Method Article

쥐의 경골 신경종 전위 모델의 수술 및 행동 테스트

DOI:

10.3791/64659

⸱

January 6th, 2023

 ,  ,  , 
1Department of Plastic and Reconstructive Surgery, University Medical Center Utrecht, Utrecht University, 2Axogen, 3Center for Translational Immunology, University Medical Center Utrecht, Utrecht University

In This Article

Summary

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이 프로토콜은 경골 신경의 병변과 근위 신경 말단이 피하 경골 전치 또는 측면 위치로 전이되는 것을 수반하는 경골 신경종 전이 모델을 설명합니다. 신경종 통증 및 족저통각과민의 행동 검사는 Von Frey 모노필라멘트를 사용하여 정량화됩니다.

Abstract

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경골 신경종 전위(TNT)는 신경종 부위(경골 신경)의 이질통이 온전한 비골 신경에 의해 신경분포된 뒷발의 발바닥 표면에서 이질통과 독립적으로 평가될 수 있는 쥐 모델입니다. 이 TNT 모델은 클리닉에서 이미 사용되고 있는 특정 수술 요법의 잠재적 우월성과 같은 신경종 통증 치료법을 테스트하거나 동일한 동물의 두 통증 양식에 대한 신약 및 그 효과를 평가하는 데 적합합니다. 이 모델에서는 경골 신경에 원위 병변(신경망)이 만들어지고 근위 신경 말단이 전치되고 피하 및 경골로 고정되어 15g Von Frey 모노필라멘트로 신경종 부위를 평가할 수 있습니다. 비복 신경에 대한 이질통을 평가하기 위해 Von Frey 모노필라멘트는 뒷발의 발바닥 측면 영역에서 상하 방법을 통해 사용할 수 있습니다. 경골 신경을 절단한 후 수술 후 1주일 이내에 신경종 부위에 기계적 과민증이 발생하고 수술 후 최소 12주까지 지속됩니다. 비복 신경 분포 발바닥 표면의 이질통은 반대쪽 사지에 비해 수술 후 3주 이내에 발생합니다. 12 주에 절단 된 경골 신경의 근위 끝에 신경종이 형성되며, 축삭의 분산과 소용돌이로 나타납니다. TNT 모델 수술의 경우 여러 중요한 (미세) 수술 단계를 따라야 하며 말기 마취 하에 일부 수술 실습이 권장됩니다. 예비 신경 손상 모델과 같은 다른 신경병성 통증 모델과 비교하여 신경종 부위에 대한 이질통은 TNT 모델에서 비뇨 신경 과민증으로부터 독립적으로 테스트할 수 있습니다. 그러나 신경종 부위는 생쥐가 아닌 쥐에서만 검사할 수 있습니다. 이 프로토콜에 제공된 팁과 지침은 통증에 대해 연구하는 연구 그룹이 시설에서 TNT 모델을 성공적으로 구현하는 데 도움이 될 수 있습니다.

Introduction

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단순한 열상에서 사지 전체 절단에 이르기까지 다양한 상처에는 다양한 정도의 말초 신경 손상이 동반됩니다. 이러한 신경 손상은 발아 신경 섬유의 무질서한 얽힘인 신경종의 형성을 초래할 수 있습니다. 신경종은 환자의 8%-30%에서 통증이 나타나 삶의 질에 심각한 영향을 미칩니다 1,2,3,4,5. 사지 절단 후, 신경 종 통증은 환자의 50 %에서 발생합니다 6,7,8. 보고된 증상으로는 압통, 자발성 통증, 이질통, 통각과민, 신경분포 부위의 기계적 또는 열적 과민증등이 있다 9. 1년 이내에 적절하게 치료하지 않으면 신경종 통증이 만성 통증 상태로 진행되어 높은 사회적 부담과 관련 의료 비용이 발생할 수 있습니다10,11,12,13,14

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Protocol

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본 연구는 IVD(Instantie voor Dierenwelzijn Utrecht) 및 동물 연구 가이드라인(프로젝트 번호 AVD1150020198824)에 따라 수행되었다.

1. Von Frey 기준선 측정

  1. 수술 전에 아래 섹션 5 및 섹션 6에 설명된 Von Frey 테스트 절차에 따라 기본 측정을 수행합니다.

2. 마취 및 준비

참고: 이 연구는 생후 15주령의 수컷 Sprague Dawley 쥐 12마리를 대상으로 수행되었습니다.

  1. 5% 이소플루란으로 유도하여 동물을 마취시키고 2%-3% 이소플루란으로 마취를 유지합니다.
    알림: 2% 이소플루란으로 유지하면 일반적으로 기관 삽관이나 기계적 환기 없이 충분한 마취와 자발 호흡이 가능합니다.
  2. 핀셋으로 발을 꼬집어 동물의 반사 신경을 확인하십시오. 계속하기 전에 동물이 반응하지 않는지 확인하십시오. 전기 면도기로 무릎에서 발목까지 수술 부위를 면도하고 안과 연고를 눈에 바르면 건조를 예방할 수 있습니다. 진통제 카르프로펜 0.5mg/kg을 복부에 피하 주사한다.

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Results

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신경종 부위에서의 평가는 15g von Frey 모노필라멘트의 적용에 대한 민감도가 증가한 것으로 나타났습니다. 기준선에서 쥐는 일반적으로 15g 모노필라멘트의 25회 적용 중 10%-15%(± 13%)에 반응했습니다. 반응률은 TNT 수술 1주일 후 45%-50%(± 24%)로 증가했습니다. 반대쪽 측면에서 수술 후 반응 수는 기준선에서의 반응 수와 유사했습니다(그림 2A). 쥐의 약 20 %는 고통스러운 신경종을 일으키지 않았습니다. 응답률은 기준선에 비해 증가하지 않았습니다(그림 2B). 이것은 신경종 형성 후 모든 환자 (절단 후 50 %)가 통증을 유발하지 않는 인간의 상황과 비슷합니다. 모든 쥐는 수술 후 12주 후에 절제되고 전치된 경골 신경 그루터기의 끝에서 신경종이 발생했습니다(그림 3). 이 신경종은 콜라겐 침착 내에서 소용돌이치는 축삭과 미세다발이 특.......

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Discussion

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프로토콜의 중요한 단계
TNT 모델은 경골 신경을 절단하고 측면 및 피하로 경골 전 위치로 전치하여 비복 신경에 대한 발바닥 통각과민 외에도 신경종의 민감도 테스트를 가능하게 합니다. TNT 모델에서는 신경종의 위치를 연구자가 볼 수 있어야합니다. 따라서 피하 봉합사가 피부를 통해 쉽게 보이고 봉합사의 색이 짙은 파란색 또는 검은 색이어야하기 때문에 알비노 쥐 균주가 바람직합니다.

수술이 진행되고 경골 신경이 노출되면 경골 신경의 분기점의 위치(예: 근위 또는 원위)에 변화가 있습니다. 쥐가 근위 분기점을 가지고 있는 경우, 하나의 경골 신경(그림 5B) 대신 발목 근위부에 있는 두 개의 신경(내측 및 외측 족저신경)을 찾을 수 있습니다(그림 5A). 비복 신경에 발바닥 통각과민을 유도하기 위해 두 가지를 모두 자르고 전치하는 것이 중요합.......

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Disclosures

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저자는 이해 상충이 없다고 보고합니다. 이 연구 작업은 Axogen에서 부분적으로 자금을 지원했지만 회사는 연구 실행 및 결과에 영향을 미치지 않았습니다.

Acknowledgements

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현미경과 수술실을 준비하고 동물을 돌보는 데 도움을 준 미세 수술을 도와준 Sabine Versteeg와 Common Animal Laboratory(Gemeenschappelijk Dieren Laboratorium)의 Anja van der Sar와 Trudy Oosterveld-Romijn에게 감사드립니다.

이 연구는 Axogen의 자금 지원을 받았습니다.

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
AesthesioLinton Instrumentation514007 5140150.6 g 15 g 모노 필라멘트
Carprofen지역 수의학 약국해당 없음지역 수의학 약국은 카프로펜 희석을 만듭니다
면봉Nobamed974255
ElectrocacesseryFine Science Tools18010-00
에탄올 70 %Interchema BV
Ethilon 4.0존슨 & Johnson1854G중요: 색상은 파란색 또는 검은색이어야 합니다
. Ethilon 8.0Johnson & JohnsonBV130-5
Isoflo, isoflurane ZoetisDechra Veterinary ProductsB506
메시 바닥 케이지StoeltingCo57816 및 57824
마이크로 펜치파인 사이언스 도구11251-35
마이크로 바늘 홀더 Fine Science Tools12076-12
Micro ScissorsFine Science Tools15019-10
Micro TweezersFine Science Tools11254-20
NaCl 0.9%TrademedH7 1000-FRE
바늘 홀더Fine Science Tools12004-16
안과 연고 지역 수의학 약국n/a지역 수의학 약국은 안과 연고
메스Fine Science Tools10003-12
가위Fine Science Tools14001-12
스테레오 수술 현미경LeicaA60 F
구멍이 있는 멸균 시트Evercare OneMed1555-01
수술용 칼날을 만듭니다. nr.15정밀 과학 도구10015-00
핀셋정밀 과학 도구11617-12
까지 400406

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Stokvis, A., vander Avoort, D. J., van Neck, J. W., Hovius, S. E., Coert, J. H. Surgical management of neuroma pain: a prospective follow-up study. Pain. 151 (3), 862-869 (2010).
  2. Domeshek, L. F., et al. Surgical treatment of neu....

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