표면 플라즈몬 공명을 통한 항바이러스제 엔지니어링

Irene Maier

doi:10.3791/63541

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방법 논문

표면 플라즈몬 공명을 통한 항바이러스제 엔지니어링

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DOI:

10.3791/63541

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2022년 6월 14일

Irene Maier¹^,²

¹Department of Environmental Health Sciences, University of California, Los Angeles, ²Department of General Surgery, Medical University of Vienna

이 논문에서

요약

본 프로토콜은 HA, S 당단백질, 관련 하이브리드형 글리칸 및 고만노스 올리고당에 대한 CV-N 결합을 검사하기 위한 SPR 결합 분석을 위한 새로운 도구를 설명합니다. SPR은 이량체 또는 단량체 CV-N을 이들 글리칸에 결합시키기 위한_KD 를 결정하기 위해 사용된다.

초록

표면 플라즈몬 공명(SPR)은 도메인 스왑된 시아노비린-N(CV-N) 이량체에 대한 헤마글루티닌(HA) 결합을 측정하고 만노실화된 펩타이드와 CV-N의 고친화성 결합 부위 간의 상호 작용을 모니터링하는 데 사용됩니다. 바이러스 외피 스파이크 gp120, HA 및 에볼라 당 단백질 (GP) 1,2는 이량 체 CVN2의 고 및 저 친화성 결합 부위 모두에 결합하는 것으로보고되었습니다. 디만노실화된 HA 펩타이드는 또한 CVN2의 조작된 분자에 대한 2개의 저친화성 결합 부위에 결합되며, 이는 각 리간드에 대해 고친화성 부위를 보유하고, 탄수화물 결합 포켓에서 안정화 이황화 결합을 대체하도록 돌연변이되어 다가 결합을 확인합니다. HA 결합은 올리고머화를 통해 인간 면역결핍 바이러스 유형 1 (HIV-1)을 추가로 중화시키는 275 nM의 해리 상수_(KD)에서 유사 항체 CVN2의 하나의 고친화성 결합 부위에 나타난다. 시스틴을 글루탐산과 아르기닌의 극성 잔기 쌍으로 대체하여 4에서 2로 감소하는 도메인 스왑 CVN2의 이황화 다리 수를 상관 시키면 HA에 대한 결합 친화도가 감소합니다. 가장 강력한 상호 작용 중 에볼라 GP1,2는 막 횡단 도메인이없는 외피 글리 칸을 사용하여 낮은 나노 몰 범위의 두 개의 고 친화성 결합 부위와 CVN2에 의해 결합됩니다. 본 연구에서, 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 2(SARS-CoV-2) 스파이크(S) 당단백질에 대한 다특이적 단량체 CV-N의 결합은_{KD =} 18.6μM에서 다른 바이러스 스파이_{크에 대한} 나노몰 KD와 비교하여 측정되며, 중간 μ몰 범위의 수용체 결합 도메인을 통해 측정됩니다.

서론

테더린 관련 항바이러스 활성은 인터페론-α에 의해 유도되고, 단백질 기반 테더를 포함하며, 이는 감염된^{세포 표면 1}에 완전히 형성된 비리온의 보유를 유도한다. 바이러스 방출 억제에서 테테린 글리코실화의 필요성은 여전히 불확실하며, 이는 (인플루엔자 바이러스의 경우) 표면 발현 인플루엔자 헤마글루티닌 HA^3,4의 형태에 의존하는 시험관 내 연구 ^1,2를 위한 재조합 발현 글리칸에 대한 글리코실화 패턴의 중요성을 암시합니다. . N-결합 글리코실화에 묶인 올리고당의 변형은 HIV 유형-1 방출²의 테더린 매개 제한에 충분하며, 이량체화는 바이러스 방출을 방지하는 데 필수적인 역할을 하며, 이에 따라 막횡단 도메인 또는 글리코실-포스파티딜-이노시톨(GPI)-앵커를 수반하여 신진 비리온을 테더링하는 것으로 나타났습니다^.5 . 인간 및 쥐 테더린이 여러 외피 바이러스, 레트로바이러스 및 필로바이러스를 차단하는 고유한 특징이 설명됩니다. BST-2 / ....