Burada, zebra balığı (Danio rerio), tükürük ve memeli eti tüketimine karşı alerjik reaksiyonları değerlendirerek alfa-Gal sendromu (AGS) ile ilgili alerjik reaksiyonları ve bağışıklık tepkilerini incelemek için bir model olarak kullanılır.
Keneler, patojen bulaşarak hastalığa neden olan ve ısırıkları dünya çapında insan sağlığını etkileyen alerjik reaksiyonlarla ilişkili olabilecek eklembacaklı vektörlerdir. Bazı bireylerde, glikan Galα1-3Galβ1-(3)4GlcNAc-R’ye (α-Gal) karşı yüksek seviyelerde immünoglobulin E antikorları kene ısırıkları ile indüklenmiştir. Kene tükürüğünde bulunan glikan α-Gal’i içeren glikoproteinler ve glikolipidlerin aracılık ettiği anafilaktik reaksiyonlar, alfa-Gal sendromu (AGS) veya memeli eti alerjisi ile ilişkilidir. Zebra balığı (Danio rerio), farklı patolojilerin incelenmesi için yaygın olarak kullanılan bir omurgalı modeli haline gelmiştir. Bu çalışmada, zebra balığı, α-Gal ve memeli eti tüketimine yanıt olarak alerjik reaksiyonların incelenmesi için bir model olarak kullanılmıştır, çünkü insanlar gibi bu glikanı sentezlemezler. Bu amaçla, Ixodes ricinus kene tükürüğü ve memeli eti tüketimine yanıt olarak davranış kalıpları ve hemorajik anafilaktik tip alerjik reaksiyonlar değerlendirildi. Bu deneysel yaklaşım, AGS de dahil olmak üzere kene kaynaklı alerjilerin incelenmesi için zebra balığı hayvan modelini destekleyen geçerli verilerin gizlenmesini sağlar.
Keneler, hastalıklara neden olan patojenlerin vektörleridir ve aynı zamanda dünya çapında insanların ve hayvanların sağlığını etkileyen alerjik reaksiyonların nedenidir 1,2. Kene beslemesi sırasında, kene tükürüğündeki biyomoleküller, özellikle proteinler ve lipitler, konakçı savunmalarından kaçınarak bu ektoparazitlerin beslenmesini kolaylaştırır3. Glikan Galα1-3Galβ1-(3)4GlcNAc-R (α-Gal) modifikasyonlarına sahip bazı tükürük biyomolekülleri, kene ısırmasından sonra, sadece bazı bireylerde α-Gal Sendromu (AGS)4 olarak bilinen yüksek anti-α-Gal IgE antikor seviyelerinin üretilmesine yol açar. Bu, kene ısırıkları, primat olmayan memeli eti tüketimi ve cetuximab5 gibi bazı ilaçlar için anafilaksi ile sonuçlanabilecek IgE aracılı alerji ile ilişkili bir hastalıktır. α-Gal’e karşı reaksiyonlar genellikle şiddetlidir ve bazen ölümcül olabilir 6,7,8,9,10,11,12,13,14,15.
α-Gal, Eski Dünya maymunları, maymunlar ve α-Gal13’ü sentezleme yeteneğine sahip olmayan insanlar dışındaki tüm memelilerde bulunur. Bununla birlikte, bakteri ve protozoa gibi patojenler, bu glikanı yüzeylerinde eksprese eder, bu da yüksek miktarda anti-α-Gal IgM / IgG antikorlarının üretimini indükleyebilir ve bu patojenlere karşı koruyucu bir mekanizma olabilir16,17. Bununla birlikte, anti-α-Gal antikorlarının üretimi, IgE aracılı anti-α-Gal alerjileri gelişme riskini arttırır 7,13. İnsanlarda, özellikle IgM / IgG alt tiplerinde üretilen doğal anti-α-Gal antikorları, bağırsak mikrobiyotası16’dan bakterilerde bulunan bu modifikasyonla ilişkilendirilebilir. AGS zorlu bir klinik tanı olabilir, çünkü şu anda ana tanı yöntemi, özellikle gıda alerjileri (yani, kaşıntı, lokalize kurdeşen veya anafilaksi, ürtiker ve gastrointestinal semptomlara tekrarlayan anjiyoödem) ile ilişkili gecikmiş alerjik reaksiyonların klinik öyküsüne ve IgE anti-α-Gal antikor seviyelerinin ölçümüne dayanmaktadır9. Mevcut bulgular, kene ısırıklarının AGS 18,19’un ortaya çıkmasında başlıca risklerden birini oluşturduğunu, kene ısırığı 19’u takiben IgE düzeylerinde α-Gal’e 20 kat veya daha fazla bir artış, AGS20,21,22’li hastalarda kene ısırığı öyküsü, AGS hastalarında kene antijenlerine reaktif antikorların varlığı 19, ve anti-α-Gal IgE’nin kene karşıtı IgE seviyeleri19,23 ile güçlü bir şekilde ilişkili olduğunu, ancak hangi biyomoleküllerin gerçekte dahil olduğunu değerlendirmek için daha ileri çalışmalara ihtiyaç duyulduğunu belirtti.
Ek olarak, bir başka olası senaryo, kene ısırıklarına karşı güçlü alerjik reaksiyonlar ve yüksek düzeyde anti-α-Gal IgE antikorları sunan, ancak memeli eti tüketimine toleranslı olan hastalardır12. Bu nedenle, memeli eti alerjisi, kene ısırığı ile ilgili alerjinin belirli bir türü olabilir. AGS ile ilişkili başlıca kene türleri arasında Amblyomma americanum (ABD), Amblyomma sculptum (Brezilya), Amblyomma testudinarium ve Haemaphysalis longicornis (Japonya), Ixodes holocyclus (Avustralya) ve Ixodes ricinus (Avrupa’daki Lyme borreliosis’in ana vektörü)11,24 bulunur.
Kene ısırıkları ile ilgili IgE üretimini değerlendirmek için kullanılan tek model, α-1,3-galaktosiltransferaz nakavt edilmiş (α-Gal KO) fareler25,26 için gen ile genetik olarak değiştirilmiş fare modelidir, çünkü diğer memeliler gibi, fareler de proteinler ve lipitler üzerinde α-Gal eksprese eder ve α-Gal’e IgE üretmez. Bununla birlikte, zebra balığı (Danio rerio), memelilere uygulanan biyomedikal araştırmalar için yararlı bir modeldir, çünkü memelilerle birçok anatomik benzerliği paylaşır ve insanlar gibi α-Gal’i sentezleyemez. α-Gal, zebra balıklarında doğal olarak üretilmediğinden, uygun fiyatlı bir modeldir, manipüle edilmesi kolaydır ve α-Gal ile ilişkili alerjik reaksiyonların incelenmesi için yüksek bir örneklem büyüklüğüne izin verir.
Bu çalışmada, zebra balığı, lokal alerjik reaksiyonları, davranış kalıplarını ve tükürük26,27 kene ve müteakip memeli eti tüketimine karşı perkütan sensitizasyona yanıt ile ilişkili moleküler mekanizmaları karakterize etmek ve tanımlamak için model bir organizma olarak kullanılmıştır. Bu amaçla, balıklar intradermal enjeksiyon ile kene tükürüğüne maruz bırakılır ve daha sonra α-Gal27 içeren hayvan kullanımına uygun memeli eti türevi ürünler içeren köpek yemi ile beslenir, daha sonra olası ilişkili alerjik reaksiyonlar değerlendirilir. Bu yöntem, alerjik süreçlerle ilgili diğer biyomoleküllerin, özellikle AGS ile ilgili olanların incelenmesine uygulanabilir.
Zebra balığı, bağışıklık tepkisinin moleküler mekanizmaları, patojen hastalıkları, yeni ilaç testleri ve enfeksiyonlara karşı aşılama ve korunma çalışmaları için çok uygun bir araç olan uygun maliyetli ve kullanımı kolay bir modeldir33,34,35. Zebra balıklarının davranışları üzerine yapılan çalışma yararlıdır, çünkü önceki çalışmalar bazı balık türlerinin stresli olduklarında tank…
The authors have nothing to disclose.
SaBio grubu üyelerine, balık deney tesisi ile deneysel tasarımdaki işbirlikleri ve teknik yardımları için ve Juan Galcerán Sáez’e (IN-CSIC-UMH, İspanya) zebra balığı sağladığı için teşekkür ederiz. Bu çalışma Ministerio de Ciencia e Innovación/Agencia Estatal de Investigación MCIN/AEI/10.13039/501100011033, İspanya ve AB-FEDER (Grant BIOGAL PID2020-116761GB-I00) tarafından desteklenmiştir. Marinela Contreras, Ministerio de Ciencia, Innovación y Universidades, İspanya tarafından IJC2020-042710-I hibesi ile finanse edilmektedir.
1.5 mL tube | VWR | 525-0990 | |
All Prep DNA/RNA | Qiagen | 80284 | |
Aquatics facilities | |||
BCA Protein Assay Kit | Thermo Fisher Scientific | 23225 | |
Disection set | VWR | 631-1279 | |
Dog Food – Red Classic | Acana | ||
ELISA plates-96 well | Thermo Fisher Scientific | 10547781 | |
Gala1-3Gal-BSA 3 (α-Gal) | Dextra | NGP0203 | |
iScript Reverse Transcription Supermix | Supermix | 1708840 | |
Microliter syringes | Hamilton | 7638-01 | |
Plate reader | any | ||
Phosphate buffered saline | Sigma | P4417-50TAB | |
pilocarpine hydrochloride | Sigma | P6503 | |
Pipette tip P10 | VWR | 613-0364 | |
Pipette tip P1000 | VWR | 613-0359 | |
Premium food tropical fish | DAPC | ||
Sponge Animal Holder | Made from scrap foam | ||
Stereomicroscope | any | ||
Thermal Cycler Real-Time PCR | any | ||
Tricaine methanesulphonate (MS-222) | Sigma | E10521 |