In Vitro Selection of Engineered Transcriptional Repressors for Targeted Epigenetic Silencing

00:05Introduction
01:34Engineering a Fluorescence-Based Reporter Cell Line
03:10Designing gRNAs for CRISPR/dCas9-Based Epigenetic Silencing of Target Gene
04:13Arrayed Transient Delivery of CRISPR/dCas9-Based ETRs in Reporter Cell Line
07:19Analyzing Transcriptional Activity of Target Gene Over Time
08:11Results: dCas9 ETR-Mediated Epigenetic Silencing of Human B2M Gene by gRNAs
09:23Conclusion

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Nous présentons ici un protocole pour la sélection in vitro de répresseurs transcriptionnels modifiés (ETR) avec une efficacité de silençage élevée, à long terme, stable et sur cible et une faible activité hors cible à l’échelle du génome. Ce flux de travail permet de réduire un répertoire initial et complexe de RTE candidats à une liste restreinte, adaptée à une évaluation plus approfondie dans des contextes thérapeutiquement pertinents.

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In vitro Sélection de répresseurs transcriptionnels modifiés pour le silençage épigénétique ciblé

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