연구 세포 배양 실험실에서 곰팡이 및 박테리아에 의한 오염을 방지하기 위한 세포 배양 기술 및 관행

요약

이 프로토콜은 곰팡이 및 박테리아에 의한 오염을 피하기 위해 연구 세포 배양 실험실에서 사용되는 필수 세포 배양 기술 및 관행을 제시합니다. 박테리아 범주 내에서 마이코플라스마 오염 방지에 특히 중점을 둘 것입니다.

초록

세포 배양은 통제된 환경에서 인간, 동물 및 곤충 세포 또는 기타 조직을 성장시키는 데 필요한 섬세한 기술입니다. 이 프로토콜의 목표는 곰팡이와 박테리아의 오염을 방지하기 위해 실험실에서 사용되는 올바른 기술을 강조하는 것입니다. 마이코플라스마 오염을 피하는 데 특히 중점을 두고 있는데, 이는 마이코플라스마의 크기가 작고 세포 배양에 사용되는 대부분의 항생제에 대한 내성으로 인해 세포 배양실의 주요 관심사입니다. 이러한 동일한 기술은 지속적인 성장을 보장하고 건강한 세포를 유지합니다. 신규 및 숙련된 세포 배양 사용자 모두에게 오염 위험을 완화하기 위해 이러한 모범 사례를 일관되게 준수하는 것이 중요합니다. 일년에 한 번, 실험실은 세포 배양 모범 사례를 검토하고 필요한 경우 토론 또는 추가 교육을 통해 후속 조치를 취해야 합니다. 애초에 오염을 방지하기 위한 조기 조치를 취하면 오염이 발생한 후 청소하는 것과 비교하여 시간과 비용을 절약할 수 있습니다. 보편적인 모범 사례는 세포 배양을 건강하게 유지하여 새로운 세포를 지속적으로 해동하고, 값비싼 세포 배양 배지를 구매하고, 인큐베이터 오염 제거 및 가동 중지 시간을 줄여야 할 필요성을 줄입니다.

서론

세포 배양은 연구실에서 많은 용도로 사용됩니다. 20세기 초 세포 배양의 기원 이후, 세포주는 과학을 발전시키는 데 도움이 되었습니다. 세포주에는 몇 가지 장점이 있습니다. 다양한 세포주는 연구자들이 세포 생물학을 연구하거나, 추가 연구를 위해 바큘로바이러스를 생산하거나, 관심 있는 단백질을 대량으로 생산하는 데 도움이 될 수 있습니다¹. 일부 추가 용도로는 조직 성장 연구, 백신 개발 촉진, 독성학 연구, 건강한 유기체 및 질병 모델에서 유전자의 역할 연구, 하이브리드 세포주^{생산 등이} 있습니다 ^2,3. 세포주는 또한 약물 생산을 가능하게 할 수 있다³. 세포주로 작업할 때 적절한 무균 기술이 필요합니다. 이 원고에 요약된 관행과 기술은 세포 배양 작업이 수행되는 연구 실험실에 적용할 수 있습니다. 다른 실험실 설정은 논의되지 않습니다.

오염은 종종 세포 배양 작업을 수행할 때 주요 관심사입니다. 이 논문의 맥락에서 오염은 일반적으로 곰팡이와 박테리아를 의미합니다. 이 백서에 설명된 방법의 전반적인 목표는 오염을 방지하기 위한 모범 사례를 철저히 설명하는....

프로토콜

1. 준비

1. 일반
   1. 세포 배양실에서만 착용하고 실험실의 다른 부분에서는 착용하지 않도록 지정된 깨끗한 실험실 코트를 착용하십시오.
      참고: 실험복은 멸균 상태일 필요가 없습니다.
   2. 다른 표면에 닿지 않은 새 장갑을 착용하십시오. 장갑이 단단히 끼워졌는지 확인하십시오. 니트릴, 파우더가 없는 장갑이 가장 좋습니다.
      알림: 장갑은 멸균 상태일 필요가 없습니다.
   3. 작업을 준비하려면 장갑, 실험복 슬리브 및 생물 안전 캐비닛 내부에 70% EtOH를 뿌립니다. 보푸라기가 없는 종이 타월로 작업 표면과 유리 패널을 닦아냅니다.
      참고: 70% EtOH를 사용하면 가장 높은 효율로 박테리아를 죽일 수 있습니다¹⁶. 종이 타월은 멸균 될 필요가 없습니다.
   4. 세포 배양실 내부에 수조를 보관하고 배양 배지를 데우거나 세포를 해동하는 데만 사용하십시오. 제조업체의 청소 지침에 따라 일주일에 한 번 수조를 배수하고 씻으십시오.
2. 생물 안전 캐비닛 내부
   1. 캐비닛에 반입하는 품목의 수를 제한하십시오. 전면 또는 후면 그릴을 막아 생물 안전 캐비닛 내부의 공기 흐름을 방해하지 마십시오.
      주: 캐비닛....

결과

이 백서에 설명된 적절한 세포 배양 기술과 관행을 따르지 않으면 연구 세포 배양 실험실에서 곰팡이 및 박테리아에 의한 오염이 발생할 수 있습니다. 그림 2 는 현탁액과 부착 배양 모두에서 오염을 포함하는 플라스크를 보여줍니다.

무균 기술을 따르지 않으면 2-3일 후에 곰팡이 오염이 발생할 수 있습니다. 매체에 떠 있는 둥근 퍼지 볼은 현탁 세포에서 눈에 띄는 반면, 부착된 세포에서 곰팡이 성장은 크고 불규칙하며 흰색 또는 녹색 패치로 관찰될 수 있습니다.

박테리아의 경우 다음날 오염이 관찰됩니다. 미디어는 난류, 흰색, 흐림입니다. 흰색은 세포주보다 훨씬 빠르게 증식하는 박테리아 세포의 전형입니다. 숙련 된 눈은 오염되지 않은 미디어와 오염 된 미디어의 차이점을 알 수 있습니다. 부착 된 세포의 경우 개봉하지 않은 배지 병을 플라스크와 비교하여 플라스크에 난류가 보이는지 확인할.......

토론

오염은 세포 배양 작업을 수행할 때 주요 관심사 중 하나이지만, 이 원고에 요약된 관행과 기술은 위험을 완화하는 데 도움이 될 것입니다. 중요한 단계에는 세포 배양실에서만 사용되는 깨끗한 실험실 코트 착용, 70% EtOH가 자주 분사되고 세포주 간 전환 시 교체되는 깨끗한 분말 없는 장갑 사용, 각 개인이 배지 병을 공유하지 않도록 권장, 작업 완료 전후에 캐비닛을 철저히 청소하는 것이 포함됩니다. 혈청학적 피펫의 포장을 깔끔하게 풀고, 열린 병이나 플라스크와의 장기간 밀접한 접촉을 피하고, 여러 세포주 간에 배지 병을 공유하지 않고, 인큐베이터 도어를 빠르게 열고 닫습니다. 또한 자신의 유리 제품을 세척하고 고압 증기 멸균하여 품질 관리를 보장하여 외부 오염 물질이 유입 될 가능성을 줄입니다. 품질 관리 방법에는 오토클레이브 테이프를 사용하여 멸균기가 121°C의 적절한 온도에 도달했는지 표시하고, 장비를 정기적으로 예방 유지 관리하고, 플라스크가 제대로 문질러졌는지 육안으로 검사하는 것이 포함됩니다

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
DPBS	Gibco	14-190-144
DMEM F-12 미디어	ATCC	30-2006
유리 배플 플라스크	Pyrex	09-552-40
유리 피펫	피셔	13-678-6B
피펫 에이드	드러먼드	13-681-15A
혈청학적 피펫	Corning	07-200-573
T75 플라스크	Corning	07-202-004
Trypsin	Gibco	25-300-054
*이 비디오는 일반적인 세포 배양 기술에

관한 것이므로 항목이 다를 수 있습니다.