Blodplatelysater representerer et fremvoksende verktøy for behandling av okulære overflatesykdommer. Her foreslår vi en metode for fremstilling, dispensasjon, lagring og karakterisering av blodplatelysat samlet fra blodplatedonorer.
Ulike okulære overflatesykdommer behandles med blodavledede øyedråper. Deres bruk har blitt introdusert i klinisk praksis på grunn av deres metabolitt og vekstfaktorinnhold, noe som fremmer øyeoverflateregenerering. Blodbaserte øyedråper kan fremstilles fra forskjellige kilder (dvs. donasjon av fullblod eller blodplateaferese), samt med forskjellige protokoller (f.eks. forskjellige fortynninger og fryse / tine sykluser). Denne variasjonen hemmer standardiseringen av kliniske protokoller og dermed evalueringen av deres kliniske effekt. Utdyping og deling av de metodiske prosedyrene kan bidra til å definere felles retningslinjer. I løpet av de siste årene har allogene produkter spredt seg som et alternativ til de autologe behandlingene siden de garanterer høyere effektstandarder; blant dem fremstilles de blodplaterike plasmalysatene (PRP-L) med enkle produksjonsprosedyrer. I transfusjonsmedisinsk enhet ved AUSL-IRCCS di Reggio Emilia, Italia, oppnås PRP-L ved blodplate-aferesedonasjon. Dette produktet fortynnes initialt til 0,3 x 10 9 blodplater/ml (med utgangspunkt i en gjennomsnittlig konsentrasjon på 1 x 10 9 blodplater/ml) i0,9 % NaCl. Fortynnede blodplater fryses/tines og deretter sentrifugeres for å eliminere rusk. Det endelige volumet deles i 1,45 ml aliquots og lagres ved -80 °C. Før de blir dispensert til pasienter, testes øyedråper for sterilitet. Pasienter kan oppbevare blodplatelysater ved −15 °C i opptil 1 måned. Sammensetningen av vekstfaktoren vurderes også ut fra tilfeldig utvalgte aliquoter, og gjennomsnittsverdiene rapporteres her.
Blodavledede produkter er mye brukt i sårpleie1, maxillofacial og ortopedisk kirurgi, og for behandling av forskjellige okulære overflatesykdommer2 som tørr øyesykdom (DED)3. I DED svekkes tårfilmhomeostase som følge av unormal funksjon av ulike faktorer involvert i tåreproduksjon og okulær overflateintegritet 4,5.
DED er preget av heterogenitet i årsaker og alvorlighetsgrad 6,7,8 og kan være en konsekvens av ulike faktorer som aldring, kjønn9, kontaktlinser, aktuelle eller systemiske medisiner 10, eller eksisterende forhold som Sjøgrens syndrom 10. Til tross for å ha milde symptomer, påvirker DED millioner av mennesker over hele verden, noe som påvirker livskvaliteten og helsesystemet også6.
Mange behandlinger er rapportert for denne patologien, men det er fortsatt ingen konsensus om den mest effektive løsningen12. Til dags dato er kunstige tårer den første behandlingslinjen som tar sikte på å gjenopprette den vandige sammensetningen av tårfilmen, selv om disse erstatningene ikke inneholder de viktigste biologisk aktive oppløsningene av naturlige tårer 6,11. Blodplatebaserte produkter anses som et gyldig alternativ12,13 til kunstige tårer, selv om deres kliniske effekt, anbefalinger for bruk og preparatmetoder fortsatt er gjenstand for debatt3.
Blodbaserte produkter deler med tårer en lignende sammensetning når det gjelder metabolitter14, proteiner, lipider, vitaminer, ioner, vekstfaktorer (GF), antioksidantforbindelser 11 og osmolaritet (300 mOsm / L)11. Gjennom den synergistiske aktiviteten til komponentene fremmer de regenerering av hornhinneepitelet, hemmer frigivelsen av inflammatoriske cytokiner og øker antall begerceller og uttrykket av muciner i bindehinden 2,3.
Så langt har heterogenitet i oftalmiske blodbaserte produkter blitt dokumentert i litteraturen; Disse produktene kan klassifiseres i henhold til blodgivernes opprinnelse, dvs. autolog eller allogen, samt blodkilden, dvs. perifert blod, ledningsblod, serum eller blodplater.
Selv om autologe produkter var de mest utbredte3, blir allogene nå det foretrukne valget, siden de sikrer høyere effekt- og sikkerhetsstandarder 15, sammen med en betydelig reduksjon i kostnadene16,17. Tidligere studier viste faktisk at blodbaserte produkter hentet fra pasienter med autoimmune og / eller systemiske sykdommer kan vise endret kvalitet og funksjonalitet 6,16,17. Til tross for at serumbaserte øyedråper er de mest utbredte, er blodplatebaserte produkter nylig blitt bekreftet som et gyldig alternativ, da de lett kan tilberedes samtidig som de opprettholder betydelige nivåer av effekt 3,11. Dagens tilgjengelige blodplatebaserte produkter kan deles inn i blodplaterikt plasma (PRP), blodplaterikt plasmalysat (PRP-L) og plasma rikt på vekstfaktorer (PRGF)3.
Blant dem har PRP-L fordelen av å være et frosset produkt med lang levetid. PRP-L kan fremstilles fra aferese, buffy-strøk, eller til og med fra utløpende blodplater (PLT)18,19, noe som reduserer svinnet verdifullt. Aliquotene kan lagres i flere måneder i blodtransfusjonssentrene ved -80 ° C eller til og med hjemme hos pasienter ved -15 ° C i kortere perioder.
PRP-L er svært beriket i GFs, som har vist seg å stimulere øyeoverflateregenerering 12,20,21. Likevel er det bare få rapporterte kliniske studier på dette området, og alle brukte autologe kilder 3,22. PRP-L trenger fortsatt ytterligere validering og karakterisering før den rutinemessig kan brukes til behandling av øyeoverflatesykdommer, siden det ikke finnes standardiserte retningslinjer for forberedelse, dispensasjon og lagring3.
Her deles en detaljert protokoll for produksjon av PRP-L som brukes ved Transfusjonsmedisinsk enhet i AUSL-IRCCS di Reggio Emilia, Italia, og dispensasjon til pasienter med DED. Vi tar sikte på å hjelpe det vitenskapelige samfunn til å utvikle standardmetoder for fremstilling, noe som kan øke homogenitet og konsistens i verdensomspennende studier og kliniske tilnærminger.
I de senere år har den kliniske bruken av blodplatebaserte produkter for okulære overflatepatologier økt, men deres diffusjon hindres av mangel på vitenskapelig robusthet. Dette skyldes hovedsakelig bred heterogenitet i donorkilder og forberedelsesprotokoller, som ofte ikke er fullstendig avslørt eller ikke spesielt designet for det formål de er dispensert for. Spesielt mangler fortsatt informasjon om blodplatebaserte produkter samlet inn ved aferese. Målet med dette arbeidet var derfor å beskrive den trinnvise b…
The authors have nothing to disclose.
Forfatterne ønsker å takke “Casa del Dono di Reggio Emilia” for å gi donor-avledede blodplatekonsentrater.
Equipments | |||
CompoSeal Mobilea II | Fresenius Kabi, Germany | bag sealer | |
HeraSafe hood | Heraeus Instruments, Germany | Class II biohazard hood | |
MCS+ 9000 Mobile Platelet Collection System | Haemonetics, Italy | automated plasma and multicomponent collection equipment for donating platelet, red cell, plasma, or combination blood components | |
Platelet shaker, PF396i | Helmer, USA | Platelet shaker | |
Raycell X-ray Blood Irradiator | MDS Nordion, Canada | X-ray Blood Irradiator | |
ROTIXA 50RS | Hettich Zentrifugen, Germany | High speed entrifuge | |
Sysmex XS-1000i | Sysmex Europe GMBH, Germany | haemocytometer for platelet count | |
Warm bath, WB-M15 | Falc Instruments, Italy | Warm bath | |
Materials | |||
ACD-A anticoagulant solution A | Fenwal Inc., USA | DIN 00788139 | anticoagulant solution for platelet apheresis (1000 ml) |
BD BACTEC Peds Plus/F Culture vials | BD Biosciences, USA | BD 442020 | Sterility assay |
BD BACTEC Peds Plus/F Culture vials | BD Biosciences, USA | 442020 | At least 2 vials for sterility assay |
BD Luer Lok Syringe | BD Plastipack, USA | 300865 | At least 4 sterile syringes (50 ml) |
Bio-Plex Human Cancer Panel 1 | BioRad Laboratories, USA | 171AC500M | Standard panel for PDGF isoforms assessment |
Bio-Plex Human Cancer Panel 2 | BioRad Laboratories, USA | 171AC600M | Standard panel for EGF assessment |
Bio-Plex MAGPIX Multiplex Reader | BioRad Laboratories, USA | Magpix | This instrument allows multiple immunoassays using functionalized magnetic beads. |
Bio-Plex Pro TGF-b Assay | BioRad Laboratories, USA | 10024984 | Set and standards for TGFb isoforms assessment |
BioRet | ARIES s.r.l., Italy | A2DH0020 | At least 4 piercing spike for blood bags |
Blood collection tube | BD Vacutainer, USA | 367835 | 1 tube, necessary to perform platelet counts |
Eye drops kit. COL Medical Device for the application and preservation of eye drops from haemocomponents | Biomed Device s.r.l., Italy | COLC50 | Eye drops kit. At least 2 kits for each PRP unit collected |
Human Cancer PDGF-AB/BB Set 1x96well | BioRad Laboratories, USA | 171BC511 | Set for PDGF isoforms assessment |
Human Cancer2 EGF Set 1x96well | BioRad Laboratories, USA | 171BC603M | Set for EGF assessment |
NaCl 0.9% sterile solution | Baxter S.p.A., Italy | B05BB01 | 1000 ml |
OSDI Questionnaire | Allergan Inc., USA | OSDI | Ocular Surface Disease Index Questionnaire |
Piercing spike | BioRet ARIES s.r.l., Italy | BS051004 | Spike |
Platelet Additive Solution A+ T-PAS+ | TERUMO BCT Inc., Italy | 40842 | preservative solution for platelet concentrates (1000 ml) |
Software Excel | Microsoft, USA | Excel | Data analysis software |
Teruflex Transfer bag 1000 ml | TERUMO BCT Inc., Italy | BB*T100BM | 1 for PRP dilution |
Teruflex Transfer bag 300 ml | TERUMO BCT Inc., Italy | BB*030CM | At least 6 for each PRP unit collected |