コーヒーベリーボーラーハイポテネマスハンペイに対する対照剤および殺虫剤をテストするための方法論
Summary
コーヒー果実(GF)を用いた方法が開発され、コーヒーベリーボーラー(CBB)に対する殺虫剤の毒性を試験した。殺虫剤または有毒物質を、CBBの蔓延の前後に消毒されたGFに適用した。昆虫の死亡率、忌避性、および生殖能力は、他のパラメータに加えて、評価された。
Abstract
コーヒーベリーボーラー(CBB) Hypothenemus hampeiを治療するために殺虫剤を推奨する前に、成虫の昆虫に対するこれらの殺虫剤の死亡率および忌避性、または生殖出力への影響を知ることは貴重である。しかし、現在利用可能な方法は、成人の死亡率のみを評価し、異なる作用機序を有する新規殺虫剤の選択を制限する。この研究では、実験室条件下でのCBBに対する多様な影響を特定するために、さまざまな実験方法を検討した。このために、グリーンコーヒー果実(GFs)を回収し、次亜塩素酸ナトリウム溶液に浸漬し、続いてUV光照射することにより消毒した。並行して、コロニーからのCBB成虫を次亜塩素酸ナトリウム溶液に浸漬することによって消毒した。果実の保護(前科)を評価するために、果実をプラスチック製の箱に入れ、殺虫剤を塗布した。その後、CBB成人はGFあたり2つのCBBの割合で放出された。GFsを制御された条件下で放置し、1、7、15、および21日後のCBBの侵入および生存を評価した。CBBの侵入(侵入後)後の殺虫剤の有効性を評価するために、CBB成虫を21°Cで3時間、2:1の比率でGFsに放出した。 腹部が部分的に露出したCBB成虫を示す寄生果実を選別し、96ウェルラックに入れ、果実に穴を開けたCBBを直接処理した。20日後、果実を解剖し、各果実内のCBB生物学的段階を記録した。GFは、CBBに対する毒性、化学的、生物学的殺虫剤を評価するために、自然条件を模倣する基質として役立った。
Introduction
コーヒーベリーボーラー(CBB)、Hypothenemus hampeiは、コロンビアで1988年に最初に検出され、それ以来、コーヒー作物の最も重要な害虫種となっています。CBBの雌は、出生時の果実をすでに受精させたままにし、彼らが放出する揮発性化学物質によって導かれる新しい果実を探します1,2。完全なサイクルは、25°C (78 °F) の温度で23日以内に3で満たされる。 サイクルは、創始者の女性が種子に浸透し、果実の胚乳に卵を産むことから始まります。閉じた幼虫は種子を食べる。この時点で果実を解剖すると、創設者の女性とその子孫の両方を観察することができます。14日後、幼虫は一般的に蛹になり、蛹期は5日間続きます。成人の段階では、雌は兄弟と交尾し、新しく受精した雌は損傷した果実から飛び立ち、新しいコーヒー果実を探して新しいサイクル4を開始する。
浸透プロセスと幼虫の摂食の結果の両方がコーヒー種子に損傷を与え、コーヒー飲料の品質を低下させ、収益を大幅に減少させる。コーヒー農園での5%を超える侵入は、一般的に経済的閾値と考えられています。
CBB防除は、文化的防除と農業慣行、天然の生物学的薬剤、および安全条件とタイムリーな適用を必要とする化学殺虫剤の使用を含む、統合された害虫管理(IPM)戦略に基づいています4。
CBBの防除のための新しい殺虫剤を評価するには、迅速な結果が得られる低コストの方法論が必要である。殺虫剤が組み込まれたコーヒーを含む人工飼料5,6、または乾燥羊皮紙コーヒー7,8,9に殺虫剤を噴霧することを含む、実験室および現場の両方の手順が現在使用されている。さらに、昆虫学的スリーブで覆われたコーヒーの木の枝を用いて現場で行われた実験が報告されている10,11;しかし、これらの方法は、激しい労力と長い評価期間を必要とします。
自然の畑の状態に似た条件、つまり速くて安価な条件は、緑色または熟したコーヒーフルーツの使用です。しかし、これらの果実は、その品質および特性を維持するために微生物による変質および汚染物質を避けて、CBBを発達させるのに適した条件下で維持されなければならない。この目的のために、異なる消毒剤、ならびに熱および放射線を伴う手順が使用されてきた7、9、12、13、14、15、16。
さらに、CBBに対する殺虫剤評価の方法は、果実を求めて飛行するか、またはそれらの果実に浸透する成虫雌のシミュレーションを必要とする17,18。このために、人工果実の蔓延が現場8、11、19で行われているが、このプロセスは労働集約的であり、環境条件に依存する。
ここでは、フィールド条件に似た制御された環境条件下でCBBに異なる影響を与える可能性のある製品の評価のための標準化された方法論について説明します。
Protocol
Representative Results
Discussion
このプロトコルでは、果物と昆虫の消毒が重要なステップです。畑の果物を実験室で使用すると、微生物やダニが表皮に存在するため、高い汚染と脱水が頻繁に示されます7,15,16。したがって、消毒されていない果物や昆虫を使用すると、細菌や真菌などの微生物によって引き起こされる汚染による昆虫の死を引き起こし?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
著者らは、コロンビアの全国コーヒー生産者連盟、昆虫学部門のアシスタント(ダイアナ・マルセラ・ヒラルド、グロリア・パトリシア・ナランホ)、実験ステーション・ナランジャル、ジョン・フェリックス・トレホスに感謝の意を表します。
Materials
| Beaker with spout, low form 500 mL | BRAND PP | BR87826 | |
| Benchtop Shaker | New Brunswick Scientific Innova 4000 Incubator Shaker | ||
| Dishwashing liquid soap-AXION | Colgate-Palmolive | AXION | |
| Hood; Horizontal Laminar Flow Station | Terra Universal | Powder-Coated Steel, 1930 mm W x 1118 mm D x 1619 mm H, 120 V (https://www.terrauniversal.com/hood-horizontal-laminar-flow-station-9620-64a.html) | |
| Insects CBB | BIOCAFE | (http://avispitas.blogspot.com/p/biocafe.html). | |
| Multi Fold White paper towels | Familia | 73551 | |
| Preval Spray unit | Preval Merck | Z365556-1KT | https://www.sigmaaldrich.com/CO/es/product/sigma/z365556?gclid=Cj0KCQiAweaNBhDEARIsAJ 5hwbfZOy1TWGj6huatFtRQt AzOyHe5-oBiKnOUK2T1exuuk WwJLdvxkvsaAjoYEALw_wcB |
| Reversible Racks 96-Well | heathrowscientific | HEA2345A | https://www.heathrowscientific.com/reversible-racks-96-well-i-hea2345a |
| Scalpel blades N 11 | Merck | S2771-100EA | |
| Scalpel handles N3 | Merck | S2896-1EA | |
| Sodium Hypochloride | The clorox company | Clorox | |
| Stereo Microscope | Zeiss | Stemi 508 | https://www.zeiss.com/microscopy/int/products/stereo-zoom-microscopes/stemi-508.html |
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