여기에서 우리는 Wistar 흰둥이 쥐의 대퇴골 축을 의원 발생 적으로 파괴하고 굳은 살의 발달에 대한 후속 조치를 취하는 프로토콜을 제시합니다. 이 대퇴골 절골술 모델은 연구자들이 골절 치유 과정을 평가하고 약물이 골절 치유에 어떤 영향을 미칠 수 있는지 연구하는 데 도움이 될 수 있습니다.
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이 논문에서
요약
초록
골절 치유는 조골 세포와 파골 세포의 조정 된 작용에 의해 뼈 결함을 재생시키는 생리적 과정입니다. 골동화 작용 약물은 골절 복구를 강화할 가능성이 있지만 높은 비용이나 바람직하지 않은 부작용과 같은 제약이 있습니다. 약물의 뼈 치유 잠재력은 처음에는 시험관 내 연구에 의해 결정될 수 있지만 최종 개념 증명을 위해서는 생체 내 연구가 필요합니다. 우리의 목표는 연구자들이 대퇴골 축 골절 후 굳은 살 형성의 발달을 이해하는 데 도움이 될 수 있고 잠재적 약물이 뼈 치유 특성을 가지고 있는지 여부를 확인하는 데 도움이 될 수 있는 대퇴골 절골술 설치류 모델을 개발하는 것이었습니다. 성체 수컷 Wistar 흰둥이 쥐는 기관 동물 윤리위원회 승인 후 사용되었습니다. 설치류는 마취되었고, 무균 조건 하에서, 대퇴골 축의 중간 1/3에서 완전한 횡단 골절이 개방 절골술을 사용하여 생성되었다. 골절은 골수 내 K- 와이어를 사용하여 축소되고 내부적으로 고정되었으며 2 차 골절 치유가 이루어 졌다. 수술 후 복강 내 진통제와 항생제를 5 일 동안 투여했습니다. 매주 순차적으로 엑스레이를 통해 굳은살 형성을 평가했습니다. 쥐를 방사선 학적으로 미리 결정된 시점을 기준으로 희생 시켰고, 골절 캘러스의 발달은 면역 조직 화학을 사용하여 방사선 학적으로 분석되었습니다.
서론
뼈는 뼈 형성 세포, 조골 세포 및 뼈 흡수 세포인 파골 세포로 구성된 조밀한 결합 조직입니다. 골절 치유는 조골 세포와 파골 세포의 조정 된 작용에 의해 뼈 결함을 재생시키는 생리적 과정입니다1. 골절이있을 때, 골절 부위의 조골 세포 및 파골 세포 활성은 뼈 치유를 결정하는 중요한 요소 중 일부입니다2. 골절 치유가 정상적인 과정에서 벗어나면 지연된 결합, 부결합 또는 비유합이 발생합니다. 골절은 9개월 동안 골절의 유합이 실패하고 최근 3개월 동안 수리가 진행되지 않은 경우 비유합 상태라고 합니다3. 모든 골절의 약 10%-15%는 비유합으로 진행될 수 있는 수리 지연을 경험합니다4. 모든 골절에 대한 비유합률은 5%-10%이며 관련된 뼈와 골절 부위5에 따라 다릅니다.
골절 비유합 치료를 위한 현재 요법은 수술 및/또는 의료 양식을 포함합니다. 현재 골절의 지연 또는 비결합은 뼈 이식과 같은 수술 전략으로 극복할 수 있습니다. 그러나 뼈 이식에는 이식 조직의 가용성, 기증자 부위 통증, 이환율 및 감염과 같은 한계와 합병증이....
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프로토콜
동물 실험은 인도 뉴델리에 있는 AIIMS(286/IAEC-1/2021)에 있는 기관 동물 윤리 위원회(IAEC)의 윤리적 승인을 받은 후 수행되었습니다.
1. 수술 전 절차
- 집 수컷 Wistar 흰둥이 쥐 6-8 주령, 무게는 각각 150-200g 사이이며 중앙 동물 시설 (CAF)에서 별도의 개별 케이지에 있습니다. 이것은 여러 쥐가 새장을 공유 할 때 수술 / 골절 부위 부상을 보장하지 않습니다.
- 상대 습도가 50 % ± 5 % 인 습도가 조절 된 환경에서 쥐를 23 ° C ± 2 ° C의 온도로 유지하고 12 시간의 어둠 / 빛주기에 노출시키고 음식 (표준 반합성 식단) 에 자유롭게 접근 할 수 있도록하십시오 : 펠렛 다이어트 (건조) 및 물. 표준 반합성 식단의 구성은 다음과 같습니다 : 볶은 벵골 그램 가루 (60 %), 밀가루 (22 %), 카제인 (4 %), 탈지유 (5 %), 정제유 (4 %), 전분과의 소금 혼합물 (4.8 %) 및 전분과 비타민 콜린 혼합물 (0.2 %).
- 수술 전 최소 48 시간 동안 쥐를 순응시킵니다.
- 디지털 저울로 각 쥐의 무게를 측정하고 무게를 기록하십시오.
- 수술 시....
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결과
이 연구는 Wistar 알비노 쥐에서 대퇴골 절골술 모델을 개발하기 위해 수행되었습니다. 이 모델은 뼈 치유뿐만 아니라 뼈 치유에서 유망한 골동화 작용의 골 형성 효과를 평가하는 데 사용할 수 있습니다. 표준 수술 예방 조치와 프로토콜을 따랐습니다. 멸균 가운, 커튼 및 수술 장비가 절차에 사용되었습니다(그림 1). 장비(표 1)는 수술 48시간 전에 멸균하였다. 마취제, 진통제 및 항생제는 동물이 항상 통증과 감염이 없도록 유지하기 위해 프로토콜에 따라 사용되었습니다. 혈액 (0.5 mL)은 골절 치유가 발생할 때 기준선 분석 및 다른 매개 변수의 순차적 연대순 비교 후속 조치를 위해 각 쥐의 꼬리 정맥에서 수집 할 수 있습니다. 모발은 제모 크림을 이용하여 옆구리에서 무릎 부위로 제거하였다(도 2). 절골술 절차는 완료하는 데 약 10분이 걸렸습니다(첫 번째 절개에서 봉합까지). 감염과 사.......
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토론
이 방법은 Wistar 알비노 쥐에서 골절 절골술 모델을 개발하는 데 필요한 세부 사항을 명쾌하게 설명합니다. 이 모델은 골절 치유에서 유망한 골동화 작용 약물의 골 형성 효과를 평가하고 뼈 치유의 복잡성을 이해하는 데 사용할 수 있습니다. 이 방법의 두드러진 특징은 간단하고 너무 많은 시간이나 정교한 장비가 필요하지 않다는 것입니다. 이 방법에서는 성체 수컷 Wistar 알비노 랫트를 실험을 위한 설치류 모델로 선정하였다. 성 호르몬과 관련된 뼈 치유에 대한 교란 요인을 제거하기 위해 균일 한 성별이 선택되었습니다.
이 연구는 다른 그룹과 다른 작은 동물 모델11,18,19가 따르는 것과 유사한 개방 절골술 절차를 따랐습니다. 다른 뼈 치유 모델에 비해이 방법에서 따르는 개방 절골술의 장점은 부상 유발 (완전 피.......
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공개 사항
저자 중 누구도 이해 상충이나 기타 재무 공개가 없습니다.
감사의 글
저자는 동종 요법 연구를위한 중앙 협의회 (CCRH), AYUSH 사역, 인도 정부, 연구 자금에 감사드립니다. 저자는 동물 실험에 대한 도움과 지원에 대해 뉴 델리의 AIIMS에있는 Central Animal Facility의 도움과 지원과 지원에 감사하며, 사진 및 비디오 촬영에 대한 도움과 지원에 대해 뉴 델리의 CMET, AIIMS에 감사드립니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 알코올 | 라만 & Weil Pvt. Ltd, 뭄바이, 마하라슈트라, 인도 | MFG/MD/2019/000189 | Sterillium 손 소독제 |
| 동맥 집게 | 네뷸라 수술, 구자라트, 인도 | G.105.05S | 5", 직선 |
| 바드-파커 핸들 | 네뷸라 수술, 구자라트, 인도 | G.103.03 | 사이즈 번호 3 |
| 베타딘 용액 | 윈-메디케어 뉴델리, 인도 | UP14250000001 | 10% w/v 포비돈 요오드 용액 |
| 고양이발 피부 견인기 | Nebula surgical, Gujarat, India | 908.S | Small |
| EDTA | Sisco research laboratories Pvt. Ltd, Maharashtra, India | 43272 | Disodium salt |
| Eosin | Sigma Aldrich, Merck Life Sciences Pvt Ltd, Mumbai, Maharashtra, India | 115935 | 염색 용액 제조용 |
| 펜치 (일반) | 성운 수술, 구자라트, 인도 | 115.06 | 6", 일반 |
| 펜치 (이빨) | 네뷸라 수술, 구자라트, 인도 | 117.06 | 6", 이빨 |
| 포름알데히드 | Sisco 연구소 Pvt. Ltd, 마하라슈트라, 인도 | 84439 | 중성 완충 포르말린을 준비하기 위해 |
| Haematoxylin | Sigma Aldrich, Merck Life Sciences Pvt Ltd, Mumbai, Maharashtra, India | 104302 | 염색 용액 제조용 |
| Hammer | Nebula 수술, 구자라트, 인도 | 401.M | |
| 주입 Cefuroxime | Akumentis Healthcare Ltd, Thane, Maharashtra, India | 48/UA/SC/P-2013 | Cefuroxime sodium IP, 1.5 g/vial |
| 주사 케타민 | Baxter Pharmaceuticals India Private Limited, Gujarat, India | G/28-B/6 | 케타민 염산염 IP, 50 mg/mL |
| 주사 Xylazine | Indian Immunologicals Limited, 하이데라바드, 텔랑가나, 인도 | 28/RR/AP/2009/F/G | 자일라진 염산염 USP, 20 mg/mL |
| 주사 Lignocaine | Jackson laboratories Pvt Limited, 펀자브, 인도 | 1308-B | 2% 리그노카인 하이드로클로라이드 IP, 21.3 mg/mL |
| 주입 트라마돌 | Intas Pharmaceuticals Limited, Ahmedabad, Gujarat, India | MB/07/500 | Tramadol hydrochloride IP, 50 mg/mL |
| K-wire | Nebula 수술, 구자라트, 인도 | 166 (1mm) | 12", |
| K-wire&lrm 삽입을 위한 양단 기계식 드릴 | ; 보쉬, 독일 | 06019F70K4 | GSR 120-LI 전문 |
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| 바늘 홀더 | 성운 수술, 구자라트, 인도 | G.108.06 | 6", 직선 |
| 안과 연고 | GlaxoSmithKline Pharmaceutical Limited, Bengaluru, Karnataka, India | KTK/28a/467/2001 | Neomycin, Polymixin B sulfate 및 Bacitracin 아연 안과 연고 USP |
| Osteotome (chisel) | Nebula surgical, Gujarat, India | 1001.S.10 | 10 mm, 직선 |
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| Reynold' s 가위 | 성운 수술, 구자라트, 인도 | G.110.06S | 6", 직선 |
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| 주사기 및 바늘 (1 mL); | Becton Dickinson India Pvt. Ltd., Haryana, India | REF 303060 | 1 mL 멸균 주사기에는 26 G x 1/2 (0.45 mm x 13 mm) 바늘 |
| 주사기 및 바늘 (2 mL)이 | Becton Dickinson India Pvt. Ltd., Haryana, India | REF 307749 | 24 G x 1'' (0.55 mm x 25 mm) 바늘 |
| 주사기 및 바늘 (10 mL) | 힌두스탄 주사기 & Medical Devices Ltd. 인도 파리다바드 | 334-B(H) | 10mL 멸균 주사기, 21G x1.5"(0.80mm x 38mm) 바늘 |
| 수술용 블레이드(크기 번호 15) | Paramount Surgimed Ltd, 뉴델리, 인도 Medline Industries Inc, 일리노이, 미국 | 참조 MDS15115E | 멸균, 일회용 |
| 수술용 블레이드(크기 번호 24) | Paramount Surgimed Ltd, 뉴델리, 인도 Medline Industries Inc, IL, USA | REF MDS15124E | 멸균, 일회용 |
| 봉합 | Healthium Medtech Pvt Ltd, 방갈로르, 카르나타카, 인도 | SN 3318 | 4-0, 16 mm, 3/8 원형 절단 바늘, 단섬유 폴리아미드 봉합사 |
| 알루미늄 트레이의 왁스 블록 | 현지에서 제작된 | 카탈로그 번호 없음 | 30 cm x 30 cm x 4 cm 알루미늄 트레이에는 왁스가 들어 있습니다 (동물이 미끄러지는 것을 방지하기 위해) |
| X-ray 기계 | Philips India Ltd, Gurugram, Haryana | SN19861013 | 모델: Philips Digital Diagnost R 4.2 |
참고문헌
- Wang, T., Zhang, X., Bikle, D. D. Osteogenic differentiation of periosteal cells during fracture healing. Journal of Cellular Physiology. 232 (5), 913-921 (2017).
- Fakhry, M., Hamade, E., Badran, B., Buchet, R., Magne, D. Molecular me....
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