JoVE Journal > Biology
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Results
Discussion
Disclosures
Acknowledgements
Materials
References
자동 번역
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.
생물학

Zebra Balığı Retinal Pigment Epitelinin Rejenerasyonunu İncelemek için Nitroredüktaz / Metronidazol Aracılı Ablasyon ve Bir MATLAB Platformu (RpEGEN)

Published: March 02, 2022
doi:
10.3791/63658
, ,
1Department of Ophthalmology, Louis J. Fox Center for Vision Restoration,University of Pittsburgh School of Medicine, 2Earth Research Institute,University of California, Santa Barbara, 3Department of Developmental Biology,University of Pittsburgh School of Medicine

Summary

Bu protokol, transgenik zebra balığı modeli kullanarak retinal pigment epitelini (RPE) genetik olarak ablate etme metodolojisini açıklamaktadır. Farmakolojik bileşikler kullanarak sinyal yolu modülasyonunu içerecek şekilde protokolün uyarlanması kapsamlı bir şekilde detaylandırılmıştır. Pigmentasyona dayalı RPE rejenerasyonunu ölçmek için bir MATLAB platformu geliştirildi ve sunuldu ve tartışıldı.

Abstract

Retinal pigment epiteli (RPE) gözün arkasında bulunur ve komşu retinal ve vasküler dokuların sağlığını ve bütünlüğünü korumak için gerekli işlevleri yerine getirir. Günümüzde, küçük yaralanmalarla sınırlı olan memeli RPE’nin sınırlı onarıcı kapasitesi, in vivo RPE rejeneratif süreçlerini anlamadaki ilerlemeyi engellemiştir. Burada, sağlam doku rejenerasyonu yapabilen omurgalı bir model olan zebra balığı kullanılarak in vivo RPE onarımının incelenmesini kolaylaştırmak için ayrıntılı bir metodoloji sağlanmaktadır. Bu protokol, transgenik bir nitroredüktaz / metronidazol (NTR / MTZ) aracılı yaralanma paradigmasını (rpe65a: nfsB-eGFP) tanımlar, bu da MTZ ile 24 saatlik tedaviden sonra RPE’nin merkezi üçte ikisinin ablasyonuna ve ardından doku iyileşmesine neden olur. Larva zebra balığında RPE ablasyonlarına odaklanılmış ve farmakolojik bileşiklerin RPE rejenerasyonu üzerindeki etkilerini test etmek için yöntemler de özetlenmiştir. Pigmentasyona dayalı RPE rejenerasyonunun nicelleştirilmesini otomatikleştirmek için oluşturulan bir MATLAB betiği olan RpEGEN’in oluşturulması ve doğrulanması da tartışılmaktadır. Aktif RPE onarım mekanizmalarının ötesinde, bu protokol, RPE dejenerasyonu ve yaralanma yanıtlarının yanı sıra RPE hasarının diğer hücresel ve moleküler süreçlerin yanı sıra bitişik retinal ve vasküler dokular üzerindeki etkileri üzerine yapılan çalışmalara genişletilebilir. Bu zebra balığı sistemi, RPE rejenerasyonunu ve RPE hastalığıyla ilgili mekanizmaları yönlendiren genleri, ağları ve süreçleri tanımlamada, bu bilgiyi memeli sistemlerine ve nihayetinde terapötik gelişime doğru uygulamak için uzun vadeli bir amaç doğrultusunda önemli bir umut vaat etmektedir.

Introduction

Burada açıklanan metodoloji, larva zebra balığı kullanarak retinal pigment epitelini (RPE) genetik olarak ablate etmek için bir protokolü detaylandırmaktadır. RPE gözün arkasına uzanır ve nöral retinanın tabakalaşmış tabakaları ile koroidi oluşturan vaskülatür tabakası arasında bulunur. Trofik destek, fototoksik ışığın emilimi ve görsel döngü proteinlerinin bakımı, RPE’nin bu bitişik dokuların sağlığını ve bütünlüğünü sürdürmek için gerekli olan kritik işlevlerden sadecebirkaçıdır 1. Memeli RPE’sine verilen hasar, lezyonlar küçük olduğunda onarılabilir2; Bununla birlikte, daha büyük yaralanmaların veya ilerleyici dejeneratif hastalıkların maruz kaldığı hasar geri dönüşümsüzdür. İnsanlarda, RPE dejeneratif hastalıkları (örneğin, yaşa bağlı makula dejenerasyonu (AMD) ve Stargardt hastalığı) kalıcı görme kaybına ve az sayıda tedavi seçeneği ile hastanın yaşam kalitesinin düşmesine neden olur. Memeli RPE’nin kendi kendini onarma yeteneğinin sınırlı olması, RPE rejeneratif süreçleri alanında bir bilgi boşluğu yaratmıştır. Zebra balıklarının birçok farklı doku tipinde sağlam rejeneratif kapasitesi göz önüne alındığında, bu protokol, içsel olarak yenilenen RPE ile ilgili çalışmaları kolaylaştırmak ve bu yanıtı yönlendiren mekanizmaları ortaya çıkarmak için in vivo omurgalı bir sistem kurmak için geliştirilmiştir. Burada özetlenen ablasyon paradigması kullanılarak, kanonik Wnt sinyal yolu3, mTOR yolu4 ve bağışıklık ile ilgili yanıtlar5 , muhtemelen örtüşen işlevlerle RPE rejenerasyonunun kritik mediatörleri olarak tanımlanmıştır.

Bu genetik ablasyon paradigmasında, Tg(rpe65a:nfsB-eGFP)3 zebra balığı, RPE arttırıcı elementin kontrolü altında eGFP’ye kaynaşmış bakteri kaynaklı nitroredüktaz (NTR / nfsB) gen 6’yı eksprese eder, rpe65a7. Ablasyon, zebra balığı barındıran sisteme ön ilaç metronidazol (MTZ) eklenerek elde edilir. MTZ’nin nitroredüktaz ile hücre içi aktivasyonu, NTR / nfsB eksprese eden hücrelerde DNA çapraz bağlanması ve apoptoz ile sonuçlanır 8,9. Bu teknoloji, zebra balıklarında retina10,11,12,13 hücrelerini ve diğer dokuları ablate etmek için yaygın olarak kullanılmaktadır8. Bu elemanlar birlikte, indüklenebilir hücre ablasyon metodolojisinin (NTR / MTZ) 8,9 ve görselleştirme için bir floresan işaretleyicinin (eGFP) hedeflenen ekspresyonunu (rpe65a) sağlar.

RPE14’ün rejeneratif potansiyelini incelemek için kullanılabilecek diğer ilginç in vivo modeller de mevcuttur. Bunlar geniştir ve amfibilerde retinektomi sonrası RPE-retina transdiferansiyasyonunu içerir, burada retinal yeniden büyümeye kaybedilen RPE hücreleri değiştirilir15,16; “Süper şifa” MRL / MpJ fare17’de yaralanma sonrası RPE restorasyonu; ve diğerlerinin yanı sıra spontan RPE ve retinal dejenerasyon18’in bir sıçan modelinde RPE proliferasyonunun eksojen uyarılması. Yetişkin insan RPE kök hücreleri (RPESC’ler)19 gibi in vitro modeller de geliştirilmiştir. Bu modellerin tümü, RPE rejenerasyonu ile ilgili hücresel süreçleri ortaya çıkarmak için çalışan değerli araçlardır (örneğin, proliferasyon, farklılaşma, vb.); Bununla birlikte, zebra balığı, ablasyon sonrası içsel RPE onarımı için kapasitesinde benzersizdir.

Buradaki metodoloji, RPE rejenerasyonunu yönlendiren mekanizmaları anlamaya odaklanmak için yazılmış olsa da, Tg (rpe65a: nfsB-eGFP) hattı ve bu genetik ablasyon protokolü, RPE apoptozisi, RPE dejenerasyonu ve RPE hasarının bitişik retinal ve vasküler dokular üzerindeki etkisi gibi diğer hücresel süreçleri incelemek için kullanılabilir. Ablasyon protokolü, ilgilenilen sinyal yollarını taramak için uygun bir ön strateji olan farmakolojik manipülasyonu içerecek şekilde de değiştirilebilir. Örneğin, Wnt Yanıt-1 İnhibitörü (IWR-1)20 kullanılarak kanonik Wnt yolunun bloke edilmesinin, RPE rejenerasyonunu bozduğugösterilmiştir 3. Bu, kullanıcılara farmakolojik bir manipülasyon deneyi boyunca rehberlik etmek ve pigmentasyonun geri kazanımına dayalı RPE rejenerasyonunu ölçmek için oluşturulan bir MATLAB komut dosyasını (RpEGEN) doğrulamak için kavram kanıtı olarak hizmet etmek için burada tekrarlandı. Transgenik çizgi ve ablasyon protokolü gibi, RpEGEN komut dosyaları uyarlanabilir ve RPE içindeki diğer belirteçleri / hücresel süreçleri ölçmek için kullanılabilir.

Protocol

Burada özetlenen tüm metodolojiler, Pittsburgh Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) ile uyumludur. 1. Zebra balığı embriyo toplama işleminden önce hazırlık Embriyo inkübatörünü 28.5 ° C’ye ayarlayın. Melanogenez inhibitörü, N-feniltiourea (PTU) 21,22’nin 25x stok çözeltisini hazırlayın. Bu stok çözeltisi ortak bir reçete<sup class="…

Representative Results

Kanonik Wnt sinyal yolunu inhibe etmenin, protokol3’te açıklanan genetik ablasyon paradigması (rpe65a: nfsB-eGFP) ve farmakolojik manipülasyon metodolojisi (IWR-1) kullanılarak zebra balığı RPE rejenerasyonunu önemli ölçüde bozduğu bilinmektedir. Bu deney, pigmentasyona dayalı zebra balığı RPE rejenerasyonunu ölçmek için otomatik bir yöntemi doğrulamak için burada tekrarlandı. Aşağıda özetlenen sonuçlar, döllenme gününden (0 dpf) RpEGEN kullanarak RPE rejen…

Discussion

Bu protokol, RPE’yi genetik olarak ablate etmek ve larval yaşlı zebra balıklarında dejenerasyon ve rejenerasyon mekanizmalarını incelemek için metodolojiyi açıklamaktadır. Bu protokol yetişkin zebra balığı3’te de başarıyla gerçekleştirilmiştir, ancak daha az kapsamlı karakterizasyona sahiptir, bu nedenle larvalar burada odak noktasıdır. Protokolün bu bölümünün kritik yönleri (adım 1-4) şunları içerir: 1) melanogenezin başlamasından önce embriyolara 1.5x PTU eklen…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Burada açıklanan çalışmalar Ulusal Sağlık Enstitüleri (RO1-EY29410’dan J.M.G’ye ve NIH CORE Grant P30-EY08098’den Oftalmoloji Bölümü’ne) tarafından desteklenmiştir; UPMC Bağışıklık Nakli ve Terapi Merkezi (L.L.L. ve J.M.G.’ye); ve E. Ronald Salvitti Oftalmoloji Araştırmaları Kürsüsü (J.M.G.’ye). Wiegand Oftalmoloji Bursu’ndan (L.L.L.’ye), Pittsburgh Göz ve Kulak Vakfı’ndan ve New York, NY’daki Körlüğü Önleme Araştırması’ndan sınırsız bir hibe alındı. Yazarlar ayrıca teknik yardım için Amanda Platt’a ve mükemmel hayvan bakımı desteği için Dr. Hugh Hammer ve su sporları personeline teşekkür etmek istiyor.

Materials

Lab Material/Equipment
2-(4-Amidinophenyl)-6-indolecarbamidine dihydrochloride (DAPI) Millipore Sigma D9542
6-well plates Fisher Scientific 07-200-83
Conical Polypropylene Centrifuge Tubes Fisher Scientific 05-539-13 Catalog number is for 50 mL tubes
Diamond tip scribing pen Fisher Scientific 50-254-51 Manufactured by Electron Microscopy Sciences, items similar to this part number are adequate
Dimethyl sulfoxide (DMSO) ≥99.7 % Fisher Scientific BP231 Check instiutional chemical waste disposal requirements
Embryo incubator (large) Fisher Scientific 3720A
Embryo incubator (mini/tabletop) Labnet I5110A
Fluorescence stereo microscope Zeiss Axio Zoom.V16 Or similar, with 488 nm excitation laser/filter
Glass Pasteur pipette Fisher Scientific 13-678-4 Manufactured by Corning, non-sterile
InSolution Wnt Antagonist I, IWR-1-endo Millipore Sigma 5.04462 Manufactured by Calbiochem; 25 mM in DMSO; check instiutional chemical waste disposal requirements
Methylene blue (powder) Fisher Scientific BP117-100 Also available as a premade aqeuous solution
Metronidazole (MTZ) Millipore Sigma M3761 Check instiutional chemical waste disposal requirements
N-phenylthiourea (PTU) Millipore Sigma P7629 Check instiutional chemical waste disposal requirements
Paraformaldehyde (16 % w/v) methanol free Fisher Scientific AA433689M Chemical waste, proper disposal required
Petri dishes Fisher Scientific FB0875712 10 cm diameter
Phosphate buffered saline (powder packets) Millipore Sigma P3813 Used to make 10 X PBS stock
Pronase Millipore Sigma PRON-RO
Shaking incubator Benchmark H2010 Used for incubating MTZ for 1 hour at 37 degrees Celcius
Stereo microscope Leica S9i Or similar, with transmitted light illumination
Student Dumont #5 forceps Fine Science Tools 91150-20 Fine-tipped forceps for manual dechorionation
Tabletop rotator/shaker Scilogex SK-D1807-E
Transfer pipette Millipore Sigma Z135003 3.2 mL bulb draw, non-sterile
Tricaine methanesulfonate (MS-222) Pentair TRS1, TRS2, TRS5 Also available from Fisher Scientific (NC0342409)
VECTASHIELD Antifade Mounting Medium with DAPI Vector Laboratories H-1200
Software Material
FIJI (Fiji is Just ImageJ) FIJI (Fiji is Just ImageJ) https://imagej.net/software/fiji/ Version: 2.0.0-rc-69/1.52p; Build: 269a0ad53f; Plugin needed: Bio-Formats
GRAMM examples and how-tos MathWorks https://www.mathworks.com/matlabcentral/fileexchange/54465-gramm-complete-data-visualization-toolbox-ggplot2-r-like.
MATLAB MathWorks https://www.mathworks.com/products/get-matlab.html Toolboxes needed to run RpEGEN: Image Processing Toolbox, Curve Fitting Toolbox, Statistics and Machine Learning Toolbox
MATLAB support MathWorks https://www.mathworks.com/support.html
DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Strauss, O. The retinal pigment epithelium in visual function. Physiological Reviews. 85 (3), 845-881 (2005).
  2. Grierson, I., et al. repair and regeneration of the retinal pigment epithelium. Eye. 8 (2), 255-262 (1994).
  3. Hanovice, N. J., et al. Regeneration of the zebrafish retinal pigment epithelium after widespread genetic ablation. PLoS Genetics. 15 (1), 1007939 (2019).
  4. Lu, F., Leach, L. L., Gross, J. M. mTOR activity is essential for retinal pigment epithelium regeneration in zebrafish. bioRxiv. , (2021).
  5. Leach, L. L., Hanovice, N. J., George, S. M., Gabriel, A. E., Gross, J. M. The immune response is a critical regulator of zebrafish retinal pigment epithelium regeneration. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 118 (21), (2021).
  6. Zenno, S., Koike, H., Tanokura, M., Saigo, K. Gene cloning, purification, and characterization of nfsb, a minor oxygen-insensitive nitroreductase from escherichia coli, similar in biochemical properties to frase I, the major flavin reductase in vibrio fischeri. The Journal of Biochemistry. 120 (4), 736-744 (1996).
  7. Hamel, C. P., et al. Molecular cloning and expression of rpe65, a novel retinal pigment epithelium-specific microsomal protein that is post-transcriptionally regulated in vitro. Journal of Biological Chemistry. 268 (21), 15751-15757 (1993).
  8. Curado, S., et al. Conditional targeted cell ablation in zebrafish: A new tool for regeneration studies. Developmental Dynamics. 236 (4), 1025-1035 (2007).
  9. White, D. T., Mumm, J. S. The nitroreductase system of inducible targeted ablation facilitates cell-specific regenerative studies in zebrafish. Methods. 62 (3), 232-240 (2013).
  10. White, D. T., et al. Immunomodulation-accelerated neuronal regeneration following selective rod photoreceptor cell ablation in the zebrafish retina. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (18), 3719-3728 (2017).
  11. Yoshimatsu, T., et al. Presynaptic partner selection during retinal circuit reassembly varies with timing of neuronal regeneration in vivo. Nature Communications. 7, 10590 (2016).
  12. Montgomery, J. E., Parsons, M. J., Hyde, D. R. A novel model of retinal ablation demonstrates that the extent of rod cell death regulates the origin of the regenerated zebrafish rod photoreceptors. The Journal of Comparative Neurology. 518 (6), 800-814 (2010).
  13. Hagerman, G. F., et al. Rapid recovery of visual function associated with blue cone ablation in zebrafish. PLoS One. 11 (11), 0166932 (2016).
  14. George, S. M., Lu, F., Rao, M., Leach, L. L., Gross, J. M. The retinal pigment epithelium: Development, injury responses, and regenerative potential in mammalian and non-mammalian systems. Progress in Retinal and Eye Research. 85, 100969 (2021).
  15. Chiba, C., et al. Visual cycle protein rpe65 persists in new retinal cells during retinal regeneration of adult newt. The Journal of Comparative Neurology. 495 (4), 391-407 (2006).
  16. Yoshii, C., Ueda, Y., Okamoto, M., Araki, M. Neural retinal regeneration in the anuran amphibian xenopus laevis post-metamorphosis: Transdifferentiation of retinal pigmented epithelium regenerates the neural retina. 발생학. 303 (1), 45-56 (2007).
  17. Xia, H., Krebs, M. P., Kaushal, S., Scott, E. W. Enhanced retinal pigment epithelium regeneration after injury in mrl/mpj mice. Experimental Eye Research. 93 (6), 862-872 (2011).
  18. McGill, T. J., et al. Subretinal transplantation of human central nervous system stem cells stimulates controlled proliferation of endogenous retinal pigment epithelium. Translational Vision Science and Technology. 8 (3), 43 (2019).
  19. Salero, E., et al. Adult human rpe can be activated into a multipotent stem cell that produces mesenchymal derivatives. Cell Stem Cell. 10 (1), 88-95 (2012).
  20. Chen, B., et al. Small molecule-mediated disruption of wnt-dependent signaling in tissue regeneration and cancer. Nature Chemical Biology. 5 (2), 100-107 (2009).
  21. Whittaker, J. R. An analysis of melanogenesis in differentiating pigment cells of ascidian embryos. 발생학. 14 (1), 1-39 (1966).
  22. Westerfield, M. . Zebrafish Book, 5th Edition; A Guide for the Laboratory Use of Zebrafish (Danio rerio). , (2007).
  23. Hammer, H. S. . Water quality for zebrafish culture in The Zebrafish in Biomedical Research. , 321-335 (2020).
  24. Avdesh, A., et al. Regular care and maintenance of a zebrafish (danio rerio) laboratory: An introduction. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (69), e4196 (2012).
  25. Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. Stages of embryonic development of the zebrafish. Developmental Dynamics. 203 (3), 253-310 (1995).
  26. Camp, E., Lardelli, M. Tyrosinase gene expression in zebrafish embryos. Development Genes and Evolution. 211 (3), 150-153 (2001).
  27. Baumann, L., Ros, A., Rehberger, K., Neuhauss, S. C., Segner, H. Thyroid disruption in zebrafish (danio rerio) larvae: Different molecular response patterns lead to impaired eye development and visual functions. Aquatic Toxicology. 172, 44-55 (2016).
  28. Li, Z., et al. Phenylthiourea specifically reduces zebrafish eye size. PloS One. 7 (6), 40132 (2012).
  29. Bohnsack, B. L., Gallina, D., Kahana, A. Phenothiourea sensitizes zebrafish cranial neural crest and extraocular muscle development to changes in retinoic acid and igf signaling. PLoS One. 6 (8), 22991 (2011).
  30. Leary, S., et al. . Avma Guidelines for the Euthanasia of Animals: 2020 Edition. , (2020).
  31. Uribe, R. A., Gross, J. M. Immunohistochemistry on cryosections from embryonic and adult zebrafish eyes. Cold Spring Harbor Protocols. 2007, 4779 (2007).
  32. Schindelin, J., et al. Fiji: An open-source platform for biological-image analysis. Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).
  33. . GitHub – ReadImageJROI Available from: https://github.com/DylanMuir/ReadImageJROI (2021)
  34. Morel, P. Gramm: Grammar of graphics plotting in matlab. Journal of Open Source Software. 3 (23), 568 (2018).
  35. Reinhardt, R., et al. Sox2, tlx, gli3, and her9 converge on rx2 to define retinal stem cells in vivo. The EMBO Journal. 34 (11), 1572-1588 (2015).
  36. Schonthaler, H. B., et al. Evidence for rpe65-independent vision in the cone-dominated zebrafish retina. European Journal of Neuroscience. 26 (7), 1940-1949 (2007).
  37. Yazulla, S., Studholme, K. M. Neurochemical anatomy of the zebrafish retina as determined by immunocytochemistry. Journal of Neurocytology. 30 (7), 551-592 (2001).
  38. Larison, K. D., Bremiller, R. Early onset of phenotype and cell patterning in the embryonic zebrafish retina. Development. 109 (3), 567-576 (1990).
  39. Dwass, M. Modified randomization tests for nonparametric hypotheses. The Annals of Mathematical Statistics. 28 (1), 181-187 (1957).
  40. Karlsson, J., von Hofsten, J., Olsson, P. E. Generating transparent zebrafish: A refined method to improve detection of gene expression during embryonic development. Marine Biotechnology (NY). 3 (6), 522-527 (2001).
  41. Hernandez, R. E., Galitan, L., Cameron, J., Goodwin, N., Ramakrishnan, L. Delay of initial feeding of zebrafish larvae until 8 days postfertilization has no impact on survival or growth through the juvenile stage. Zebrafish. 15 (5), 515-518 (2018).
  42. Meyers, J. R., et al. Β-catenin/wnt signaling controls progenitor fate in the developing and regenerating zebrafish retina. Neural Development. 7, 30 (2012).
  43. Tappeiner, C., et al. Inhibition of the tgfβ pathway enhances retinal regeneration in adult zebrafish. PLoS One. 11 (11), 0167073 (2016).
  44. Bailey, T. J., Fossum, S. L., Fimbel, S. M., Montgomery, J. E., Hyde, D. R. The inhibitor of phagocytosis, o-phospho-l-serine, suppresses müller glia proliferation and cone cell regeneration in the light-damaged zebrafish retina. Experimental Eye Research. 91 (5), 601-612 (2010).
  45. Ramachandran, R., Zhao, X. F., Goldman, D. Ascl1a/dkk/beta-catenin signaling pathway is necessary and glycogen synthase kinase-3beta inhibition is sufficient for zebrafish retina regeneration. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (38), 15858-15863 (2011).
  46. Lemmens, K., et al. Matrix metalloproteinases as promising regulators of axonal regrowth in the injured adult zebrafish retinotectal system. The Journal of Comparative Neurology. 524 (7), 1472-1493 (2016).
  47. Elsaeidi, F., Bemben, M. A., Zhao, X. F., Goldman, D. Jak/stat signaling stimulates zebrafish optic nerve regeneration and overcomes the inhibitory actions of socs3 and sfpq. The Journal of Neuroscience. 34 (7), 2632-2644 (2014).
  48. Van Dyck, A., et al. Müller glia-myeloid cell crosstalk accelerates optic nerve regeneration in the adult zebrafish. Glia. 69 (6), 1444-1463 (2021).
  49. Conedera, F. M., Pousa, A. M. Q., Mercader, N., Tschopp, M., Enzmann, V. Retinal microglia signaling affects müller cell behavior in the zebrafish following laser injury induction. Glia. 67 (6), 1150-1166 (2019).
  50. Chen, S., Lathrop, K. L., Kuwajima, T., Gross, J. M. Retinal ganglion cell survival after severe optic nerve injury is modulated by crosstalk between jak/stat signaling and innate immune responses in the zebrafish retina. Development. 149 (8), (2022).
  51. de Preux Charles, A. S., Bise, T., Baier, F., Marro, J., Jaźwińska, A. Distinct effects of inflammation on preconditioning and regeneration of the adult zebrafish heart. Open Biology. 6 (7), 160102 (2016).

Tags

Keywords: ZebrafishRetinal Pigment EpitheliumRPERegenerationNitroreductaseMetronidazoleMATLABRpEGENAblationTransgenicEGFPPTUPharmacological Treatment
check_url/kr/63658?article_type=t

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Cite This Article
Leach, L. L., Fisher, G. B., Gross, J. M. Nitroreductase/Metronidazole-Mediated Ablation and a MATLAB Platform (RpEGEN) for Studying Regeneration of the Zebrafish Retinal Pigment Epithelium. J. Vis. Exp. (181), e63658, doi:10.3791/63658 (2022).
Download Citation
Reprints and Permissions

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image