgende signalbehandling og styring af hjerne-computergrænseflader 4,5. Desværre reduceres ydelsen af intrakortiske mikroelektroder dramatisk inden for måneder til et år efter implantation 2,6,7,8. Tabet af signalkvalitet og stabilitet påvirker anvendelsen af teknologien negativt.
En væsentlig bidragyder til det observerede præstationsfald er det biotiske respons på implantationsrelateret vævsskade og kronisk neuroinflammation 9,10,11. Implantation af IME’er påfører skade på hjernevæv, hvilket resulterer i frigivelse af signalmolekyler, der initierer kaskader af reaktionære cellulære forsvarsprocesser. Kronisk grænseflade forværrer fremmedlegemets respons, hvilket fører til vedvarende neuroinflammation, der beskadiger vævsproximalt på enheden; ofte anerkendt som symptomer på neuroinflammation, ardannelse og lokal neurodegeneration, der bidrager til faldet i optagelsen af signalkvaliteten 12,13,14,15. Bestående af et tæt konglomerat af astrocytter med entrained aktiveret mikroglia og makrofager skaber arret, der indkapsler elektroden, et ugunstigt lokalt miljø med reduceret materialetransport og lokal ophobning af inflammatoriske faktorer 16,15,16,17,18.
Mange undersøgelser har beskrevet hjernens reaktion på intrakortiske mikroelektroder eller tilgange til at afbøde responsen7. Forskning og udvikling til forbedring af vævsresponsen har involveret en række strategier, herunder ændringer af den overordnede struktur, overfladetopologi, materialer og belægninger. Disse bestræbelser har til formål at minimere skader, der opstår som følge af implantationshændelsen, indføre en mere gunstig grænseflade mellem enheden og proksimale celler eller reducere vævsstammen, efter at enhederne er implanteret7. Metoder, der specifikt er rettet mod det kroniske biologiske respons, har ført til flere bioaktive belægninger, der sigter mod at stabilisere implantationsstedet og kemisk fremme cellesundhed. Eksempler inkluderer ledende polymerer såsom poly (ethylendioxythiophen) (PEDOT)19,20, carbon nanorør21, hydrogeler22 og tilsætning af bioaktive molekyler og lægemidler til målretning af specifikke cellulære processer23,24,25. Vores forskningsgruppe har især undersøgt mange mekanismer til at fremme en reduktion af det inflammatoriske respons på implanterede mikroelektroder, herunder, men ikke begrænset til, minimering af traumet forbundet med enhedsimplantation26, minimering af enhedens / vævsstivhedsmismatch 27,28,29,30,31,32,33, optimering af sterilisering procedurer34,35, reduktion af oxidativ stress/skade 28,36,37,38,39,40,41,42, udforskning af alternative elektrodematerialer 43 og efterligning af nanoarkitekturen i den naturlige ekstracellulære matrix 44,45,46 . Nylig interesse er udviklingen af biomimetiske overfladebelægninger for at afbøde det neuroinflammatoriske respons ved mikroelektrodvævsgrænsefladen direkte39.
Ændring af grænsefladen giver den unikke fordel ved direkte at målrette såret og det proksimale væv, der er nødvendigt for signaloptagelse. En overfladebehandling, der fremmer heling uden at forværre immunresponset, kan gavne levetiden for kvalitetsregistrering og fjerne begrænsninger i realiseringen af det terapeutiske og forskningsmæssige potentiale for intrakortiske mikroelektroder. De præsenterede arbejdsdetaljer metoder til påføring af overfladebehandlinger på mikroelektrodearrays, der kræver forlængede reaktionstider, samtidig med at enhedernes skrøbelighed imødekommes. Den præsenterede teknik er beregnet til at dele overflademodifikationsmetoder til funktionelle enheder, hvor enheden ikke kan håndteres under hele behandlingsapplikationen. Værktøjerne præsenteres til håndtering af ikke-funktionelle dummy sonder og funktionelle silicium plane mikroelektrode arrays.
Den præsenterede tilgang til ændring af elektrodeoverfladen muliggør sikker suspension af ikke-funktionelle dummy-sonder eller funktionelle siliciumplanære elektrodearrays til gasfaseaflejring og reaktion med vandige opløsninger. Flere 3D-printede stykker bruges til at håndtere disse skrøbelige enheder (figur 1 og figur 2). Der gives et eksempel på en procedure, der anvender både gas- og opløsningsfasetrin til overflademodifikation med en antioxidativ belægning, der involverer immobilisering af Mn (III) tetrakis (4-benzoesyre) porfyrin (MnTBAP). MnTBAP er et syntetisk metalloporphyrin, der besidder antioxidantegenskaber med påvist formidling af inflammation 47,48. Det angivne eksempel på funktionelle siliciumplanelektrodearrays validerer en opdatering til en tidligere rapporteret protokol for ikke-funktionelt udstyr40. Tilpasningen af en gasfaseaflejringsteknik fra Munief et al. understøtter protokollens kompatibilitet med funktionelle elektroder49. Gasfaseaflejringen anvendes til aminfunktionalisering af overfladen som forberedelse til den vandige reaktion, der involverer carbodiimid-tværbindingskemi for at immobilisere den aktive MnTBAP. Den håndteringsmetode, der er udviklet her, leveres som en platform, der kan ændres til at rumme andre belægninger og lignende enheder.
Protokollen illustrerer tilgangen ved hjælp af ikke-funktionelle dummy-sonder bestående af et siliciumskaft og 3D-trykt fane med lignende dimensioner som de funktionelle siliciumplanelektrodearrays. Enhedens konnektoremballage betragtes som analog med den 3D-printede fane på den ikke-funktionelle dummy-sonde i den medfølgende instruktion.
Figur 1: 3D-printede stykker til håndtering af funktionelle enheder under gasfaseaflejringen i en vakuumdisikator. (A) Strukturens base omfatter holdere til 1 cm x 1 cm prøve silicium firkanter (øverste pil) og huller til fastgørelse til tørreplade (nederste pil). (B) Pladen bruges til at sikre ophængningen af anordninger. Herfra vil hvert stykke i denne figur blive omtalt som enten stykke 1A eller 1B. Skalabjælke = 1 cm. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 2: 3D-printede stykker til håndtering af funktionelle anordninger til overfladereaktion, der forekommer i den vandige opløsning. (A) Styrestykke, der skal limes på låget på kulturpladen. (B) Bordstykker, der bruges til at stabilisere stykker (C) og (D) under montering. (C) og (D) fastgør sammen suspensionen af anordninger til placering i brøndpladen, og (E) fastgør yderligere stykker (C) og (D) til brøndpladelåget. Herfra vil individuelle stykker i hvert panel af denne figur blive omtalt som styknumre svarende til panelnummeret på denne figur. Skalabjælke = 1 cm. Klik her for at se en større version af denne figur.
Den beskrevne protokol blev designet til overfladebehandling af siliciumplanke mikroelektrodearrays. De 3D-printede værktøjer er tilpasset michigan-stil mikroelektrode arrays med lavprofil stik50. Ikke-funktionelle sonder blev samlet ved at klæbe en siliciumsonde til 3D-printede faner ved hjælp af et biokompatibelt klæbemiddel. De 3D-printede faner blev designet med lignende dimensioner som de stik, der er inkorporeret på de kommercielt tilgængelige enheder, der anvendes. Filer til de 3D-pr…
The authors have nothing to disclose.
Denne undersøgelse blev delvist støttet af Merit Review Award IRX002611 (Capadona) og Research Career Scientist Award IK6RX003077 (Capadona) fra USA (US) Department of Veterans Affairs Rehabilitation Research and Development Service. Derudover blev dette arbejde også delvist støttet af National Institute of Health, National Institute of Neurological Disorders and Stroke R01NS110823 (Capadona / Pancrazio) og National Science Foundation Graduate Research Fellowship Program (Krebs).
1-[3-(Dimethylamino)propyl]-3-ethylcarbodiimide methiodide (EDC) | Sigma-Aldrich | 165344-1G | Solid, stored desiccated at -20 °C |
15 mL Conical Centrifuge Tubes | Fisher Scientific | 14-959-70C | |
18 Pound Solid Nylon Cable/Zip Ties | Cole-Parmer | EW-06830-66 | Length 4 inches |
2-(N-Morpholino)ethanesulfonic acid (MES) | Sigma-Aldrich | 4432-31-9 | Solid |
3-aminopropyltriethoxysilane (APTES) | Sigma-Aldrich | 440140-100ML | Liquid, container with Sure/Seal |
50 mL Conical Centrifuge Tubes | Fisher Scientific | 14-959-49A | |
Aluminum foil | Fisher Scientific | 01-213-103 | |
Aluminum weighing dishes | Fisher Scientific | 08-732-102 | Diameter 66 mm |
Bel-Art Vacuum Desiccator | Fisher Scientific | 08-594-15B | |
Corning Costar TC-Treated Multiple Well Plates | Millipore Sigma | CLS3527-100EA | 24-well plate, polystyrene |
Cyanoacrylate Adhesive | LocTite | N/A | |
Digital Microscope | Keyence | VHX-S750E | |
Disco DAD3350 Dicing Saw | Disco | DAD3350 | Used to cut silicon wafer into 1 cm x 1 cm samples |
Double-Sided Polyimide Tape | Kapton Tape | PPTDE-1/4 | ¼” x 36 yds. |
EP21LVMed – low viscosity, two component epoxy compound | Masterbond | EP21LVMed | Meets USP Class VI certification, Passes ISO 10993-5 for cytotoxicity |
Epilog Fusion Pro 48 Laser Machine | Epilog | N/A | CO2 laser |
Foam tape | XFasten | N/A | 1/8" Thick |
Gamry Interface 1010E Potentiostat | Gamry | 992-00129 | |
High precision 45° curved tapered very fine point tweezers/forceps | Fisher Scientific | 12-000-131 | |
Lab tape | Fisher Scientific | 15-901-10L | |
Mn(III)tetrakis (4-benzoic acid) porphyrin (MnTBAP) | EMD Millipore | 475870-25MG | Solid, stored at -20 °C |
N-Hydroxysulfosuccinimide sodium salt, ≥98% (HPLC) | Sigma-Aldrich | 56485-250MG | Solid, stored desiccated at 4°C |
Platinum clad niobium mesh anode | Technic | N/A | Clad with 125μ” of platinum on one side, framed in titanium with (1) 1” x 6” titanium strap centered on one 6” dimension |
Silicon Planar Microelectrode Array, 16 Channel | NeuroNexus | A1x16-3mm-100-177-CM16LP | Electrode site material is iridium, shank thickness is 15 μm |
Silicon Wafer | University Wafer | 1575 | Diameter 100 mm, p-type, boron-doped, 100 oriented, resistivity 0.01-0.02 Ohm-cm, thickness 525 um, single side polished, prime grade |
Silver/silver Chloride reference electrode | Gamry Instruments | 930-00015 | |
Solidworks | N/A | ||
Stainless Steel Phillips Flat Head Screws | McMaster Carr | 96877A629 | #8-32, 1 1/2", fully threaded |
Type I deionized water | ChemWorld | CW-DI1-20 | |
Ultimaker 3 3D printer | Ultimaker | N/A | |
Ultimaker Cura | Ultimaker | N/A | 3D printing software |
Ultimaker NFC ABS Filament | Dynamism, Inc. | 1621 | 2.85 mm |
Ultimaker NFC PLA Filament | Dynamism, Inc. | 1609 | 2.85 mm |
Vacuum Gauge Vacuum Gauge | Measureman Direct | N/A | Glycerin Filled, 2-1/2” Dial Size, ¼”NPT, -30” Hg/-100kpa-0 |
Wing nuts | Everbilt | 934917 | #8-32, zinc plated |