विवो में प्रजनन क्षमता को बढ़ावा देने के लिए माउस रेटिना में संवहनी चोट रीडआउट
Summary
यहां, हम रेटिना वेन रोड़ा (आरवीओ) के अध्ययन में फ्लोरेसिन एंजियोग्राफी (एफए) और ऑप्टिकल समेकन टोमोग्राफी (ओसीटी) छवियों के लिए तीन डेटा विश्लेषण प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं।
Abstract
नेत्र इमेजिंग उपकरणों में प्रगति न्यूरोवास्कुलर चोट के पशु मॉडल के साथ काम करने वाले शोधकर्ताओं तक पहुंच का एक अभूतपूर्व स्तर प्रदान करती है। इस अधिक से अधिक हस्तांतरणीयता का उचित लाभ उठाने के लिए, इन छवियों से मात्रात्मक डेटा खींचने के प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य तरीकों को तैयार करने की आवश्यकता है। ऑप्टिकल समेकन टोमोग्राफी (ओसीटी) इमेजिंग माइक्रोमीटर रिज़ॉल्यूशन पर रेटिना हिस्टोलॉजी को हल कर सकती है और संवहनी रक्त प्रवाह में कार्यात्मक अंतर प्रकट कर सकती है। यहां, हम नॉनइनवेसिव संवहनी रीडआउट को चित्रित करते हैं जिसका उपयोग हम रेटिना नस रोड़ा (आरवीओ) के अनुकूलित माउस मॉडल में संवहनी अपमान के बाद पैथोलॉजिकल क्षति को चिह्नित करने के लिए करते हैं। इन रीडआउट में रेटिना आकृति विज्ञान का लाइव इमेजिंग विश्लेषण, केशिका इस्किमिया के रेटिना आंतरिक परतों (डीआरआईएल) माप का विघटन, और रेटिना एडिमा और संवहनी घनत्व के फ्लोरेसिन एंजियोग्राफी उपाय शामिल हैं। ये तकनीकें क्लिनिक में रेटिना रोग वाले रोगियों की जांच के लिए उपयोग किए जाने वाले लोगों के सीधे अनुरूप हैं। इन विधियों को मानकीकृत करने से नेत्र रोग के नैदानिक फेनोटाइप के साथ पशु मॉडल की प्रत्यक्ष और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य तुलना सक्षम होती है, जिससे संवहनी चोट मॉडल की अनुवाद शक्ति बढ़ जाती है।
Introduction
न्यूरोवास्कुलर रोग इस्केमिक स्ट्रोक के लिए जिम्मेदार एक प्रमुख स्वास्थ्य देखभाल समस्या है, जो मृत्यु दर और रुग्णता का एक प्रमुख कारण है, और रेटिना संवहनी रोग जो दृष्टि हानि 1,2 का कारण बनते हैं। न्यूरोवास्कुलर रोग को मॉडल करने के लिए, हम रेटिना नस रोड़ा (आरवीओ) के एक माउस मॉडल को नियोजित करते हैं। यह मॉडल नॉनइनवेसिव है और नैदानिक सेटिंग में रेटिना संवहनी रोग वाले लोगों की जांच करने के लिए उपयोग किए जाने वाले विवो इमेजिंग तकनीकों में समान उपयोग करता है। इस मॉडल का उपयोग इस प्रकार इस मॉडल का उपयोग करने वाले अध्ययनों की अनुवाद क्षमता को बढ़ाता है। सभी माउस मॉडल के साथ, मॉडल की प्रजनन क्षमता को अधिकतम करना महत्वपूर्ण है।
रेटिना संवहनी रोग 70 वर्ष से कम उम्र के लोगों में दृष्टि हानि का एक प्रमुख कारण है। मधुमेह रेटिनोपैथी3 के बाद आरवीओ दूसरा सबसे आम रेटिना संवहनी रोग है। आरवीओ की नैदानिक विशेषताओं में न्यूरोनल हानि 3,4 के परिणामस्वरूप इस्केमिक चोट, रेटिना एडिमा और दृष्टि हानि शामिल हैं। प्रमुख जहाजों के लेजर फोटोकोग्यूलेशन का उपयोग करके आरवीओ के माउस मॉडल विकसित किए गए हैं और मानव आरवीओ 5,6,7 में देखे गए प्रमुख नैदानिक विकृति को दोहराने के लिए परिष्कृत किए गए हैं। नेत्र इमेजिंग में प्रगति भी मनुष्यों में उपयोग किए जाने वाले गैर-आक्रामक नैदानिक उपकरणों की प्रतिकृति की अनुमति देती है, अर्थात्, फ्लोरेसिन एंजियोग्राफी (एफए) और ऑप्टिकल समेकन टोमोग्राफी (ओसीटी)6। फ्लोरेसिन एंजियोग्राफी रक्त-रेटिना बैरियर (बीआरबी) के टूटने के साथ-साथ रेटिना में रक्त प्रवाह की गतिशीलता के कारण रिसाव के अवलोकन की अनुमति देती है, जिसमें रोड़ा की साइटें शामिल हैं, फ्लोरेसिन के इंजेक्शन का उपयोग करके, एक छोटा फ्लोरोसेंट डाई 8,9। ओसीटी इमेजिंग रेटिना की उच्च-रिज़ॉल्यूशन क्रॉस-अनुभागीय छवियों के अधिग्रहण और रेटिना परतों की मोटाई और संगठन के अध्ययन की अनुमतिदेता है। एफए छवियों का विश्लेषण ऐतिहासिक रूप से काफी हद तक गुणात्मक रहा है, जो अध्ययनों के बीच प्रत्यक्ष और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य तुलना की क्षमता को सीमित करता है। हाल ही में, ओसीटी इमेजिंग में परत मोटाई की मात्रा का परिमाणीकरण करने के लिए कई तरीके विकसित किए गए हैं, हालांकि वर्तमान में कोई मानकीकृत विश्लेषण प्रोटोकॉल नहीं है और ओसीटी छवि अधिग्रहण की साइट11 भिन्न होती है। इन उपकरणों का ठीक से लाभ उठाने के लिए, मानकीकृत, मात्रात्मक और प्रतिकृति डेटा विश्लेषण पद्धति की आवश्यकता होती है। इस पेपर में, हम आरवीओ-फ्लोरेसिन रिसाव, ओसीटी परत मोटाई और रेटिना परतों के विघटन के माउस मॉडल में पैथोलॉजिकल क्षति का मूल्यांकन करने के लिए उपयोग किए जाने वाले तीन ऐसे संवहनी रीडआउट प्रस्तुत करते हैं।
Protocol
Representative Results
Discussion
नॉनविनसिव कृंतक रेटिना इमेजिंग पैथोलॉजी का अध्ययन करने और हस्तक्षेप विकसित करने के लिए एक एवेन्यू प्रस्तुत करता है। पिछले अध्ययनों ने आरवीओ के एक माउस मॉडल को विकसित और अनुकूलित किया है, परिवर्तनशील…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम को नेशनल साइंस फाउंडेशन ग्रेजुएट रिसर्च फैलोशिप प्रोग्राम (एनएसएफ-जीआरएफपी) अनुदान डीजीई – 1644869 (सीकेसीओ को), नेशनल आई इंस्टीट्यूट (एनईआई) 5टी 32 ईवाई013933 (एएमपी के लिए), नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ न्यूरोलॉजिकल डिसऑर्डर एंड स्ट्रोक (आरओ 1 एनएस 081333, सीएमटी को आर03 एनएस 099920), और रक्षा सेना / वायु सेना विभाग (डीयूआरआईपी से सीएमटी) द्वारा समर्थित किया गया था।
Materials
| AK-Fluor 10% | Akorn | NDC: 17478-253-10 | light-sensitive |
| Carprofen | Rimadyl | NADA #141-199 | keep at 4 °C |
| GenTeal | Alcon | 00658 06401 | |
| Image J | NIH | ||
| InSight 2D | Phoenix Technology Group | OCT analysis software | |
| Ketamine Hydrochloride | Henry Schein | NDC: 11695-0702-1 | |
| Phenylephrine | Akorn | NDCL174478-201-15 | |
| Phoenix Micron IV | Phoenix Technology Group | Retinal imaging microscope | |
| Phoenix Micron Meridian Module | Phoenix Technology Group | Laser photocoagulator software | |
| Phoenix Micron Optical Coherence Tomography Module | Phoenix Technology Group | OCT imaging software | |
| Phoenix Micron StreamPix Module | Phoenix Technology Group | Fundus imaging and acquisition targeting | |
| Photoshop | Adobe | ||
| Refresh | Allergan | 94170 | |
| Tropicamide | Akorn | NDC: 174478-102-12 | |
| Xylazine | Akorn | NDCL 59399-110-20 |
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